ORSAY
Siri, A
N° D'ORDRE : 206
THÊSE
"
PAR
SENSIBILISA'TION DU MYOCARDE DE RAT
A. L' 1NCQRPORATION DE L'ACIPE [14-14C] ERUCIQUE
OU "DE L'ACIDE [1Q_14C] OLEIQUE
'APRES INGESTION D'HUILE DE COLZA
. SOUT2NUELE
21
DECEMBRE
1973
DEVANT
LA
COMMISSION
D'EXAMEN
MM. E.CDRABDEUF
PRESIDENT
F. CHEVALLIER
,EXAMINATEUR
Mme ~. RAULIN
EXAMINATEUR

---

SENSIBILISATION DU MYOCARDE DE RAT A L'INCORPORATION
14
DE L'ACIDE {14_
C} ERUCIQUE OU DE L'ACIDE {10_14 C} OLEIQUE
APRES INGESTION D'HUILE DE COLZA
1
,
,
l
1
~
Pierre Milagnawoé KETEVI
Ingénieur Agronome
Ingénieur ESACG
Equipe de Lipophysiologie - ER 91 du C.N.R.S.
U 56 I.N.S.E.R.M.
Hôpital de Bicêtre
94270 - LE KREMLIN-BICETRE

---

1
A Nina BRUCE, mon épouse
A ma fille
i
1
1
1
t
fl

---

A Madame J. RAUL IN , Maître de recherches au CNRS, je voudrais
exprimer ma profonde reconnaissance. Elle m'a accueilli au sein de
l'Equipe de recherches dont elle est responsable me faisant bénéficier
ainsi d'excellentes conditions de travail pour la préparation de cette
thèse. Pendant toute la réalisation de ce travail, de l'expérimentation
à la rédaction, elle fut pour moi un guide constant. Elle m'a toujours
témoigné sa bonté et sa grande générosité. Qu'elle me permette de lui
présenter mes très sincères remerciements et mes sentiments de profonde
gratitude.
Monsieur le Professeur E. CORABOEUF m'a fait l'honneur d'accepter
la présidence du jury de cette thèse, je l'en remercie très vivement.
Monsieur le Professeur F. CHEVALLIER m'a accordé sa confiance en
assurant la direction de cette thèse. Je lui suis très reconnaissant pour
l'intérêt qu'il a porté à ce travail. Malgré ses nombreuses occupations,
il a bien voulu se charger de la tâche de rapporteur et de faire partie
de mon jury. Qu'il veuille bien trouver ici l'expression de ma gratitude.
l
Je remercie Monsieur le Professeur D. ALAGILLE de m'avoir permis
de réaliser ce travail dans son unité de recherches.
Mes remerciements vont à tous les membres de l'ER 91 du CNRS pour
leur souriante et amicale collaboration et pour l'ambiance sympathique
dans laquelle j'ai réalisé cette thèse.
Madame D. LAPOUS m'a apporté une aide efficace pour la réalisation
expérimentale de ce travail, je lui présente mes chaleureux remerciements.
De tous les membres de l'Equipe de recherches je garde un très bon
souvenir.
Que Monsieur R. GARNIER veuille trouver ici mes remerciements pour
la partie photographique de ce travail.
Je tiens à remercier tout spécialement Monsieur R. FERON, Directeur
Scientifique de la Société ASTRA-CALVE, ainsi que Monsieur P. CARRIERE,
Vice-Président de la Fédération de l'Industrie des Corps Gras~ de l'aide
substantielle qu'ils m'ont accordée et sans laquelle je n'aurais pu envisa-
ger l'impression de cette thèse.

---

A B R E V lAT ION S
-1-1-1-1-1-1-1-1-
AS
Activité spécifique
RAS
Radioaotivité spéoifique
o
Huile d' 01 ive
C
Huile de colza
OL~
Aoide
14
(10_
C] oléique
ER~
Acide
14
[14_
C] éruoique
0 + OL~
Huile d' olive + Acide [10_14cJ oléique
0 + ER~
Huile d' olive
14
+ Acide [14-
eJ éruoique
C + ER~
Huile de oolza + Acide (14- 14i} érucique
C + OL~
Huile de oolza + .lcide [1O_14C] oléique
DNA
.lcide désoxyribonucléique
NA
Noradrénaline

---

l N T n 0 DUC T ION
En 1955, THOMASSON (1) cherchant à préciser l'effi-
cacité nutritionnelle d'une vingtaine de matibres grasses,
constate que l'administration d'huile de oolza entraine une
inhibition de la oroissance pondérale du rat.
En 1960, les travaux de certains cheroheurs finlandais,
nOINE, UKSlLA, TEIR et RAPOLA (2) indiquent que l'administration
au rat ou au poro, de régimes riches en huile de colza (50 à
70 ~ des oalories du régime) provoque
rapidement l'apparition
d'une ~ooardite. Par la suite ROCQUELIN et CLUZAN (3) en
Franoe,
VLES et ABDELLATIF (4) en Hollande,
BEARE-ROGERS
et 0011 (5) au Canada, oonfirment et complètent cette première
observation.
l - NATURE DES PHENOMENES OBSERVES
1) As~eoiB histologiques
En faisant ingérer au jeune rat BeTré un régime
expérimental oontenant de 15 à 25 p.100 en poide(30 à
50 p.100 en valeur oalorique) d'huile 4e oolza riohe en
acide érucique, le. auteurs observent dbs le premier jour
la présenoe de gouttelettes lipidiques dans le ~ooarde
partioulièrement oonoentrées au niveau des fibres musoulaires
rouges. Cette aocumulation de lipides est portée à son
maximum entre le troisième et le septième jour d'expérienoe.
La teneur en lipides totaux du muscle oardiaque du rat a~teint

---

-
2 -
ainfli en une semaine des valeurs tI'ois à quatre fois plus
élevées que les proportions habituelles (6) (7). A l'autopsie
et par simple observation à J'oeil nu, on découvre un coeur
bien plus pâle qu'il n'est coutume (8).
Si l'on poursujt l'expérience, on observe 1
Une régressiun de la Jipidose ;
L'apparition de lésions des fibres myocardiques
et du tissu interstitiel (3) (9). On i~nore la durée d'admi-
nistration minimum qui conduit à ces Eymptômes mais on sait
qu'après 6 mois d'un régime à 15 p.100 d'huile de colza,
11s sont irréverliibles (Compte-rendu ATP 61.N.S.E.R.M.,
1973) (10). La fréquence des lésions est plus élevée chez
les mâles (80 à 90 p.100 des rats examinés) que chez les
femelles (70 p. 100) 0). Lorsque l'huiJe de colza est admi-
nistrée pendant un court l~ps de temps (8 jours), puis
remplacée par une huile d'arachide, les lésions n'apparais-
sent pas.
2) Aspects biochimiques
HOUTSMULLER (11) constate au bout de 3 jours que la
fraction triglycéride
est spécialement accrue (x 10) alors
que les acides gras libres augmenient dans une moindre pro-
portion (x 2.4). Selon BEARE-ROGERS et 0011 (12) la teneur
en phospholipides varie ou diminue même légèrement aveo le
temps.
Les travaux de ROCQUELIN et coll (6) d'une part, et
ceux de THOMASSON et coll (13) d'autre part, montrent que
lorsqu'on atteint le maximum d'acoumulation de. lipides dans
le myocarde, l'acide érucique représente 25 à 40 p.100 des
acides gras totaux, l'acide eicosamonoénoique 7 à 10 p.100.
Ensuite, chez le jeune rat et parallèlement à la régres~ion
de la stéatose, on observe une diminution lente de la teneur

---

- 3 -
1
en acide érucique du myocarde qui n'est pas complètement
t
éliminé m~me après 39 jours de régime. A ce stade on
t
[
1
trouve encore 15 p.100 d'acide érucique dans les lipides
tl,
cardiaques (12). Chez les rHts âgés de 4 semaines en début
d' expéri ence et recevant de l' hui] e de col7.a pendant 60
jours (30 p.100 des calories), ROCQUELIN, MARTIN et CLUZAN
(14) constatent que l'acide érucique figure encore à raison
de 1 à 8 p.100 dans les lipides du coeur.
II - OONDTTIONS EXPERIMENTALES D'OBTENTION DU PHENOMENE
OBSERVE.
1) Influenoe de la variété de colza.
Jusqu'à présent la majorité des études biochimiques
1
et physiopathologiques ont été effectuées en testant trois
sortes d'huilesJt: :
1
t
- une huile de colza européenne riche en aoide éru-
!
ci.que (45 à )0 p.100 des acides gras totaux) ,
- une huile de oanbra (Canadian Brassica) provenant
de graines de colza sélectionnées au Canada pour leur faible
teneur (2 à 3 p.100) en acide érucique ;
- une huil e "INRA érucique 0" di te hui] e "primar"
provenant de graines sélectionnées en France et pratiquement
dénuée d'acide érucique.
L'accumulation très précoce de lipides et les lésions
du myocarde ont été mises en évidence de façon indiscutable
après administration d'huile de colza. Bien que ROCQUELIN et
CLUZAN (3), ROCQUELIN et coll (9) ne décèlent ohez le rat
âgé de 3 à 13 mois aucune li.pidose après avoir distribué de
Jt:
Le terme huile de oolza s'applique uniquement aux huiles
riches en acide érucique.
1
1

---

- 4 -
l'huile de canbra, ils observent néanmoins des lésions du
myocarde avec une fréquence cependant plus faible qu'avec
l'huile de colza.
Les premiers résultats obtenus aur rats avec l'huile
"INRA drucique 0", ont montr' une lipidose plus iwportante
qu'avec l'huile de canbra raffinée (10).
2) Influence de la dose d'huile du régime
On a cherché à déterminer la dose minimale d'huile
au-dessous de laquelle on n'obtient aucune perturbation du
myocarde. Le problème est évidemment complexe et la stéatose
à court terme peut s'observer dans le myocarde du rat pris au
sevrage avec des proportions variées d'huile de colza.
Selon ABDELLATIF et VLES (4) l'accumulation de lirides
s'observe encore chez le rat Sprague Dawley qui reçoit 35 p.100
des cal od es sous fOI'1I18 d' hui le de tournesol et 5 p.100
seulemer.t sous forme d'hune de colza (à 45 p.100 d'acide
érucique~ En utiliHant une huile de colza à 29 p.100 d'acide
érucique BEARE-ROGERS et coll (12) obtiennent la lipidose
du myocarde avec un régime à 40 p.100 de matières grasses
dont 20 p.100 des c&10ri8s sous forme d'huile de colza sur
des rats Charles Rivers SPF.
Lorsque l'tuile de colza est administrée avec l'huile
d'olive et l'huile de carthame, ABDELLATIF et VLES (15)
observent les m~mes effets physiopathologiques chez le
caneton. Lorsque le régime contient de l'acide érucique sous
forme de triérucine, ROCQUELIN et coll (14) ainsi qu'ABDELLATH'
et VLES (4,16), observent les m~mes modifications du myocarde.
3) Influence de l'espèce animale et de l'ige
On a cherché à savoir ai les différentes espèces ani-
males sont toutes aussi sensibles et si l'ige auquel on

---

- 5 -
administre l'huile a son importance.
- Le phénomène de stéatose a été étudié chez de
nombreuses espèces animales l Rat mâle et femelle de souches
différentes, Singe Saïmiri, Poro nain, Porcelet,Gerbille,
Caneton, Cobaye et Lapin.
Les essais expérimental~x effectués par BEARE-ROGERS
et NERA (17) sur le Singe SaImiri, le Porc nain, le Poroelet
et la Gerbille, montrent qu'au bout d'une semaine d'expé-
rience avec des régimes contenant de l'huile de colza (40 p.100
des calories du régime), on retrouve moins d'acide érucique
dans les lipides du muscle cardiaque que chez le rat. Ils
signalent en outre une forte accumulation de lipides dans le
myocarde de la Gerbille, alors que chez le Porc nain, le
Porcelet et le Singe, on constate l'apparition de gouttelettes
lipidiques sans que le taux de lipides de l'organe ait aug-
menté d'une manière signifioative. Chez le .Singe Salmiri, ils
signalent aussi la présenoe de ces gouttelettes dans le myo-
carde des animaux témoins. Il y aurait donc Cllez cette espèoe
une forte intolérance aux teneurs élevées de matières grasses
dans le régime pendant les premiers jours de l'expérience.
Au bout de 10 semaines d'expérience, les phénomènes sont
différents. Les gouttelettes lipidiques persistent chez les
animaux reoevant de l'huile de colza, alors qu'elles ont
disparu chez les témoins et à l'inverse du rat, on trouve
dans le myocarde du Singe plus d'acide érucique (15,6 p.100
des aoides gras totaux) qu'après une aemaine de régime (4,9
p.100).
Les effets physiopathologiques de l'huile de oolza
ont été confirmés sur des Lapins nourris pendant 84 semaines
à l'aide de régimes contenant en Taleur oalorique 40 p.100
d'huile de colza ou d'huile de tournesol (18).
Il semble donc que selon les espèoes animales étudiées,
les réponses soient Tariables mais qu'elles ne soient jamais
nulles.

---

- 6 -
- Les différents travaux effectués montrent que la
stéatose dans le myocarde est très précoce et très importante
chez le jeune Rat pris au sevrage et chez le caneton (3,4,5).
Chez le Rat de 8 semaines, HOUTSMULLER et coll (11) montrent
que le phénomène est encore très marqué. A partir de 12
semaines, BEARE-ROGERS et coll (12) ont constaté avec un
régime contenant 40 p.100 en calories d'huile de colza, que
l'aooumulation de lipides dans le coeur est moins nette que
chez le jeune animal. Après 7 jours de régime, l'acide érucique
représente 12,2 p.100 des acides gras totaux chez le rat âgé
de 12 semaines et 4,5 p.100 chez celui de 32 semaines. Ils
n'observent aucune différence entre le rat mâle et le rat
femelle.
III - MECANISMES DE LA SURCHARGE LIPIDIQUE
A - GENERALITES
Le métabolisme des lipides par le myocarde a
fait l'objet de diverses études qu'il est bon de rappeler.
Depuis les travaux de BING (19), de GORDON et
CHERKES (20) et de CARLSTEN et coll (21), on sait que les
lipides représentent, à l'état basal, la principale source
énergétique du muscle cardiaque bien que tous les liIlides
ne soient pas utilisés aussi facilement. Ainsi l'uti-
lisation des acides gras estérifiés par le myocarde est
encore très controversée. BALLARD et coll (22) notent une
captation de cette fraction dans les préparations de coeur
perfusé, isolé, chez l'animal. D'après CARLSTEN et coll (21)
et WILLEBRANDS (23) le coeur humain extrait du plasma tr~8 peu
ou pas d'acides gras estérifiés (triglycérides ou phospho-
lipides) par contre i l capte mieux les lysolécithines (24,25,26).

---

- 8 -
Cette activation, catalysée par l'acyl.CoA.synthétase,
suivie d'une transacylation sur la carnitine (0hydroxy-
y trirnéthylammonium butyrate) permet à l'acide gras de franchir
la membrane mitochondriale. Cette activité enzymatique est
élevée et le taux de carnitine important dans le myocarde
(34,35,36,37). L'acyl CoA subit donc une transacylation
réversible (35,38,39) catalysée par la long-chain-carnitine
acyltransférase présente dans le surnageant de la centrifu-
gation à 25 000 g de l'homogénat de coeur de rats.
BREMER (40) montre que les deux substrats, Palmityl
CoA et carnitine, fonctionnent comme des inhibiteurs compé-
titifs vis à vis de l'enzyme. L'excès de palmityl CoA sur
la carnitine inhibe l'enzyme. L'addition de carnitine et
de CoA à un homogénat de coeur favorise donc la 0 oxydation
du palmitate (41,42). Le défaut de carnitine oriente l'acyl
CoA vers l'estérification entrainant une accumulation de
triglycérides (43,44).
L'oxydation des lipides ne s'effectue pas toujours
activement dans le myocarde. D'où une surcharge lipidique
à l'origine vraisemblablement de ce qui s'observe chez l'ani-
mal après ingestion d'une dose élevée d'buile de colza. C'est
également le cas dans d'autres circonstances
- l'hypoxie myocardique (45,46)
- les myocardiopathies alcooliques (47,48,49)
- la myocardite diphtérique (50)
- les diabètes alloxaniques (51,52,53).
La stéatose peut se produire également par inhibition
de l'activité lipolytique. On sait encore mal comment s'effec-
tue la mobilisation des acides gras dans le myocarde et l'on
n'a toujours pas démontré la présence d'une lipase hormono-
sensible. Mais comme toute augmentation de concentration de

---

- 9 -
la noradrénaline s'accompagne de celle de l'AMP cyclique
(54,55), il est probable que la lipolyse cardiaque fonc-
tionne sur le modèle à double messager.
B - FACTEURS RESPONSABLES DE LA STEATOSE DU MYOCARDE
Lorsque la stéatose du myocarde est provoquée par
ingestion d'huile de colza certains arguments ont d'abord
suggéré que l'acide érucique pourrait en être seul respon-
sable puisque le symptôme apparaît également après admi-
nistration de triérucine tout au moins chez le Rat (3,4,15).
Cependant chez le caneton, les lésions sont plus
sévères avec l'huile de colza qu'avec la triérucine (16).
En outre l'huile de Canbra pratiquement dénuée
d'acide érucique provoque des lésions du myocarde chez le
Rat (9). On est ainsi autorisé à envisager d'autres causes
à l'origine des perturbations observées à savoir:
- le déséquilibre entre acides gras saturés et insa-
turés commun aux huiles de colza et de canbra : le rapport
acide palmitique/acides insaturés est de l'ordre de 0,05 à
0,08 dans les deux cas, alors qu'il est de 0,17 pour l'huile
d'arachide,
- la présence de certains monoènes à longue chaine
(56) ou celle de constituants éventuellement nocifs de l'in-
saponifiable,
- un trouble dans le métabolisme des acides gras
essentiels, localisé au niveau du myocarde (57,58,6), alors
qu'il n'est pas constaté dans d'autres organes (59,60,61).
En fait, certaines observations font penser que le
myocarde oxyde difficilement certains acides gras et notam-
ment l'acide érucique :

---

- 10 -
In vitro,
les mitochondries ont une activité respi-
ratoire (11) ralentie lorsque le rat a été préalablement
traité à l'huile de colza. Les oxydations mitochondriales
de l'animal non traité seraient plus faibles in vitro en pré-
sence d'érucylcarnitine qu'en présence de palmitylcarnitine (62).
Lors de l'incubation de mitochondries isolées de
coeur de rats
(n'ayant jamais reçu d'acide érucique) le
dégagement de CO
radioactif est plus lent (6.3) si l'on
2
utilise comme substrat l'acide érucique [14_14C] à la place
de l'acide oléique [10_ 14 cl . Il se pourrait également (62)
que l'acide érucique inhibe l'oxydation mitocbondriale des
autres acides gras.
Le comportement spécial du myocarde envers l'incorpo~
ration de l'acide érucique,
son accumulation et son métabo-
lisme ultérieur,
procède peut-être de certains constituants
encore imprécisés de l'huile de colza. Notre
';1i~~r~~
en aucune façon d'en aborder l'étude eXhaus~fv . ~ot~\\
sommes demandés:
a) si la " sens ibilisati
~, d~ P.J.w;:>éar<i~ à~
l'accumula tion de lipides, dans les jours
~/i ~~lk/
début de l' inges tion d' huile de colza, se p ..&àUi--~ns~~ ;
"';~"t.:_l·, 1
e'r'o' ...
parce qu'on poursuit le traitement et qu'on ex
'~~~~ rs
l'administration d'acide érucique, b) si la structure mem-
branaire des cellules du myocarde, acquise à ce stade, se
prête tout aussi bien ensuite à l'incorporation et à l'accu-
mulation de n'importe quel acide gras.
Le travail présenté ici rapporte les résultats concer-
nant l ' incor l,oration in vivo des acides érucique et oléique
marqués dans le myocarde de jeunes rats après qu'on ait
distribué quelques jours auparavant soit une huile de colza,
soit une huile d'olive. On détermine également:

---

- 7-
1) Extraction des acides gras non estérifiés
Le coeur extrait les acides gras libres du plasma Bans
dépense d'énergie (27). Cette extraction se fait en fonction J
- de la concentration de l'acide gras dans le sang
artériel (28) avec un seuil au-dessous duquel le transfert
ne se ferait pas.
- du taux de l'albumine circulante.
- de la longueur de la chaine hydrocarbonée et du
degré d'insaturation de l'acide gras (29,30). Le transport
trans-membranaire parait facilité par l'insaturation.
- de la rapidjté d'utilisation intracellulaire de
l'.acide gras (27). Les acides gras s'accumulent dans le
myo-
carde lorsque l'oxydation se fait mal. Par exèmple, on peut
bloquer in vitro l'oxydation par addition d'acéto-acétate
(31) ou par une substitution dans la chaine (32).
2) Extraction des triglycérides
Le coeur extrait les triglyoérides plasmatiques des
chylomicrons et des lipoprotéines très légères après hydro-
lyse par la lipoprotéine-lipase abondante dans le myocarde (33).
[L'activité lipoprotéine-lipase plasmatique augmente
d'ailleurs également chez le jeune rat qui reçoit de l'huile
de colza (entre le 3ème et le 6ème jour de régime). Cette
hausse de l'activité enzymatique provoque une chute rapide
de la concentration des triglycérides circulants (84) J.
3) Rôle de la carnitine
Après son introduction dans la cellule du myocarde
l'acide gTas est activé selon la réaction
Acide gras + CoA + ATP ~ acyl CoA + AMP + PP

---

-
11 -
-
la radioactivité des particules subcellulaires du
myocarde: noyaux, mitochondries, microsomes et du cytosol,
en fonction de la durée d'administration des huiles
-
l'incorporation de l'acide érucique ou de l'acide
oléique marqué dans le8 lipides du myocarde et dans ceux des
mitochondries;
-
et l'on recherche les produits de leur métabolisme
dans les lipides radioactifs.
En outre,
pour savoir s ' i l existe une relation entre
le métabolisme cardiaque des lipides et l'activité adénylate
cyclase nous avons mesuré cette dernière après avoir favorisé
la lipidose par ingestion d'huile de colza.
Le8 observations les plus spectaculaires de ce travail
permettent de penser à un conditionnement particulier du
myocarde 24 à 48 heures après le commencement du traitement
à l'huile de colza.

---

PRO TOC 0 L E E T
TEe H N l QUE S
E X FER l ~ E N T ALE S
-:-:-:-:-:-:-:-:-:-:-:-:-:-

---

- 12 -
PROTOCOLE
EXPERlMENrAL
Le pI'otocole expérimental est le suivant :
1) On administre par intubation gastrique, et toujours 24
heures avant de sacrifier les rats pris au sevrage, une seule
dose d'acide gras radioactif (acide [14_14C] érucique ou
acide [10_1 4 C1 oléique) en émulsion.
2) L'unique dose d'émulsion radioactive est donnée soit sans
complément de lipides (jour 0) soit après jngestion quoti-
dienne de 0,5 ou 1 ml d'huile de colza à 48 p.100 d'acide
érucique ou d'huile d'olive témoin adminis!rée par la mime
voie.
Au moment du sacrifice, on prélève le, sang dont on
recueille le plasma et le coeur qui est homogénéisé. On déter-
mine leur radioactivité totale et spécifique, rapportée aux:
protéines.
Le travail est conduit en plusieurs étapes:
l - Une étude de courte durée (3 jours) portant sur :
1) l'incorporation des acides gras marqués homologues
des huiles administréesr soit
acide érucique avec huile de colza,
- acide oléique avec huile d'olive.
2) l'incorporation des acides gras marqués hétérolo-
gues des huiles administrées, soit:
acide érucique avec huile d'olive,
acide oléique avec huile de colza.
II - Une étude plus longue (7 jours) rapportée en 2 temps
pour simplifier la comparai~on avec les
expériences ~;récédentes

---

- 13 -
a) résultats obtenus dans les 3 premiers jours; b) résultats
obtenus du 4ème au 1ème jour. Elle porte sur l'ensemble des
lots expérimentés en l, soit:
acide érucique avec huile de colza,
- acide érucique avec huile d'olive,
- acide oléique avec huile de colza,
- acide oléique avec huile d'olive.
III - Une étude de la radioactivité spécifique des parti-
cules subcellulaires effectuée uniquement après incorporation
du jour 0 au 3ème jour d'acides gras marqués homologues aux
huiles administrées.
IV - Une étude du métabolisme des acides gras marqués par
recherche de leurs dérivés radioactifs dans les lipides des
homogénats et des mitochondries après 24, 48 et 12 heures
d'incorporation d'une seule dose d'émulsion radioactive.
On détermine enfin l'activité adénylate cyclase des
homogénats de myocardes prélevés chez des rats auxquels on
a administré de l'huile de colza ou de l'huile d'olive
pendant 3 jours consécutifs.

---

T E C H N l QUE S
EXP E R l MEN T ALE S
-:-:-:-I-I-:-Z-:-:-
l
ANIMAUX ET REGIMES
II
PREPARATION DE L'EMULSION RADIOACTIVE
III
~ODE D'ADMINISTRATION DES HUILES ET DE L'EMULSION
RADIOACTIVE
IV
HOMOGENEISATION ET FRACTIONNEMENT CELLULAIRE
V
DOSAGE DES PROTEINES
VI
EXTRACTION DES LIPIDES
(sérum, coeur, fraction
mitochondriale)
VII
ANALYSE DES ACIDES GRAS
VIII
MESURE DE LA RADIOACTIVITE
IX
DETERMINATION DE L'ACTIVITE ADENYLATE CYCLASE

---

- 14 -
TECRNIQUES EXPERIMENTALES
l - ANI~UX ET REGIMES
Dans toutes les expériences, dont les résultats sont
consignés dans les chapitres suivants, on utilise des rats
mâles de souche Wistar CF au sevrage, provenant du Centre
d'Elevage R. Janvier, répartis en lots homogènes. Ils
reçoivent un régime de base lipidoprive et par sondage
gastrique une dose quotidienne de 0,5 ou 1,0 ml d'huile
de colza ou d'huile d'olive.
Co~position du régime de base
pour 100 g de régime
Caséine
29
Mélange vitaminique
Mélange salin (salt mixture NEC W)
5
Sucre
63
~ousse de cellulose
2
On ajoute 15 g d'eau.

---

- 15 -
Composition du mélange vitaminique
Pour 10 g de mélange vitaminique
Thiamine (B,)
20 mg
Ri bofl avine (B )
20 mg
2
Chlorhydrate de pyridoxine (B )
20 mg
6
Cyanocobalamine (B
)
12.10-.3
12
Amide nicotinique (pp)
20 mg
«Tocophérol (E)
20 mg
Biotine
0,2 mg
Ménadione bisulfite de sodium (K )
5mg
3
Ax~roplltol (A)
50.000 U
Calci férol (D.3)
0,1 mg
Acide pantothénique
40 mg
Acide folique
mg
Inositol
200 mg
Complété à 10 g avec de la caséine dévitaminée, délipidée.
Le chlorure de choline (solution à 20 p.100 dans l'eau) est
ajouté directement au régime : 0,5 g p.kg de régime.

---

- 16 -
La caséine utilisée pour le régime de base renferme
approximativement 2,7 p.100 de lipides dont 72 mg p.100
d'acide linoléiQue.
Les besoins en acides gras essentiels estimés à
45 mg par jour et par Rat sont couverts par l'ingestion
Quotidienne d'huile de colza ou d'huile d'olive.
L'huile de colza raffinée et l'huile d'olive vierge
sont fournies par l'ITERG dans le cadre de l'Action ThématiQue
Programmée ATP N° 6 de l'INSERM.
Le tableau l
donne leur composition en acides gras.
II - PREPARATION DE L'EMULSION RADIOACTIVE
On transvase dans un tube de 25 ml le contenu d'une
ampoule "CEA" renfermant 0,1 mC de [14_ 14 C) acide éruciQue
(AS = 47,15 mC/mMole) ou de (10_1 4C ) acide oléiQue (AS =
42,5 mC/mMole) en solution dans llhexane. On évapore l'hexane
sous azote et on ajoute 0,3 ml d'huile de colza ou d'huile
d'olive. On chauffe légèrement pour dissoudre l'acide marQué
dans l'huile puis on ajoute 9,7 ml de Tween/glucose composé
de :
Glucose
5 g
Tween 20
g
Eau distillée q.s pour 100 ml
On porte au bain-marie à 75° C, puis on agite pour
homogénéiser.
III - MODE D'ADMINISTRATION DES HUILES ET DE L'EMULSION
RADIOACTIVE
L'intubation gastrigue se fait au moyen d'une sonde
droite à bout rond de 20 cm (Néoplex 6-10/5, fournie par
PORGES). La sonde en plastique est fixée directement sur une

---

TABLEidJ l
COl1J.POSITION E~ AC:'DES CRAS DES HUILES AIlf.iiINTSTREES
:9. 100 molaires des acides gras totau.x)
-
C
:2
C. Q:3
C
('
. 1
C
: 1
16
C16: 1
C18
C18 : 1
C18
"'20·
1 v'
20
22
Colza raffiné
3,6
traces
1,0
13,7
12,2
9,2
0,5
10,0
48,8
Olive vierge
9,5
0,6
2,7
78,7
7,2
0,4
0,3
0,4
-

---

-18-
seringue à tuberculine de 1 ml (JINTAN-TERUMO disposable
syringe). On administre de cette façon 0,5 ou 1 ml d'huile
(colza ou olive), ou d'émulsion radioactive.
Après administration de 5 ou 10 ~C d'acide gras
mar~ué on lave la seringue avec
ml d'émulsion non radio-
active ~u'on administre ensuite à l'animal. Par ce procédé
on s'assure d'une reproductibilité satisfaisante des doses
de radioactivité données, d'autant plus ~u'on utilise une
nouvelle seringue pour cha~ue ani~al.
l V -
HOMOGENEISATION ET FRACTIONNEi>':ENT CELLULAIRE
Les rats sont sacrifiés par décapitation. On recueille
le sang dont on sépare le sérum par centrifugation à 1 000 g
pendant 20 minutes. On prélève les coeurs ~ui sont ouverts,
vidés de leur sang, lavés dans du sérum physiologique NaCl
9 0/00' Ils sont immédiatement pesés et h?mogénéisés à 0 0 C
à l'aide d'un broyeur à piston de téflon de type Potter dans
une solution de saccharose 0,25 M pH 7,2 (tampon Tris 0,02 M-
EDTA 0,002 M).
L'homogénat est soit utilisé tel ~uel, soit fractionné
par ultracentrifugation différentielle. Dans ce cas, on le
centrifuge à 1 000 g pendant 10 minutes pour obtenir une sédi-
mentation des noyaux. Le surnageant (8 ) est centrifugé à
1
5 500 g pendant 20 minutes pour obtenir la fraction mitochon-
driale. Le surnageant (8 ) est centrifugé à 105 000 g pen-
2
dant une heure pour sédimenter les mic['o8omes.
Le surnageant
(8 ) de cette dernière centrifugation est constitué du cytosol.
3
Les sédiments des différentes particules sont purifiés
par lavages et recenLrifugations successifs remis en suspen-
sion dans un volume donné de tampon ~accharose (voir plus
haut) •
Le schéma 1 consigne l'ensemble des opérations au
cours du fractionnement.

---

-19-
SCiJEMÂ 1
eur
cl
BOll1o~;~:ne i sa ti on
~ans saccharose 0,25 M
tampon Tris E.D.T.A. pH 7,2
'iltr.Jon sur gaze
c. n,cl ruga 'i on
1 000 ( -
10 mi. n
~ya~~i~td~bris
L..·~~~e llulaires
Centrifugation
"---~-uspensiOlldans
5 <:;00
./
g -
20 min
1 saccharose 0,25 M
~I
Ultracent~ifuGation
o
Cu:ot rT]
Surnage
25 jQO g r 3 ]min
l'~i toc nondrlas ;
Noyaux
SUl3 pe na i on
dans saccharose
0,25 M
Ultracentrlfugation
105 000 g,- 1 h
üOC
Cen trifuga tion
5 500 g ,- 20 min
~~~~-~
[ Mitochondries
Suspension
Cytosül S3
dans saccharose
0,25 M
Cen trifilga tian
105 000
-
1 h
Microsomes

---

-20-
v - DOSAGE DES PROTEINES
Les protéines sont dosées par le biuret dans la
première expérience, ensuite selon la méthode de Lowry (64)
après traitement par le TCA 5 %et dissolution du préci-
pité dans 2 ml d'une solution de NaOH N.
Principe.
Une association cuivre-protéine réduit un complexe
phosphomolybdate-phosphotungstate an donnant une coloration
bleue. Si l'on se place entre certaines limites de concen-
tration, la coloration est djrectament proportionnelle à la
quan ti té de
La densjt~ optique déterminée à 660 nm est mesurée
30 min apr~s le début de la réaction. La courbe de référence
est tracée,après dosages étalonnés d'une solution aqueuse
de sérumalbumine de boeuf, Fraction V (100 pg/ml).
Dans l'expérience préliminaire, on dos~~e'S,,,protéines
.
..\\.
"
:'!r . '»,-
de l'homogénat par la méthode du biuret
'/:~'\\"/-~.<"\\;\\\\
l-:::-"
" ..
ft~ C /\\ 1v1'~ \\, /i\\
~u -------~.-' r ' r
VI- EX'fRACnON DES LIPIDES (sérum, coe~:CtiO~mi:~&hon-
driale)
,
li'.I/ -----~----- (\\\\~
S ,.
7';
J
"'.
I{.. ne [ne.
~~./
Les lipides sont extraits selon la technique da roLCR,
LEES et SLOANE-STANLEY (65) par un ruélange chloroforme-
méthanol (2/1) glacé utilisé en quantité au moins égale à
20 fois le volume de la suspension. L'extrait brut de lipides
totaux ast lavé à l'aide du mélange chloroforme-méthanol-
eau (8/4/3). On laisse décanter une nuit à la chambre froide
et l'on soutire la phase inférieure chloroformique. On éva-
pore le solvant et on reprend les lipides dans une quantité
aliquote de pentane ou d'hexane.

---

-21-
VII - ANALYSE DES ACIDES GRAS
Les acides gras sont transestérifiés par la méthode
de LOURY (66). C'est une méthode qui combine successivement
l'alcoolyse alcaline et l'estérification acide suivant les
réactions globales :
1) ~éthanelyse alcaline des triglycérides
Gl OH
+ 3CH 0H
~ 3R-rr-O-CH3
3
o
2) Méthanelyse acide des triglycérides
(H2-O-CO-R
HG)
R'-OC-O-rH
+ 3CH30H ~
?!" 3R- g-o-CH +
3
bi O-CO-R"
2
Le milieu alcalin (méthylate de sodium) acidifié par addi tian
dl un excès de méthanolchlorhydrique;Par ce procédé on obtient
la transformation rapide et pratiquement complète des lipides
en esters méthyliques.
MOlle o;péra toire
Les lipides secs sont placés dans un tube et l'on
ajoute 0~4 ml de solution de méthylate de sodium (méthanol
anhydre à 1 p.100 de sodium) pour 50 m5 d'acides gras à trans-
estérifier. On porte au bain-marie à 60 0 C jusqu'à l'obtention

---

-22-
d'une seule phase, puis on ajoute 0,5 ml d'une solution métha-
nolique à 4 p.100 d'acide chlorhydrique, on porte à l'ébulli-
tion pendant 5 mtn. Après refroidissement, on ajoute de l'eau
et on extrait 3 fois les lipides à l'hexane. Pour de très
faibles quantités d'esters méthyliques, on n'évapore paS
l'acide mais on ajoute après refroidissement une solution
aqueuse de Tris 0,3 %et 0,5 ml de n-pentane redistillée. Les
esters méthyliques sont séchés sous courant d'azote et repris
avec un minimum de solvant.
Analyse des esters méthyligues
1) Séparation des esters méthyliQues sur couche mince
Les esters méthyliques sont séparés sur couche mince
,
de gel de silice Merck imprégné de nitrate d'argent suivant
la technique de SKIDMORE-ENTEN~UlN.(67).
2) Composition en acides gras
Les esters méthyliques sont analysés avant ou après
séparation sur couche mince en chromatographie gaz-liquide
(appareil Girdel 75 FD 1 GIRAVIONS-DORAND) déteoteur à
ionisation de flamme dans les oonditions suivantes 1
Colonne
3 m
DEGS 7 %sur Chromosorb W 80/100
Pression d'azote
1 bar
Température d'injeotion
210 0 C
Température de la Colonne 190 0 C
VIII- MESURE DE LA RADIOACTIVITE
La mesure de la radioactivité des homogénats, des
fractions subcellulaires et des extraits lipidiques est
effectuée au moyen d'un compteur à scintillation liquide

---

-23-
(Intertechnique SL 30). Les solutions chloroformiques de
lipides sont évaporées directement dans les fioles de comp-
tage. On dissout les protéines des aliquotes d'homogénat
ou de fractions subcellulaires par quelques gouttes d'une
solution d'hydroxyde d'hyamine. Dans chaque fiole de compta-
ge on ajoute 10 ml de solution scintillante de "Bray compre-
nant par litre :
Naphtalène
60 g
PPO
4 g
POPOP
200 mg
Méthanol
100 ml
Ethylène glycol
20 ml
Dioxane qs p.
1000 ml
Tous les comptages (10 min) sont effectués en double.
Dans le calcul on défalque le bruit de fond estimé sur un
blanc et l'on tient compte du rendernent et du quenchin6".
La radioactivité des lipides ou de leurs esters
rnéthyliques séparés sur couche mince est détectée et enregis-
trée directement au moyen du compteur proportionnel DUNN8CHICHT
SCANNER BERTHOLD type LB 2722.(87)
IX
-
DETERMINATION DE L'ACTIVITE ADENYLATE CYCLASE
Le coeur est prélevé et rincé dans un tampon
Tris HCl (0,050 M, pH 7,4) afin d'éliminer le sang, les éry-
throcytes possédant une activité adénylate cyclase. Pour
l'homogénéisation, qui se fait dans une solution de saccharose
0,25 M, on prélève une fraction ventriculaire et on ajuste
le volume pour obtenir 300 à 500 pg de protéines dans 25 ~l.
L'incubation se fait suivant le protocole de CRASE et
AURBACH (68), en présence d'un mélange réactionnel constitué
par :
_ Trie HCl (0,050 M, pH 7,4) contenant un système
régénérateur phosphocréatine (10 mM)-phosphocréatine kinase
(10 UI/ml) ;
-
MgC1
( 5 mM)
2

---

-24-
- Théophylline (10 mM) ;
- Albumine (ESA : 0,015 %)
- (o(32p ) ATP (20 à 30 cpm/pmole) = 1,23 mM.
Pour mesurer l'activité maximale de l'enzyme, on
ajoute NaF (10 mM). Les mesures d'activité basale reçoivent
le même volume de tampon.
L'incubation se déroule à 37° C, la réaction étant
arrêtée, au bout de 10 mn, par addition d'une solution
"diluante". On place ensuite le tout, pendant 3 mn, dans
l'eau bouillante.
La solution diluante contient: ATP froid (40 mM),
c-AMP froid (12,5 mM) comme entraîneur, 3H-c-AMP (3.10 5
cpm/ml) comme étalon interne. La séparation du c-AMP s'ef-
fectue sur colonne d'alumine, l'élution se faisant par 2 ml
de tampon Tris-HCl (0,050 M, pH 7,6). Les protéines sont
déterminées par la méthode de Lowry.

---

RES U L T A T S
-:-:-:-:-:-:-:-:-

---

RES U L T A T S
-:-:-:-:-:-:-:-:-
A - INCORPORATION DES. ACIDES GRAS MARQUES AU MYOCARDE
l - ADMINISTRATION D'HUILE ET D'ACIDES GRAS
HOMOLOGUES
1) Radioactivité totale et radioactivité spécifique
2) Radioactivité du myocarde rapportée à celle du
plasma
II - INCORPORATION DES ACIDES GRAS MARQUES SANS
ADMINISTRATION D'HUILE
III - ADMINISTRATION D'HUILE ET D'ACIDES GRAS
HOMOLOGUES OU HETEROLOGUES
1) Expérience de 3 jours
2) Expérience de 7 jours
a) Incorporation des acides gras marqués dans
les 3 premiers jours d'administration d'huile
b) Incorporation des acides gras marqués du
4ème au 7ème jour d'ad~inistration d'huile
c) Relation entre la radioactivité du myocarde
et celle du plasma
d) Poids des coeurs et teneur en DNA
B - INCORPORATION DES ACIDES GRAS MARQUES DANS LES FRACTIONS
SUBCELLULAIRES DU MYOCARDE
l - FRACTIONS SUBCELLULAIRES DE LA SERIE C + ER~
II - FRACTIONS SUBCELLULAIRES DE LA SERIE 0 + OL~

---

C - METABOLISME DE ER~ OU DE OL~ AU NIVEAU DU MYOCARDE
1 - LIPIDES DE L'HOMOGENAT TOTAL
II - LIPIDES DES MITOCHONDRIES
D - ACTIVITE ADENYLATE CYCLASE

---

-25-
RES U L T A T S
A - INCORPORATION DES ACIDES GRAS MARQUES AU MYOCARDE
l - ADMINISTRATION D'HUILES ET D'ACIDES GRAS
HOMOLOGUES
~
- Lot 0 + OL
huile d'olive + acide l10_14 C] oléique
~
- Lot C + ER
huile de colza + acide [14-14 CJ érucique
1) Radioactivité totale et radioactivité spécifique
(RAS)
TABLEAU II
Pour simplifier l'interprétation de ces premiers
résultats on choisit dans chaque lot les howogénats de
n~ocarde présentant approximativement la même teneur en
protéines. Le tableau II et le graphique
font état de la
radioactivité totale des coeurs 24 h après l'administration
de l'acide gras marqué, sans que les rats aient reçu l'huile
expérimentale, ou après qu'on leur en ait distribué une dose
quotidienne pendant 1, 2 ou 3 jours.
Le dosage direct des protéines sur homogénat total
de myocarde donne, de façon générale, des valeurs en excès
sur ce qu'on peut obtenir après précipitation par l'acide
trichloracétique - l'imprécision venant de la plus ou moins
forte quantité de lipides qui perturbent la lecture au spec-
trophotomètre.
Avant d'interpréter ces résultats il faut souligner
que la radioactivité des échantillons est de même ordre de
grandeur dans un lot et pour une durée expérimentale donnée

---

TABLEAU II
RADIOACTIVITE DES HOMOGENATS DE MYOCARDE ET DU PLASMA APRES INGESTION D'HUILE ET
24 li APRES ADMINISTRATION D'ACIDES GRAS MARQUES HOMOLOGUES (10 ~C/RAT)
,
Durée d'administration
Age des
Radioactivité
Radioactivité de l'homogénat
Radioactivité
..l.c:~.: ~:v':: '.:c
rats
du plasma
de l'homogénat
Radioactivité
(
.
\\
(jours)
\\ ...; ~:. l,,~,~'::' )
(dpm/100 ul)
dpm/coeur
dpm/mg de protéines
du plasma
,
"-.
o + OL~
'.
0
(4)
26
13 047
28 825
1 108 1: 84
2,2
1
( 6)
27
8 353
27 083
934 1: 95
3,2
2
(3)
28
4 326
14 933
515 1: 56
3,3
3
(5)
29
6 922
17 320
577 1: 96
2,5
C + ER~
0
(4)
26
11 346
31 937
1 228 :: 102
2,8
1
(6)
27
4 790
15 460
533 ~ 65
2,8
2
(4)
28
6 663
24 987
861 : 73
3,7
3
(5)
29
6 152
'5 047
501 ~ 93
2,5
o
14
+ OL~ = Huile d'olive + acide [1O_
CJ oléique
( ) Nombre d'échantillons
C + ERI
= Huile de colza + acide [14-'4C] érucique
-26-

---

RADIOACTIVITE SPECIFIQUE des HOMOGENATS de MYOCARDE
dp mImg. de protéines
1300
(4)
o\\\\
1100
\\
O~\\
(~)"
(6)
900
\\
0
\\ \\
\\
(4)
\\
o
\\
" ,
\\
\\
"
'
700
"
'
\\
"
",
\\
\\
",
\\
\\
", (5) 0 + 0 L*
,
0
\\
"
500
è/'
b-=
~'o
(6 )
(3)
(5) C+ER*
0 1 2 3
durée d'ingestion des huiles (jours)
1
1
1
1
. - - - - - - - - -
26
27
28
29
Age des rats
(jours)
( ) Nombre d'h omogén ats
GRAPHIQUE 1

---

-28-
'1
(
mais qu'elle présente des écarts individuels importants
comme en témoignent les valeurs des erreurs sur la moyenne.
Ces précisions étant données, on constate un comportement
spécial du myooarde envers l'aclde érucique marqué à une
époque Qui se situe au cours du second jour de l'adminis-
tration d'huile de colza (rats de 28 j, 7ème j après le
sevrage) •
En effet à ce stade la radioactivité atteint un
état quasi stationnaire (515 dpm/mg de protéines) dans
le ~ocarde marqué à l'acide oléique alors que l'incorpo-
14
ration de l'acide [14_
C] érucique (ER~) est plus forte
(861 dpm/mg de protéines). Le troisième jour d'expérience,
l'incorporation de l'acide érucique est réduite et appro-
14
ximativement identique à celle de l'acide [10_
C] oléique
(OL~).
2) Radioactivité du myooarde rapportée à celle
du plasma
A partir du moment où l'on administre une huile aux
animaux, le rapport "radioactivité totale du myocardè/radio-
aotivité de 100}l1 de plasma" est identique dans les 2 lots
"colza" et "olive". Une exception cependant s le second jour,
ce rapport est de 12 p.100 plus élevé lorsque les animaux
ont reçu de l'huile de colza.
Les résultats suggèrent un comportement spéoial du
myocarde envers l'incorporation de l'acide érucique marqué
après ingestion d'huile de colza. Cette "sensibilisation"
apparente des coeurs peut provenir de multiples facteurs exo-
gènes que nous ne désirons pas aborder 'ioi.
Dans ce qui suit nous nous sommes simplement donnés
pour tâche de rechercher si ce comportement particulier du

---

-29-
coeur aprèa traitement de l'animal "colza" a trait à la
seule incorporation de l'acide ~rucique ou si elle se produit
avec d'autres acides gras, l'acide oléique par exemple.
D'où l'étude de l'incorporation de l'acide érucique
ou de l'acide oléique marqué soit après ingestion d'huile de
colza soit après ingestion d'huile d'olive. Pour éviter toute
interprétation erronnée des résultats, l'expérience est effec-
tuée d'abord sans aucune administration de matière grasse.
II - INCORPORATION DES ACIDES GRAS MARQUES SANS
ADMINISTRATION D'HUILE
L1expérience porte sur 2 fratries de rats réparties
dans les lots ER~ ou OL~. L'expérience dure 3 jours.
TABLEAU III
On trouve de fortes différences de radioactivité
dans une même série (tableau III) entre les 2 fratries.
Ces variations entre les radioactivités brutes du myocarde
(plus fortes d'ailleurs après ingestion de OL~ qu'après
ingestion de ER~) correspondent parfois à des différences da
poids du coeur.
L'administration de ER~ est suivie d'une incorpora-
tion de radioactivité différente mais de même ordre quel que
soit l'âge des rats: on ne retrouve pas ici l'augmentation
des dpm constatée (au cours de l'expérience préliminaire)
lorsqu'on administrait ER~ avec l'huile de colza. Les résul-
tats de l'incorporation de OL~ sont plus dispersés (de 4566
à 23510 dpm/coeur).
Si l'on rapporte la radioactivité aux protéines du
myocarde, les variations s'amenuisent en partie. Ces RAS
~
~
conservent, dans l'ensemble, plus de tenue en ER
qu'en OL •

---

TABLEAU III
RADIOACTIVITE DES HOMOGENATS DE MYOCARDE 24 li APRES ADMINISTRATION D'ACIDES GRAS
MARQUES (5 pC/RAT) SANS INGESTION D' HUILE
--
.'
\\
AÇ~~ [0
:L1 J
/ il.
.
.L l.Jr..J
~ \\
-
C
-1 r>~(,.,"
U..;..JlJl '.:tU tJ
ACIDE
04 - ~4CJ ERUCIQUE
l';a~:"
"jours)
Poids des
PoidH des
dprn ta tallX
dpm/mg
Po.~ ds des
Poids des
dprn totaux
dprn/mg
ra ts
coe :..lrS
de pro-
:rats
coeurs
de pro-
(;3")
( ffi..'-l: )
téines
(g)
(mg)
téines
( i) 26
63
25'7
:; '527
200
65
270
9 219
327
(2) 26
72
2" Q
~;".J
12 10Y
504
72
282
11 110
tj16
(1) 27
7 1
2"'7
1
1
4 566
262
6"CJ
289
6 356
135
(2) 27
78
334
23 510
541
67
284
9 455
252
(, ')
1
2;-:'
6;;
~
' J
247
6 34»
243
72
267
581]
198
(2) 20
85
327
5 7j8
236
-
-
-
(
)
FRATRIES

---

-31-
III - ADMINISTRATION D'HUILES ET D'ACIDES GRAS
HOMOLOGUES OU HETEROLOGUES
Deux expérienoes sont conduites successi.vement. Dans
la première qui dure 3 jours on inverse simplement les données
de l'expérience précédente i
les rats reçoivent soit de l'huile
d'olive et de l'acide érucique marqué, soit de l'huile de
colza et de l'acide oléique marqué. Dans la deuxième expé-
rience qui dure 7 jours on envisage l'ensemble du problèmeD
On administre donc l'huile d'olive soit avec OL~ soit avec
avec ER~ et l'huile de colza soit avec ER~ soit avec OL%.
1) Expérience de 3 jours
- lot 0 + ER ~
huile d'olive et acide [14_14C]
érucique
- lot C + OL~ : huile de colza et acide [10_14C)
oléique.
TABLEAU IV
Les variations individuelles de radioactivité des
myocardes sont encore assez fortes (tableau IV). Il appa-
rait, toutefois, que les rats qui reçoivent l'huile de colza
incorporent particulièrement bien l'acide oléique marqué.
~
L'excès de radioactivité des coeurs C + OL
sur celle des
1
coeurs 0 + ER
passe de 39 p.100 le 2ème jour à 44 p.100
le 3ème jour (graphique 2).
2) Expérience de 7 jours
- lot o + OL~
huile d'olive + acide l1O_ 14C] oléique
14
- lot 0 + ER%
huile d'olive + acide (14_
C1 érucique
- lot C + OL%
huile de colza + acide t.1 0- 14CJoléique
14
- lot C + ER%
huile de colza + acide [14-
C]éruCique

---

TABLEAU IV
RADIOACTIVITE DES HOMOGENATS DE MYOCARDE APRES INGESTION D'HUILE ET 24 H APRES
ADMINISTRATION D'ACIDES GRAS MARQUES HETEROLOGUES (5 pC/RAT)
Durée d'Administration
Age des
Poids des Coeurs
dpm totaux.
des Huiles (jours)
dpm/mg de protéines
Rats (jours)
o + ER~
2
(5)
28
192 ~ 20
1 121
94,4 :: 12,4
3
(2)
29
256 :: 30
3 200
190,1 :
12,5
C + OL~
2
(5)
28
201 ! 30
2 536
131, 7 ~ 30
3
(5)
29
202 2: 34
4 400
275,2 :: 45
o
14
+ ER~ z: huile d'olive + acide [t4_
CJ érucique
( ) Nombre d'échantillons.
C + OL~ = huile de colza + acide [10_ 14C] oléique
-32-

---

RADIOACTIVITE SPECIFIQUE des HOMOGENATS de MYOCARDE
24h après administration d'acide gras marqué
(SJlc)
dpm/mg de protéines
300
(5)
•
i C+OL
/
/
200
/
(~O+ER·
/.
/
( •
5)
100
•
(5)
2
durée d'ingestion des huiles
(jours)
27
28
29
Age des rats
(jours)
( ) Nombre d'homogénats
GRAPHI QUE
2

---

-34-
Pour faciliter l'interprétation des résultats et la
comparaison avec les observations antérieures cette expérience
sera rapportée en 2 temps :
a) incorporation de la radioactivité dans les 3 premiers jours,
b) incorporation de la radioactivité à partir du 4ème et
jusqu'au 7ème jour.
a) !~~~~E~~~!~~~_~~~_~~~~~~~~~~_~~~~~~~_~~~~_!~~
2_E~~~~~~_J~~~_~~~~~~~~~!~~!~~~_~~~~~!~
TABLEAU V
Les 2 groupes de rats (0 = huile d'olive et C = huile
de colza) se comportent de façon radicalement différente
(tableau V et graphique 3),
1) Le myocarde du groupe 0 présente rigoureusement la même
radioactivité après administration de ER~ ou de OL~ et l'on
observe seulement une faible hausse 24 h après le début de
l'ingestion d'huile d'olive.
2) Le myocarde du groupe C est nettement plus radioactif que
celui du groupe 0 : rapportée aux protéines, cette radio-
activité s'accroit de 2 à 3 fois entre le premier et le second
jour d'ingestion d'huile de colza, quel que soit l'acide
marqué (ER~ ou OL%) administré.
On constate donc toujours une certaine "sensibili-
sation" du myocarde pour l'incorporation de ER~ ou de OL~
dans la journée qui suit le début de l'administration de
l'une ou de l'autre huile. Cependant, le phénomène est
accentué lorsqu'il s'agit d'huile de colza. Le jour 1 on
peut classer les radicactivités spécifiques (ou totales)
~
%
de ce "pic" suivant l'ordre décroissant: C + ER , C + OL ,
%
~
o + ER , 0 + OL •
L'importance de l'incorporation d'un acide gras
marqué n'est donc pas la même suivant ~ue le myocarde du
rat provient d'un animal qui a reçu de l'huile d'olive ou
de l'huile de colza.

---

TABLEAU V
RADIOACTIVITE DES HOMOGENATS DE MYOCARDE APRES INGESTION D'HUILE ET 24 H APRES ADMINISTRATION D'ACIDES
GRAS MARQUES HOMOLOGUES ET HETEROLOGUES (10 ~C/RAT)
RADIOACTIVITE
RADIOAc'r-.cVi'rE
Durée d'admi-
MO.re nne
Age des
Durée dl adrui-
Moyenne
nistration des
poids des
dpm totauxi
dpm/mg de
rats
nistration de
poids des
dpm totaux 1 ùpm/mg de
huiles(jours)
coeurs (mg)
protéines
(jours)
l'huile (jours)
coeurs (mg)
protéines
o + OL)f
C +- O':',Jf
o (4)
185 ± 21
7 217
449 :!: 90
24
o (4)
185 :!: 21
7 217
449 :!: 90
1 (5)
185 ~ 15
11 840
716 :!: 338
2)
1 (5)
1 ~3
:!: 2
17 702
1 049 :!: 380
2 (4)
188 ± 7
12 608
690 ~ 168
26
2 (4)
: 80 :!: 13
10 886
671 ~ 190
3 (4)
1E 2:!: 40
15 990
1 185 :!: 530
27
3 (4)
206 2: 11
14 740
846 :!: Hl3
o + ER)f
C + ER~
o (5)
178:!: 17
8 529
512 ~ 102
24
o (5)
178 :!: 17
8 529
512 2: 102
1 (j)
182:!: 15
12 848
757 :!: 206
25
1 (4)
1n :!: 8
22 638
1 250 :!: 201
2 (4)
137 ~ 15
8 948
464 :!: 70
26
2 (4)
177 2: 12
26 699
1 525 ~ 255
.) (4)
186 ± 20
. 13 406
860 ~ 175
27
3 (4)
205 :!: 10
26 026
1 346 ± 381
( ) Nombre d' échantilions.
o + OL~
huile d'olive + acide [10-~:CJoléiqUe
o + Er''''
huile d'olive + acide [,14- 1~.J érucique
c + ER~ '= huile de colza + acide (14- cJ érucique
C + OL~
huile de colza + acide (10_ 14 C3 oléique
-35-

---

RADIOACTIVITE
SPECIFIQUE des HOMOGENATS de MYOCARDE
24h après administration d'acide gras marqué (10Jlc)
dpm/mg" de protéines
1
1500
1000
500
( 4 )
a
2
3
durée d'ingestion des hui les
(jours)
24
25
26
27
Age des rats
(jours)
( ) Nombre d'homogénats
GRAPHIQUE 3

---

-37-
La différence entre les radioactivités spécifiques
de ces 2 groupes, toujours en faveur des animaux "colza",
est de 47 p.100 le premier jour si l'on administre de l'acide
oléique marqué. S'il s'agit d'acide érucique marqué la diffé-
rence passe de 58 p.100 le jour 1 à plus de 200 p.100 le
deuxième jour. Le troisième jour, les RAS des myocardes
C + OL~ et 0 + ER~ sont approximativement identiques (846 et
860) et relativement faibles, celles des myooardes C + ER1
et 0 + OL~ sont de 50 p.100 supérieures.
b) !~~~EE~E~ti~~_~~~_~~~~~~_~~~_~~E~~~~_~_~~E!~E_~~
~~~~_~!_J~~~~:~~_7è~!_j~~E_~:~~~~~~~!E!!~~~_~:~~~!~
Le troisième jour d'administration d'huile est une
période de transition: à partir de ce stade, les résultats
s'inversent (tableau VI et graphique 4). LésRAS des homogé-
nats des lots C + ER% et 0 + OL~ augmentent relativement peu
et ne présentent aucune différence significative jusqu'au
1
7ème jour ; celles des lots C + OL
et surtout 0 + ER~
augmentent considérablement pendant la même période.
TABLEAU VI ET
GRAPHIQUE 4
Il se passe donc le même phénomène qu'au début de
l'expérience: l'incorporation de la rHdioactivité OL~ ou
ER~ ne s'effectue pas avec la même ampleur suivant qu'on
administre au préalable une huile d'olive ou une huile de
colza. Toutefois, les résultats obtenus à partir du 4ème
jour sont inversés par rapport à ce qu'on observait du pre-
mier au 3ème jour.
Dès le 4ème jour
la RAS obtenue après administration de OL~ est 2
fois plus forte dans les myocardes "colza" que dans les
myocardes "olive" ;

---

TABLEAU VI
RADIOACTIVITE DES HOMOCENATS DE MYOCARDE APRES INGESTION D'HUILE ET 24 H APRES ADMINISTRATION
D'ACIDES GRAS MARQUES HOMOLOGUES ET HETEROLOGUES (10 ~C/RAT)
Rp.DIOAeTIV~TE
RADIOACTIVITE
Du:rée d'admi-
~'.';oyenne
Ag'e
des
Durée d'éldrni-
;'vlovenne
nistration deS
;:..oHs des
npm
totaux
dpm/mg de
rats
nistration de
poids des
dpm totaux
dpm!mg de
1
~
nu j les ( j ou.r's)
coeurs, mg)
protéines
(jours)
] 'huUe
(jours)
coeurs(mg)
-
protéines
Ü
"t-
CJL~
e + OL~
3 (J)
182 :: 40
~) 990
1 185 : 530
27
3 (4)
2C 6 :: 11
14 740
846 :!: 103
.1
(4)
228 :: 15
20 415
1 106 : 201
28
4 (4)
21 1 ~ 12
43 612
2 415 :: 693
j
(4)
200 :: 10
20 j3~
1 405 :!: 273
29
5 (4)
210 : 2
38 861
2 667 :!: 599
7 (4)
218 :: 17
29 )17
2 011 .: 408
3 1
7 (4)
227 ± 9
40 030
2 763 :: 640
1
(j
+
BRY:
e + EnY:
1
3 (~:)
186 .: 20
1
13 406
860 ~ 90
27
3 (4)
2L 5 ~ 10
26 026
1 346 .: 381
4 (»
190 :: 7
1
SJ 6 607
4 675 :: 602
28
4 (4)
294 !: 14
21 403
1 365 .: 433
1
5 (4)
204 !: 18
55 404
3 284 : 560
29
5 (4)
203 :: 20
38 422
1 735 :: 319
7 (3)
213 .: 9
87' 106
4 470 :: 320
31
7 (4)
212 .: 12
36 230
1 804 !: 389
) Nombre
d'échantillons •. ,.
o + OLx:
hui le d' oli ve + acide
[1O_14CJ oléique
o 1" ERXc
IluDe d'oljve + ilcicJe
l14_ 14e] érucique
x
C -'- ER
'~ ]
huiJe de colza + acide [14-' te
érucique
e ;- OLlf:
t,uile de co] za + acièe [:c- ~4CJ 0] éique
-38-

---

RADIOACTIVITE SPECIFIQUE des HOMOGENATS de MYOCARDE
24h après administration d'acide gras marqué (10Jlc)
(5)
dpm Img de protéines
(~O+ERI'
4000
•(4)
3000
(4)
•
(4)
~._.-e C+OL
e - '
(4)
. /
r/'
(4) 0 +0 L·
/
2000
o
__0
/
(4)
(4) C+ER·
.
o-~--
(4)
J
/ /
......0.........
(4)
.
(4) ,,/
( 4)
) ..
... f ,,' /
:/~........
(:~. --;:V
1\\5)
0
1000
"
,/ •
l.5~.
4•
/~ 0 ~ (4)
(4)
1
•
"
(5)
o
o
( 4)
durée dln estion des huiles
( .ours)
2
4
5
6
7
- ,
,
1
1
1
1
1
23
24
25
26
27
.28
29
30
31 Age des rats (jours)
(
) Nombre d'homogénats
GRAPHIQUE 4

---

-40-
- la RAS obtenue après administration de ER~ est
3 fois plus forte dans les myocardes "olive" que dans les
myocardes "colza".
c) Relation entre la radioactivité du myocarde et
----------------------------------------------
~~~~~~~~
TABLEAU VII ET
GRAPHIQUES 5 et 6
La radi9activité de 100 ~l de plasma (tableau VII)
s'accroit dans l'ensemble avec la durée d'ingestion des
huiles. C'est une constatation surprenante étant donné
qu'on distribue à tous les animaux la même dose traceuse
] t ] f "
( 10 pC )
de radioactivité ER
ou OL
24 heures avant la
récolte des échantillons de sang. En outre, comme l'expé-
rience se poursuit pendant 8 jours consécutifs, le volume
de plasma circulant augmente chez ces animaux en pleine
croissance. Les valeurs trouvées pour 100 FI sont donc
certainement erronées et gagneraient, si nous en avions les
moyens, à être pondérées par un facteur de dilution varia-
ble suivant les lots "colza" ou "olive" et suivant la durée
de l'éxpérience.
Comme nos conditions expérimentales ne nous permet-
tent pas d'eft"ectuer ce calcul, nous nous contenterons de
remarquer que la pente des courbes qui figurent l'évolution
de la radioactivité" plasmatique (graphique 5) pourrait être
encore plus accentuée dans les 4 lots.
Quoi qu'il en soit, le graphique 5 reproduit à s'y
méprendre le graphique précédent qui traduit la RAS des homo-
génats de myocarde (en dpm/mg de protéines) au cours de la
même expérience. On trouve donc une relation quasi directe
entre la RAS du myocarde et la radioactivité de 100Fl de
plasma. La forte radioactivité des premiers jours dans lelot

---

TADLEAU VII
filil,J;.TION ENTB.E LES RADIOACTIVITES DU MYOCARDE E'r DU PLASIIlA.
i:
Jf
C + ER:'t
o -+- ER
Ot- OL
C or- OL.lf
DurÉ-e d' adrJ,i-
nist!'ation des
MYOCARDE
PLAS1'.A
MYOCARDE
PLASlVlA
MYOCARDE
PLASJ:,'lA
MYOCARDE
PLASMA
hui les! JOu:::'s)
dpm/mg
drm/100 pl
dpm/mg
dprn/100 pl
dpll;/mg
dpm/100 pI
dpm/mg
dpm/100 )lI
Frcv- ..
,
)
- 14 93.6
48 (5)
14 936
40 (4)
1B 41.2
40 (4)
18 41-2
0
,1 ,'~'
i,1
'-t'..
\\ ~
1
128 (4)
32 715
71
(3)
31 O~
65 (5)
27 35:
91
(5)
37 969
2
î".o ! LJ )
55 6}7
49 (4)
16 7f 1
68 (4)
26 41·7
60 (4)
27 O{·3
~
,-
3
124 (4)
52 248
7') (4)
24 02{
92 (4)
44 90)
72 (4)
28 61.7
-.
4
114 (4)
30 61.3
3~8 (5)
86 071J
90 (4)
37 75,1
222 (4)
84 20&
5
184 (4)
55 63.9
266 (4)
161
3813
102 (4)
54 7913
190 (4)
94 96.7
7
159 (4)
51
57.8
393 (3)
146 18.A
138 (4)
92 E'W
185 (4)
79 592
14
) ~:omè'I'e d'échantillons.
o + OL~
huile d'olive + acide [10_
CJ oléique
o
Jf
14
+ ER
huiJe d'olive +a~ide [14-
C]érucique
C + orJf
tuile de col za + a :::ide [14- 14 C]
olé ique
C
1
+ ER~
huiJe de colza'" a::ide
GO_ 4 C]
érucique
-41-

---

RADIOACTIVITE
OU
PLASMA
,
24 h après administration d'acide gras marque (10 pc)
dpm /100 pl de plasma
150.1(?
0+ ER·
100
l\\;\\/'" (4)
" ,
ct
o+Ol·
" " - ,
/
/
'(4)
C+Ol·
1
\\4 )
C+ER·
50
t
duree d'ingestion des huiles (jours)
1------.-------,--------.,- - - . - - - - - .
r
o
2
3
4
5
6
7
23
24
25
26
27
28
29
30
31 Age des rats (jours)
( ): Nombre d' èchantil/ons
GRAPHIQUE 5

---

RELATION
ENTRE
LES RADIOACTIVITES DU CŒUR ET DU PLASMA
24 h après administration d'acide gras marquè
(10 pc)
1
103 x dpm / mg de cœur
dpm/l00 pl de plasma
4
"
/
\\
/
\\
/
\\
/
\\
/
\\
/
\\
I~
\\
14\\
3
.
\\
-- C+ ER"
\\ (1\\
~4\\
\\ . ' /
1
8)
"
1
\\~\\
"
•
0+ ER
"
(41/ . _ . - ,
1\\)
14>\\",..,-
.\\
Il
/ . , .
\\
,
'
\\ / \\
1 4 1 '
_Cl
C+ O(
.,
....
1JI
.. '.......
'.
.,
(4)
I~ \\
14\\
2
(4)
..
0+ DL
duree d'ingestion des huiles (jours)
r -
, - - - - . - - - - - - . - - - - , - - - - - - -
o
2
3
4
5
6
7
1 - - - - - , - - - - - , - - - - -
---,-------- r---- --
· T - -....- - - . . , . . . - - - , - - - - - - - -
23
24
25
26
27
28
29
30
31
Age des rats (jours)
( ): Nombre d'echantillons
GRAPHIQUE 6

---

-44-
C + ER~relativement aux autres séries, reste à peu près
stationnaire au delà du 3ème jour. Dans les autres lots,
la radioactivité augmente à partir du 4ème jour, le lot
~
o + ER devenant de loin le plus radioactif, puis le lot
C + OL~ et enfin 0 + 01~. Ce parallèle entre les RAS du
coeur et du plasma tout au long de l'expérience autorise
à penser que le comportement du muscle cardiaque est peu
éloigné sinon identique à celui des autres organes en ce
qui concerne le métabolisme de ER~ ou de 01%, mais qu'il
est fonction du conditionnement biochimique de l'animal.
Si au lieu de comparer, comme nous venons de le
faire, la RAS du myocarde et celle du plasma on calcule la
valeur du rapport "radioactivité du coeur (en dpm.10 3/mg
frais)/radioactivité de 100 pl de plasma" -en utilisant les
données du tableau VII- on constate en outre (graphique 6) &
1) un écart important (3,2 contre 2,2) entre les valeurs
~
trouvées suivant qu'on administre 10 pC de ER
ou 10 pC de
01~ - sans aucune adjonction d'huile (jour 0) ;
2) des valeurs faibles et assez voisines jusqu'au Sème jour
dans les lots C + 01% et 0 + 01~ où le quotient se tient aux
alentours de 1,7 à 2,2 - valeurs trouvées également le pre-
mier et le Sème jour dans le lot 0 + ER% ;
3) un tracé biphasique du graphique 6 dans le lot C + ER~
le premier pic (3,9) se produit un jour après le début de
l'ingestion d'huile de colza, le second (3,8) a lieu le
4ème jour ;
4) un seul pic abrupt (4,6) le 4ème jour d'ingestion d'huile
d'olive dans le lot 0 + ER~
S) le 7ème jour enfin, les valeurs des quotients s'échelon~
±
~
%
nent par ordre décroissant : C + ER , 0 + ER , C + 01
et
o + 01~ soit: 3,1 ; 2,7 ; 2,3 et 1, S.

---

-45-
Nous ne nous hasarderons pas, pour le moment, à
chercher une interprétation à ces nouveaux résultats qui
tendent à faire penser que le coeur réagit jusqu'au 5ème
jour de la même façon vis à vis de OL~ mais différemment
vis à vis deER~ suivant que l'animal reçoit de l'huile
d'olive ou de l'huile de colza.
En effet, le phénomène à élucider concerne une
lipidose cardiaque favorisée par l'huile de colza. Noue
n'avons pas déterminé l'importance de la surcharge lipidi-
que des coeurs "colza" mais elle existe, à en juger par
leur couleur pâle. C'est la raison qui nous a conduits à
doser les protéines des homogénats avant d'interpréter les
résultats de nos expériences. Les rapports établis à partir
des données du tableau VII donnent pourtant quelques indica-
tions fructueuses pour une recherche ultérieure.
Quel que soit le mode d'expression des résultats,
il apparaît toujours une phase de transition qui se situe
vers le 3ème jour après le sevrage des animaux - et qui
correspond peut-être à une période particulière au cours
du développement du coeur. Avant comme après ce jour, le
myocarde réagit diversement à l'incorporation des acides
gras marqués selon l'huile administrée. En fin de semaine,
on peut croire à une adaptation du myocarde au traitement
nutritionnel
forte proportion d'acides gras à longue
chaine en C, absence pratiquement complète de ces acides
gras "atypiques" en O. Si l'on tient compte des indications
du graphique 6 à ce stade, le métabolisme de ER~ s'effectue
moins rapidement que celui de OL~ et pour les 2 acides gras
marqués le conditionnement de 7 jours à l'huile de colza
paraît encore ralentir le processus.

---

-46-
L'augmentation de poids des coeurs est à peu près la
même dans toutes les séries de rats (tableaux III, IV, V et
VI). Cependant, et uniquement dans cette dernière expérience,
le 3ème jour d'administration d'huile de colza, les coeurs
sont plus lourds que lorsqu'on donne de l'huile d'olive
(différence de 11 et 12 p.100). Ce phénomène ne se renouvelle
pas au-delà. On peut croire qu'il s'agit alors d'un afflux
de cellules migratrices, phénomène non invraisemblable si
l'on se réfère à la teneur en DNA du myocarde.
TABLEAU VIII
Le dosage de la teneur en DNA des coeurs dont les
résultats figurent au tableau VIII a été effectué pendant
une expérience préliminaire au cours de laquelle on distri-
buait aux rats une dose quotidienne de 0,5 ml d'huile (contre
1 ml dans notre dernière expérience). Un jour après le début
de l'ingestion d'huile la teneur en DNA des coeurs "colza"
est plus f?rte que celle des coeurs "olive" ; cette diffé-
rence s'accentue le second jour et parait régresser ensuite.

---

-47-
TABLEAU VIII
TENEUR EN DNA TOTAL DES HOrJOGENATS DE COEURS (~[d
APRES INGESTION D'HUILE
Durée
Age des
Hui]e administrée (0,5 mIl jour)
d'administratjon
rats (jOUI's)
6%
des
hui] es (jours)
OLIVE
C(ILZA
0
26
380 (3) ! 20
380 ( 5):!: 15
-
1
27
285 (6)! 46
409 (6)! 28
43
2
28
309 (3) 1: 13
458 (5)1: 33
48
3
29
270 (5)! 30
360 (4): 12
33
( ) Nombre d' éohantillons.

---

-48-
B - INCORPORATION DES ACIDES GRAS MARQUES AUX FRACTIOnS
SUBCELLULAIRES DU MYOCARDE
Les fractions subcellulaires du myocarde ont été
préparées après avoir administré 0,5 ml d'huile de colza
ou d'huile d'olive pendant 0, 1, 2 ou 3 jours. Les rats
%
~
reçoivent une dose unique de 10 pC de ER
ou de OL
24
heures avant leur sacrifice. L'étude porte donc sur 2
séries de rats: C + ER~ et 0 + OL~.
TABLEAU IX
Les différences importantes constatées (tableau IX) entre
les RAS des noyaux, mitochondries et microsomes (surtout
dans le lot C + ER~) indiquent la faible contamination des
particules subcellulaires les unes par les autres au cours
de leur préparation. L'examen des mitochondries en microsco-
pie électronique confirme ce point de vue (figure 1). En
règle générale, les RAS sont plus fortes dans la série C + ERI
que dans l'autre série (à une exception près), l'acide gras
marqué étant ou non administré après ingestion d'huile.
1) Fractions subcellulaires de la série C + ER~
Le jour 0, les RAS s'étagent par ordre décroissant:
microaomes, mitochondries, cytosol, noyaux. Il en est encore
ainsi le premier jour d'administration d'huile de colza, bien
que toutes les RAS s'infléchissent. Le second jour l'ensem-
ble des BAS remontent et à partir de ce stade les mitochon-
dries deviennent, de loin, les plus radioactives. Le jour 3,
la RAS reste forte dans les mitoohondries, le cytosol, les
noyaux, elle baisse nettement dans les microsomes.

---

---

TABLEAU IX
RADIOACTIVITE SPECIFIQUE DES FRACTIONS SUBCELLULAIRES DU MYOCARDE !PRES INGESTION D'HUILE ET 24 H
APRES ADMINISTRATION D'ACIDES GRAS MARQUES HOMOLOGUES (10 ~C/RAT)
Durée d'administration
Cytosol
Noyaux
Mitochondries
MicroEomes
Cytosol
des huiles (jours)
.
.x: 100
100 ul Plasma
o + OL~
o
(4)
685: 213
(4) 1 312 .:!:: 300
(4) 1 568 1 465
(4) 1 211 = 312
9
16
1
(6)
677 1 35
(6) 1 322 1 259
(6) 1 311 ! 249
(6) 1 333 : 202
2
(3)
490:: 112
(3)
640! 113
(3)
940 1 275
(3)
901:: 198
21
3
(5)
114 1 189
(3)
894! 143
(3 ) 1 603 ± 540
( 5) 1 158 :: 257
16
C + ER%
.
o
(5) 1 004 :
208
(5) 1 883 = 560
( 5) 2 209 :
668
( 5 ) 1 447 = 303 ;
13
1
( 6)
854 :
249
( 5) 1 753 :
515
(6) 1 930 :
325
(6) 1 013 :
184
21
2
(5) 1 298 !
507
(4) 3 535 !
620
( 5) 2 188 :
380
(5) 2 213 :!: 267
32
3
(6) 1 211 :!: )02
(5) 2 960 ± 140
(6) 1 235 : 256
(6) 1 867 !
504
30
14
( ) Nombre d'échantillons.
o + OL~ ... huile d'olive + acide [1O_ C] oléique
C + ER~ .. huile de colza + acide [14- 14C] érucique

---

2) Fractions subcellulaires de la série 0 + OL~
LQ~RAS des différentes fractions subcellulaires sont
plus proches dans le lot 0 + OL% que dans le lot C + ER%.
Le deuxième jour, on observe un point d'inflexion de 30 à
50 %dans toutes les fractions, la RAS des mitochondries
'tant la plus diminuée. Le troisième jour, on constate une
remontée très nette des RAS qui dépassent alors leurs
valeurs de départ dans les noyaux et les microsomes.
En bref on observe
une diminution des RAS qui se situe le premier
jour dans les fractions C + ER~, le deuxième jour dans les
fraotions 0 + OL~,
le jour 2, la RAS des mitochondries 0 + OL~ est à
son minimum alors qu'elle atteint justement à ce stade un
~
maximum dans le lot C + ER ,
- les microsomes sont toujours aussi radioactifs et
parfois même plus radioactifs que les mitochondries,
- la RAS du cytosol rejoint parfois celle des micro-
somes et c'est notamment le cas si l'animal a reçu de
l'huile de colza.
Si l'on rapporte la RAS du cytosol à celle du plasma
(dernière colonne du tableau IX) pour éliminer les facteurs
individuels provenant d'une différence éventuelle de radio-
activité injectée, on s'aperçoit que, loin de disparaitre,
la différence entre la forte RAS des cytosols C + ER~ et la
~
faible RAS des cytosols 0 + OL
s'accentue encore - et tout
particulièrement les 2ème et 3ème jours d'administration
des huiles.

---

-51-
c - METABOLISME DE ER~ ET DE OL~ AU NIVEAU DU MYOCARDE
1) Lipides de l'homogénat total
Figure 2
La figure 2 reproduit un enregistrement potentiomé-
trique de la radioactivité des esters méthyliques des lipides
du myocarde, comparée à celle des lipides du sérum, 24 heures
2
après l'administration de ER~ ou de OL
donné en émulsion
par intubation gastri~ue.
A ce stade et dans le lot OL~, le "radioscanning"
inscrit un seul pic au niveau de l'oléique dans les lipides
du sérum. Dans le coeur, on trouve également le pic de
l'oléique (74 '1) mais on observe aussi une certaine radio-
activité dans las produits de son métabolisme: monoènes
en C20 (20 %) et acides gras saturés (5 ~). Dans le lot ER~
plus de la moitié de l'acide érucique est converti en acide
oléique et leurs 2 pics sont enregistrés par radioscanning
des lipides du myocarde et du sérum.
TABLEAU X
48
2
heures après administration de OL , la radioacti-
vité de l'acide oléique du coeur est moins forte que le pre-
mier jour, celle des autres acides gras augmente. Le méta-
bolisme de ER~ s'effectue, semble-t-il, moins vite le 2ème
jour que dans les premières 24 heures puisque le rappol}
des radioactivités érucique/oléique est approximativement
le même qu'auparavant (tableau X).
II) Lipides des mitochondries
Figure 3

---

ENREGISTREMENT de la RADIOACTIVITÉ des ESTERS MÉTHYLIQUES
(DÜlJIlchicht Scanner 11 BERTHOLD LB 2722 )
Plaques de gel de Silice+AgN03
CŒUR
CŒUR
Erucique· 24h
l -
u
Z
0
~
0
...
0
c::
1/')
..D-
u..
...
~
-
l i
"il
d}
C\\l
N
U
u
SÉRUM
SÉRUM
E
u
u
0
0
0
0
~
'"~
~
FIGURE 2

---

-52-
TABLEAU X
REPARTITION DE LA RADIOACTIVITE DANS LES LIPIDES DU SERUM ET DU
MYOCARDE (p.100) 24 ET 48 H APRES ADMINISTRATION DIACIDES GRAS
MARQUES (10 eC/RAT)
1
[
1
1
1
Acid.e gras
1
,
C
1
C
18
C
1
Acides
'"
=
11
=
gras
marqué
1
2ü
22
saturés
acJministl'é
1
1
\\
i
1
1
..
SEBUM
1
1
1
14
OLEIQUE [1O_
C]
après 2Lj h
100
-
-
-
a près 48 h
80
-
-
20
KRUCIQUE [14_ 14 C)
8j,rès 2Lj h
60
-
40
-
a Iil't; G 48 li
SiO
-
tl'~H;eG
traces
,
1
COEliR
1
1
,
1
,
., ,1
]
OLE:] gUE [10-
tc
1
apTÊ~s 24 h
7Lj
20
-
5
al,]'t's 4E. h
56
35
-
7
""TliCF1'F[' A
t l .
:).1 J
i'-\\- ÎL1C]
après 2Lj h
~,8
-
42
-
al'i't'fi Ljt h
:;J
-
45
-

---

ENREGISTREMENT DE LA RADIOACTIVITE DES ESTERS METHYLIQUES
DES LIPIDES MITOCHONDRIAUX.
(DU~NSCHICHT SCANNER II BERTHOLD LB 2722).
Plaque de gel de silice + Ag No •
3
.. - \\
. i
l
i-·
.t-:..:
..'. I ! ··'1
';
.f,~ _.._
--~------'-- ,--. ~ -I--_-l-__-+I_·-_·~~-L-+'-->--
'I·~~-..,
i l · ! .. 1.-
c-r
,
-
il'
j
;
f i i . .
.
' l
..
1
l' .
:
:
0
1
_
r-~-';:)'"
-----.-r-.-..
'-i--i---i-+--
-·1:·'...
-rI --- .
'~-
1
i
!
!
! !
-
l-
.
,
1
I
!
1
1
-
- - -
t
,
i
i
1
I i i '
1
1
j
J
:
1
;
1
_--=-_#_~-~-~i . r.....:......-7~·-~r- '-.-+--.- ---t- ~r '-r--
r
1
j '
.J:
1
.... 1
. t
, - - !
:.
t
- - .-~~--
..
-~--~
_-1-1_:
' - - , -
i
-.......J.-_. f· ..
k ...
' j - - ;P.---- -,
... 1
1
1
- . -
l'
i-
1
. j
~':'
~f:'.
l
:
'
ji--..
· 1
-
~
1
1
1
~-
- . ..
-
-t-
-
..
~
1
1
••
l
,
-=:
.'
~
i-
:
;
;
__
1
_ l
. - - - - - - i -
-
-_.
.
--
.
. _ ,
, .
.
-~:-""1-- ~~1'-- -t----..-....
1
t
1
.
1
.
i
1
. . :
i
-
1
i1
J".!
..
.
' j
1
:
t
.-
1
. :
.
- .
1
j
l ,
1
..
.
--
1
-..-~~---t__-~~ ~.
---J~-T--:-'-' --·1-----,---
l
'
j
,
1 .
Il , .;
1
l
' .
li. l'
1 i
.
- i
'
1
l
"
.--.~- L.
-:
:-I d -!_--
,
--
•
•
~
- !
,
U'" --' ... ::.. _L._ ..........
L..:.... _ë:._:._i__ -~
.~
FIGURE 3

---

-53-
L'enregistrement de la radioactivité des lipides des
mitochondries obtenues par extraction d'un nombre important
de préparations (8 à 10 échantillons réunis après sédimen-
tation à 5 500 g) corrobore et complète les indications
fournies par radioscanning des lipides de l'homogénat. L'acide
érucique est encore très fortement marqué 12 heures après le
début de l'administration d'huile de colza et 4 jours après
avoir fourni une dose unique de ER~. Ce pic représente 48 %
de la radioactivité totale des lipides et les lipides des
mitochondries renferment seulement 14 %d'acide oléique marqué.
En outre, la radioaotivité des acides gras polyinsa-
turés est très forte -observation qui n'apparaissait pas sur
le radioacanning des lipides de l'homogénat total de myocarde,
leur dilution étant probablement trop élevée. Les conditions
adoptées pour la chromatographie gaz-liquide des lipides des
homogénats et des mitochondries ne permettent pas de révéler
la présence d'acides gras à longue chaine polyinsaturés.
Par contre (tableau XI), deux et trois jours après l'admi-
nistration quotidienne d'huile de colza, l'acide érucique
figure à raison de 4 p.100 dans les lipides de l'homogénat,
à raison de 25 p.100 dans ceux des mitochondries du myocarde.
TABLEAU XI

---

-54-
TABLEAU
XI
COMPOSITION EN ACIDES GRAS DES LIPIDES DU MYOCARDE
APRES INGESTION DI HUILE
(p.100 en moles des acides gras totaux:)
!
C12
C14
C16
C16:1
C18
C18:1
C18:2
C18:3
C20:1
C20:4
C22:J
H )MOGENATS
OLIVE
-
-
24
-
26
29
16
-
-
5
-
COLZA
-
-
36
-
24
20
11
-
1
4
4
MITOCHONDRIES
OLIVE
3
5
21
5
33
13
15
-
-
5
-
COLZA
12
6
12
-
11
15
10
2
5
2
25

---

-55-
D - ACTIVITE ADENYLATE CYCLASE
La détermination de l'activité adénylate cyclase
s'effectue en triplicate (avec ou sans fluorure). Chaque
série est composée de 3 animaux au sevrage auxquels on fait
ingérer pendant 3 jours de suite (par sonde gastrique) 0,5
ou 1 ml d'huile de colza ou d'huile d'olive. Ils sont sacri-
fiés le 4ème jour.
TABLEAU XII
Ces résultats montrent une activité adénylate cyclase
significativement plus faible ohez les rats "colza" que chez
les rats "olive"-
(tableau XII).
La diminution de l'activité basale peut provenir d'une
inhibition partielle comme d'une quantité plus faible d'en-
zyme. La mesure de l'activité maximale en présence de fluorure
indique qu'il pourrait s'agir d'une diminution du nombre des
unités catalytiques adénylate cyclase. Le rapport entre les
activités basales des deux séries est identique au rapport
entre les activités maximales. L'huile de colza ne semble
donc pas agir sur l'activité de chaque unité catalytique.

---

TABLEAU XII
ACTIVITE ADENYLATE CYCLASE (AC) DU MYOCARDE (pmoles/rnn/ffig de protéines) APRES INGESTION D'HUILE .
.
Activité AC coeurs "colza"
Colza
Olive
Activité AC coeurs " o1ive ll
N3.E'
0,5 ml (lf.)
1 ml (ft)
0,5 ml (~)
1 mJ
(~)
0, 5 iIlJ
(~)
1 ml (:fi)
-
24,6
32,1
37,7
45,5
0,65
0,72
.: 2,7 (3)
+
4,0 (3)
+
2,5 (3)
+
1, 1 (3)
-
-
-
+
85,3
104,3
131 ,6
140,4
0,64
0,74
~ 6,8 (3)
+
8,5 (3)
+
3,5 (3)
:: 17,0 (3)
-
-
Facteur de
s t i mu lat i 0 r
.. 3,49
3,25
3,46
3,09
'.
( ) : nombre de rats expérimentés. Dosage en triplicate par animal. Les animaux reçoivent
en out.re :
(~) de la pomme de terre cui te ; C~.lf:) un régime lipidoprive serni-:3ynthétique.
-56-

---

DIS eus S ION
-:-:-:-:-:-:-:-:-:-

---

-57-
DISCUSSION
Des observations effectuées au cours de cette étude,
certaines -concernant l'oxydation. de l'acide érucique-
apportent simplement confirmation à nos recherches anté-
rieures (59), et à celles de plusieurs autres laboratoires
(11, 63, 85j~6rl en est ainsi également de l'augmentation
de taille du coeur sous l'influence d'un régime riche en
huile de colza.
Le travail actuel ;net l'accent sur plusieurs phéno-
mènes. Il ne sembie pas que l'accroissement de la masse car-
diaque, quand il existe, persiste au delà du 3ème jour d'ex-
périence chez le rat au sevrage. Dans aucun des lots expéri-
mentés on ne peut faire état de différences significatives
entre les poids des coeurS du 4ème et du 7ème jour d'admi-
nistration d'huile de colza ou d'olive. Il pourrait donc
s'agir, en deçà du 4ème jour, d'un afflux d'éléments migra-
teurs qui accroitraient momentanément la teneur en DNA du
myocarde. Cette réaction, 24 à 48 heures après le début de
l'ingestion d'huile de colza, pourrait être provoquée par
l'arrivée inopinée d'acides gras ou d'autres substances
atypiques sur les structures en voie de formation chez le
rat au sevrage.
On admet depuis longtemps (27) que la configuration
d'un acide gras conditionne sa rapidité d'extraction de la
circulation
plus la chaIne hydrocarbonée est longue, plus
le myocarde a de difficultés à l'extraire. Toutefois cette
interprétation d'expériences déjà classiques ne tient aucun
compte du conditionnement biochimique préalable des animaux.
Il est pourtant de toute évidence, d'après nos résultats,
que la structure des lipides de réserves et celle des lipides
membranaires jouent un rôle de premier plan dans l'incorpo-
ration des acides gras marqués, dans leur transfert trans-

---

-58-
membranaire notamment aU niveau des mitochondries, dans
l'équilibre fonctionnel des organelles, au cours des oxy-
dations, etc •••
Le coeur du rat nouveau-né ou récemment sevré est
encore pauvre en cytochrome-oxydase (69), riche en glyco-,
gène, comme durant la vie foetale. Il conserve les propriétés
fonctionnelles du muscle lisse et dépend étroitement de la
glycolyse. Sa capacité de dégradation des acides gras à
longue chaine est assez faible en raison d'une relativemeJt
basse activité acylCoA-carnitine transférase associée à un
taux minime de carnitine libre (43). La forte radioactivité
des mitochondries "colza" de nos très jeunes animaux ne plaide
pourtant pas en faveur d'une difficulté de transfert de OL~
ou de ER~ vers les sites d'oxydation mais plutôt pour l'hy,po-
l
thèse d'un ralentissement de leur dégradation.
In vitro, la synthèse enzymatique des lipides est bien
plus efficace pour l'élongation et la désaturation des acides
gras du myocarde que pour la synthèse de novo à partir de
l'acétate (70,71,72). Ce processus parait fonctionner parfai-
tement in vivo puisqu'on trouve des acides gras longs poly-
insaturés et pratiquement pas d'acides saturés radioactifs
.t:
dans les mitochondries après administration de ER • On
pourrait croire que la présence de ces acides gras à longue
chaine provoque une inhibition du système oxydatif des mito-
chondries suivant un processus encore inexpliqué.
Par ailleurs, on sait que le muscle squelettique
renferme des lipides en plus ou moins forte proportion et ,
une lipase des triglycérides (73, 74, 75, 76, 77). D'après
certains auteurs (78), le muscle cardiaque renfermerait
également une lipase horrnonosensible qui répondrait au
système à double messager (79). Une courte expérience
rapportée ici fait pressentir une inhibition non invrai-
,
semblable de l'adénylate cyclase du myocarde par les acid~s
gras à longue chaine des phospholipides membranaires. La

---

-59-
diminution de l'activité de base suggère aussi une réduction
de la synthèse endogène des catécholamines. Leur formation
(80,81) serait perturbée par un quelconque constituant de
l'huile de colza qui s'opposerait aUX transferts de substrats
entre les sites de synthèse dans la cellule du myocarde.
L'hypothèse est d'autant plus plausible qu'une accumulation
d'acides gras estérifiés a déjà été observée (82) à la suite
de la dénervation sympathique du coeur. Si la déficience de
la synthèse endogène de catécholamines peut en trainer une
réduction significative de la lipolyse de base par défaut
de stimulation de l'adénylate cyclase mernbranaire, une
inactivation de l'enzyme peut aussi provenir d'une élimi-
nation des ions Ca++ qui forment facilement des complexes
insolubles avec l'acide érucique.

---

CON C LUS ION
-z-:-:-:-:-:-:-:-:-

---

-60-
CONCLUSION
Différents travaux indiquent que l'acide érucique est rapidement
converti en acide oléique dans le foie (59) mais qu'il est oxydé lente-
tement dans le muscle squelettique et incomplètement au niveau du myo-
carde (11, 63). Nous nous sommes alors demandés si cet acide est extrait
sélectivement de la circulation par le muscle cardiaque et si ce dernier
l'incorpore plus facilement que les autres acides gras.
Nos recherches ont donc porté dans un premier temps sur l'incor-
poration in vivo de l'acide érucique marqué dans le myocarde du rat
au sevrage après qu'on ait administré per os de l'huile de colza (les
rats témoins recevant de l'huile d'olive). On établit une comparaison
14
entre l'incorporation de ER· (Acide [14_
C] érucique) et celle de OL·
(acide [10_14c] oléique). Les résultats présentés ici indiquQnt claire-
ment que l'incorporation de ER- comme celle de OL~ dépendent essentiel-
lement du conditionnement biochimique antérieur de l'animal.
Lorsque le rat reçoit de l'huile de colza par intubation gastrique
et qu'on lui administre par la même voie 24 heures avant le sacrifice
une dose unique de ER· en émulsion, la radioactivité totale du myocarde
comme la radioactivité spécifique rapportée aux protéïnes (RAS) est
particulièrement forte vers la 48ème heure,) d'expérience. Cette RAS élevée
concerne les mitochondries et les microsomes. Le cytosol est aussi très
radioactif, les noyaux le sont moins (83).

---

-61-
Mesurée dans ces conditions. la radioactivité est une résultante
de plusieurs processus. l'incorporation de l'acide gras étant priori-
taire alors que la métabolisation et l'oxydation totale ne font que
commencer. On peut ainsi admettre que le myocarde du jeune rat est spé-
cialement réceptif à ER- dans les 48 heures qui suivent le début de
l'ingestion d'huile de colza. Cette sensibilisation accrue du muscle
provient en grande partie à ce stade d'une configuration particulière
des phospholipides des membranes en voie d'édification. Cette hypothè-
se nous a incités à rechercher si l'hypersensibilisation se produit
quel que soit l'acide gras radioactif donné en supplément.
En fait. si l'on administre une dose unique de OL- en émulsion
24 heures avant le sacrifice des rats qui ont reçu de l'huile de colza
cet acide est aussi fortement incorporé, si ce n'est plus. que ER· et
le phénomène ne se produit pas chez le témoin à l'huile d'olive.
Au-delà du 4ème jour d'expérience et jusqu'au 7ème jour. les phé-
nomènes sont inversés
le myocarde "colza" saturé d'acide érucique accepte mal ER-
en surcharge et le myocarde "olive" saturé d'acide oléique accepte mal
OL~ en surcharge - en conséquence, la RAS des coeurs est faible et quasi
identique dans ces 2 lots ;
- par contre. la RAS des myocardes "olive + ER·" et "colza + OL-"
est considérable.
.-
A ce stade et après administration d'une dose de DL • la RAS est
2 fois plus forte dans les coeurs "colza" que dans les coeurs "olive"
elle est 3 fois plus forte après administration d'une dose de ER· dans
les coeurs "olive" que dans les coeurs "colza".
Le métabolisme de l'acide érucique a été étudié par radioscanning
et par chromatographie gaz-liquide des lipides des homogénats de myocar-

---

-62-
des et dans ceux des mitochondries. Les extractions de lipides sont
effectuées 24, 48 et 72 heures après administration d'une dose un~que
d'acide gras marqué et après ingestion quotidienne d'huile.
Au bout de 24 heures, la moitié de ER• est déjà convertie en aL •
mais le métabolisme semble stationner à ce stade puisqu'à la 48ème
h eure le rapport ERsIaL• est
.
toujours le
-
meme. Au 3ème Jour, les
.
l~pides
des mitochondries sont encore chargés d'acide érucique à raison de 48
p.100 des acides gras totaux. Ils renferment également une assez forte
proportion d'acides gras longs qui n'existent qu'à l'état de trace chez
les témoins. Ces acides gras longs pourraient être des éléments de per-
turbation des oxydations mitochondriales puisque le transfert transmem-
branaire intramitochondrial de ER* ou de OL~ semble s'effectuer parfai-
tement.
Une série de déterminations de l'activité adényl cyclase basale
et maximale (sous fluorure) indique un effet d'inhibition non invrai-
semblable des phospholipides membranaires riches en acide érucique et
acides gras longs. Si elle se confirme, et nous nous employons actuel-
lement à mettre au point des méthodes encore plus sensibles de détermi-
nations de l'activité adénylate cyclase, cette observation expliquerait
une des ra~sons qui s'opposent à la mobilisation des lipides. L'accumu-
lation d'acides gras estérifiés pourrait être due à une inhibition de
la synthèse de catécholamines in situ.
Enfin, l'augmentation de poids des coeurs "colza" par rapport
aux témoins "olive", décrite par certains auteurs, n'a été retrouvée
qu'au 3ème jour d'administration d'huile (rats de 27 jours) et seule-
ment dans une de nos expériences.

---

TABLE DES HATIERES
Pages
INTRODUCTION
l
Nature des phénomènes observés
.
II
Conditions expérimentales d'obtention du phénomène
observé
.
3
III
Mécanismes de la surcharge lipiJique
.
6
PROTOCOLE ET TECHNIQUES EXPERllfENTALES
l
Protocole expérimental..................................
12
II
Techniques expérimentales
14
RESULTATS
l
Incorporation des acides gras marqués au myocarde
25
II
Incorporation des acides gras marqués dans les fractions
subcellulaires du myocarde ..•..••....•...........•......
48
.
~
~.
5
III
Métabollsme de ER
ou de OC
au nIveau du myocarde .••...
1
IV
Activité adénylate cyclase . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
55
DISCUSSION
57
CONCLUSION
60
BIBLIOGRAPHIE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . .
63

---

B l B LlO G R A P li l E
-:~:-:-:-:-:-:-:-:-:-:-:-

---

RECAPITULATION DES REFERENCES PLACEES DANS LE TEXTE SOUS
UN NUMERO CHRONOLOGIQUE ET DONT LES REFER1NCES SONT DONNEES
PAR ORDRE ALPHABETIQUE.
1 (THOMASSON), 2 (ROINE), 3 (ROCQUELIN), 4 (ABDELLATIF),
5 (BEARE-ROGERS), 6-7 (ROCQUELIN), 8 (ABDELLATIF),
9 (ROCQUELIN), 10 (INSERM), 11 (HOUTSMULLER), 12 (BEARE-
ROGERS), 13 (THOMASSON), 14 (ROCQUELIN), 15-16 (ABDELLATIF),
17 (BEARE-ROGERS), 18 (ABDELLATIF), 19 (BING), 20 (GORDON),
21 (CARLSTEN), 22 (BALLARD), 23 (WILLEBRANDS), 24 (CARLSTEN),
25 (DELCHER), 26 (STEIN), 27-28-29 (EVANS), 30 (WILLEBRANDS),
31 (OLSON), 32 (CHALLONER), 33 (SCHEUER), 34 (PANDE),
35 (MARQUIS), 36 (FRITZ), 37 (FRIEDBERG), 38 (FRITZ),
39 (BREMER), 40 (BREMER), 41-42 (FRITZ), 43 (WITTELS),
44 (BRESSLER), 45 (SULKIN), 46 (SCHEUER), 47 (FERRANS),
48 (ALEXANDER), 49 (BURCE), 50 (WITTELS), 51 (GARLAND),
52-53 (DENTON), 54-55 (MOSKOWITZ), 56-57 (BEARE' -ROGERS),
58 (CRAIG), 59 (CARREAU), 60 (LAPOUS), 61 (BACH), 62
(CHRISTOPHERSEN), 63 (LEMARCHAL), 64 (LOWRY), 65 (FaLCH),
66 (LOURY), 67 (SKIDMORE), 68 (CHASE), 69 (DEHAAN),
70 (CHRIST), 71 (HULSMANN), 72 (WHEREAT), 73 (WIRSEN),
74-75-76 (GEORGE), 77 (BILINSKI), 78 (RIZACK), 79 (BUTCHER),
80 (CHIDSEY), 81 (WURTMAN), 82 (WELCH), 83 (KETEVI),
84 (STRUIJK), 85 (BOUCROT), 86 (ROCQUELIN), 87 (de VRn~.

---

-fjJ~ "
B l B LlO G R A PHI E
ABDELLATIF, A.M.M.., VLES, R.O.
Pathologieal affects of dietary rapeseedoj l
in rats.
Nutr.
Metabol.
1970, li: 285-295 (8)]f.
ABDELLATIF, A.M.~l., VLES, B.O.
PhysiopatllOlo(;'tcal effects of rapeseed. oil and canbra
ail in rats.
Proceedil1f"s of the international conference on the
Science, Technology and ~larketinG of rnpeseed and
rapeseed products.
Ste.
Adèle, Quebec, Se ptember 20-23, 1970, p. 4 2 3-~ 34 (4).
ABDELLATIF, A.~.M., VLES, B.O.
Pathological effects of dictary rapeseed oil in ducklincs.
Nutr.
Metabo}"
1970, 12 : 296-305
(16).
ABDELLA TI F, A. :,1. M., VLI~S, R. O.
The effects of various fat 8upplements·on nutritional anq
pathogeni c char'acter istics of diets contaüling erucic
in ducklings.
Nutr. MelaboJ.,
1971, .1J.
65-74 (15).
ABDELLATIF, A.M.M., VLES, B.O.
Long tepm pathologic~l affects of dietary rapeseed oiJs
in rats and rabbiis.
Unilever Research ~laardlngen~ Bep.
1971 (18)
~ ( ) Nlunéro de 19. rt3férence.

---

-64--
ALEXANDER,
C. S.
Electron microscopic observations in a1cob01ic heart
disease.
Br i t. Iie al' t. J., 1967, a
200 --206"
(48).
BACH, A., ~ŒTAIS, P., RAULIN, J., JACQUOT, R.
Métabolisme de l'acide éru~ique :
II-Vitesse d'oxydation.
Bull. Soc.
Chim.
Biol., 1969,.21: 161-115
(61).
BALLARD, F. B., DANF'ORTH, "N.H., NAECLE, S., BIXG, R.J.
1:,yocardii'l.l lTIet~lbo]jsrn of fatty acif.s.
J.
Cl i ri.
l r. v est. ,
19 60 ,
12: 111-723
(22).
BEAHE, ,l.C., CAMPBELL, J.L, YOmr:;s, c.e}., CliAlG, B.i\\'I.
Efj'ects of sa turs. ted fat in ri-Jts fed Nq8seed cjJ.
, Gan.
J. Biochem.
Phys101.
,1563
.11.: 60)-612 l57).
BEARI<;-IWGERS, J.L., NIo;I-iA, E.A., EBGG'JVEIT, R.A.
Cal'diac Jipid cCJun(';es in rat fed
oi]!'; ceri Le.üi.:i.rT: lon-:.;-
cbair: féltty éJcjd.s.
Cano
Jr.sL.
f'ood.
Tech.
J.,
1971,
.J.
120-124
(i2).
BEARE-ROGERS, J.L.
NutI'itiona]
aspects of long chain fatty n.ciè.s.
"Pr~)ceedin[';s of the j r:terrHltional
COl'1ferHLCe orl tte
Sci€,r:ce,
Tecbnol"i'.Y and !\\larl<e Li ng of rareseed "nd
rapeseed products.
Ste. Adè]p. Quebec. Septer.lber 20-23 1~j70, p. lbO-465 (5).
BEAhE-ROGERS, J.l .• , NERA, E.A., CRAIG, B.M.
Accumulation of cardjac fatt.y acirie jr. r",tE
red
synth(~­
sjzed oils containire C
fatty acids.
22
Li pjds,
1972, l
: 46-50
(56).

---

~65-
BEARE-IWCERS, J.1 .• , NERA, E • .A.
Cardiae fatty aeids and hjstopathology of rats,pigs,
monkeys and gerl)i 18 fed rapeseed ail.
Camp.
Bioehem.
Physiol.,
1972 , 41 B : 793~800 (17).
BILINSKI, E.
UtiJization of lipids by fi~h.
Fa tty aeid oxida tian by tiSf:ue sliees from d'i rk' and
"hite flIusele rainll0r; trout
(Salma Guirdner).
Cano
J.
:Biochem;,
19G3, J.1. : 107-112
(77).
BING, R.J.
1'he me 1:2.001 ism of the ltefu·t.
Ear,re,! Lect"
19~>1,.iQ: 27-70
BREMER, J.
Carni tine in i ntermediiiry rnet2.bolism.
The bi.osyntli8::>i s
of palmitylcarnjtine by eell Aubfraet.iGns.
J. Eiol.
Cham.,
1963,.2..lê. S 2774-2119
(39).
BR Ei'.n';R , J.
F,9.et.orH infJuencinc the earni tine dp.l'Ender.t Gxidé' Lion
of fél\\,ty <leids :
"Ce1Jular compol'tirJ.!"r.talizc1Ln aLd
control
of f·.tLy ncid frletetiolislll".
TJlliven~ited.-F)rh<et Osle,1968,
"(5-88
(/jü).
BRESSL:E:H: R., ii/I 'l''l'BLS,
B.
The <.:;·ects of djpiiter'ia
tc>:xiL on cal'niLine a,f;1.élboJifL'
on the hem"t.
39-45
(44).
BUReE, G.E.,
DE FASQ:JALE,
N.P.
Alcol101ic CtU'l1i ol'l,yopu.Lby.
Iwo. J. Céil·djcl.,
1)6~1, 23 a 723-131
(49).

---

-66-
BUTCBER, R.W., ROBTSON, G.A., HARDilJAN, J.D., St'l'HERLAND, E.W.
Advances in Enzyme Regula.tion
Pergamcn Press, 1968, !
: 357-3~~· (19).
CARREAU, J.P., THOnON, A., LAPOUS, D., HAULIN, J.
Métabollsme de l'acide érucique rI -. Conv~rBion en
acide oléi(;ue.
BulJ. Soc. ChJrt. Bjol., 1968, 50,
1
1~73-19BO
(59).
CARLSTEN, A., HALLGREN, B., JAGENBURG, R., SVANBORG, A.,
WERKO, L.,
Myocardial arteriO'lenous differences of individual free
fatty acid in hea~"lJy buman individuals.
Metabolism,
1963, J1. : 1063-1071
(21).
C.t.RLS'I'BN, A., HALWREN, B., JAGEI\\BURG, R., SVANBORG, A.,
VERKO, L.,
ivIyocardi al metabolj f'lm of glucose, lactic a.d d, ami no-
Rcids and fatty Roids in henlthy human in~ividualf'l at
rest and at different work loads.
Scandinav. J. CUf'. Lab. Inv8et.
,
1961, .11 1 ·418-428
(24).
CEALI,c N';R, D. R., ST2IN BERG, D.,
TrJl e~,fect of [l'ee fatty acid on the oxygen consumption
of tbe perfused rat heart.
~m. ,T. Physiol!, 1966, 1....1J2.
280 -286
( 32) •
CHASE, L.R., AURRACH, G.D.,
Renal adenyl-cyclase : anatornicaJly Bepar~t€ siLes for
PTH and Vase. prf-J ~;s i ne.
~~,
19 118,
152
5·:15-5,17
(68).
BOUCROT, P., BEZARD, J.
Incorporation et transformations w'taboliques de l'acide
,
.
14 C '
.
d
l
l ' i d
d l '
eruc~que
Hl Vl vo
ans
es
~p
es
e p uBleurlil organes
et tissus de Rats soumis à un régime à base d'huile de
colza, ou de canhra, ou d'arachide.
~j. SS:~X~~·, 1973, RI : 1-24
(85).

---

-67-·
C}JIJjSEY, C.A., KAISER, G.A., BHAUNWALD, E.,
Biosynthesis of norepinephrine ill
i~01Hted canine beart.
Science,
1963 ,.1l2 1 82&.829
(~O).
CHRJST, E.J., HULS"J..NN, w.C.
Synthesis of long-chai n fa tty acids by mi tochondrial
enzymes.
Biocnim. Bi 0J-,h,ys. Acta,
1962,
60
72-7~(70).
Erueie acid -
é~n inhbitoI' of fatt:,' acjd o:x:iciati..:Jn .in
the heart.
~iocbjm. Eioptys. Ac~~,
1972,
260
CRAU:, B.lvî., YOUN!~S, C.G., BURE, J.le, CAiclPBJ<;LL, J.A.
Fatty acid composition and glyceride structure in ratA
fed rapeseed oil or corn oiJ.
CM.
J.
Bioohem.
Physiol • . , 19 6.3,.il.
43-49
(58).
m:HA,'.N, R. L.
Different inti on of the atrioven!;}':icu~;;:' c:onduc linG
system of the heart.
Cjr'cu]ation, 1961, 24
458 -470
( 69).
DELCrlER, B.K., F'RJED, [J., SHIFP , .T.C.
Metabolism of lipoprotein lipid in the i&olated
perfused rat heart.
Ei0chim. Biophys. Acta, 1965,
106
-
DENTCN, R.M., RANDJE, P.J.
MeasurelIlent of flow of carbon atoOls from glucose and
gJycogen glucose to glycerjde glycerol and glycerol in
rat Leart and epid"dymal adifose tissue. Effects of
inGulin, adrenalin
and alloxan diabetes.
Bi(;chem. J.,
1967,
lli.: 423-,U4
(52).

---

-68-
DEN TON ,
R.M.,
RANDLE,
P.J.
Concentration of glycerides and phosplJolipids in rat
heart and gastrocnemius muscles. EfrecLs of a]]oxan-
diabetes and perfusion.
Bj ochern.
J.,
1967,..l.21
416-422
t53).
EVANS, J.R.
Ce] lu] e.r transport of lon~:-cbain fRtty aei do.
Cano J.
Bioehem.,
1964, ~ : 955-969.
(,'9).
EVANS, J.B.
Importance of fatty aeid metabolisrn in rnyoeardial
metabolism.
Circulation l'esearcb.,
1964, suppl. II;~
96-108
(27).
EVANS,J.P., OPIE,
L.H.,
SHIPP, J.C.
Metabolism of palrnitie aeid in perfuseli rat lJeart.
Am. J. Physiol.,
1963, 20':, 1 766-770
(28.).'
F'ERRANS,
V.J., ElBBS, R.G., WEILB.AEC}]ER, D.C., BLACK, W.C.
WAlSH, J.J., BURCH, G.E.
A] coho] i e eerd i om~. 0 pa thy.
Am. HefJ1't. J.,
1965,
~
748 - 765
( 47 ) •
FULCE, J.,
LEi!:S, M.,
SLOANE STANLEY, G.!J.
A simple method for
the isoléttion and pu.:'jficatic.1i of
total lipids from animal tisEues.
J.
Biol.
Chem.,
1957,lli: 497-509
(65).
,
FRIEDBERG, S.J.,
BRESSLER,
R.
The formation and i80] ation of ] ong-chai n ae,yl Céll'lli-
tinas in mitochondria.
Biocbim. Bioph,ys. Acta,
1965
'18
, ""-

---

-69-
FHITZ, I.B., YUE, K.T.N.
Long-chain carnitine acyl transferase and the l'ole of
acylcarnitine derivatives in the cataJytic ~ncrease
of fatty acid oxidation induced by carnitine.
J.
Lipid. Res.,
1963,.1: 27>,-288
(.36).
FRITZ, 1. B.
Carnjtine and it8 l'ole in fatty acid
rnetabo]jsm.
Advnnces Upid. Res.,
1963,1.: 286-334
(38).
FRn'z, 1. B. ,
Carnitine effects on palmitatel1-14c}colwersion to CO 2
and clycerides by vari.ous tissues.
Am. J. Physiol., 1~64, 206 : 1217-1222_, (42).
FRITZ, LB., KAPLMJ, E.,YU~.,
K.'J'.N.
Specificity of c8rnjtine action on fatty oxydation
by heart muscle.
Am. J. PhysioJ.,
1962, lQ.g
117-121
(41).
GARLAND, P.B., RANDLE, P.J.
Regulation of glucose uptake by muscle: 10 E(fects of
aIl oxan-diabe teR, starvél tion hy pophysectomy '-:;1d adre-
nalectorny, and of fatt,y acjds, ketone bodies and pyruvate
,
on the glyceroJ output and concentrations of free faLLy
acids, long chain futty acyl CoA, glycerol pLosphate
and citraLe-cycle i.nLermediates in rat heart and diaph-
l'agni muscler;.
Biochem. J.,
1964,.2..l
678-687 _(51 ).
GEORGE, J.C., JVO'J'I, I.
!li.sta] ogica1 l'eatLlI'eS of Lhe ln'east and ]eg muscler; o~
bi.rd and bat and tbe'ir physioloGical evo]utioCJar.y
significë.nce.
J. Anim. iwlorphol.
Physiol., 1955, 2

---

-70-
GEORGE, J.C., NAIK, R.M.
Relative distribution and chernical nature of the fuel
store of the two types of fibres in the pectoralis major
muscle of the pigeon •
Nature, 1958,..!lU s 709-711
(76).
GEORGE, J.C., SCARIA, K.S.
Histochemioal demonstration of lipase activity in the
pectoralis major muscle of the pigeon.
Nature, 1958, ~ s 783
(75).
GORDON, R.S. Jr., CHERKES, A.
Unesterified fatty acid in human blood plasma.
J. Clin. Invest., 1956,12 s 206-212
(20).
HOUTSMULLER, U.M.T., STRUIJK, C.B., Van Der BEEK, A.
Decrease in rate ATP synthesis of isolated rat heart mito-
chondrie induced by dietary erucic acid.
Biochim. Biophys. Acta, 1970, 218, 1 564-566
(11).
HULSMANN, W.C.
On the synthesis of malonyJ-coenzyme A in rabbit-
heart sarcosomes.
Biochirn. Bi.oJ2h,ys. Acta, 1966, .ill
398-400
(71).
I.N.S.E.R.M.
Compte Rendu de la réunion des contractants de l'ATP 6
de l'INSERM, 22 Mai 1973
(10).
KETEVI, P., LAPOUS, D., LORIETTE, C.
Huile de colza marquée et radioactivité des éléments
subcellulaires du myocarde.
J. Physiol., 1973, ~ : 200-201 A
(83).
LAPOUS, D., CARREAU, J.P., RAULIN, J.
Métabolisme de l'acide érucique : III Sort de l'acide
14
érucique
14_
C
dans différents organes et fractions
subcellulaires du Rat.
Arch. Sc. Physiol., 1970, ~
125-13 1
( 60 ) •

---

-71-
LEi\\lAECliAL, P., CLOUET, P., BLOND, J.P.
f3 oxydations comparées des acides érucique et olé] ;ue
par Jes mitochondries de coeur de Rat in vitro.
C.R. Acad.
Sci.,_
1972, 1.ll : 1961-1963
(63).
LOURY, M.
Une méthode générale permettant la transformati,n
rapide des cor}Js gras en esters méthyliques.
Rev. Fse. CorlJs Gras,
1967, ~: 383-3~~ '-<66).
LOWRY, Q.H., ROSEBROUGH, N.J., FARR, A.L.,RANDALL, n.J.
Pl'otein meaSlll'ement with the Folin phenol reagent.
J. Biol. Chem.,
1951, i l l : 265-275 . (64).
MARQUIS, N.R., FRITZ, LB.
Enzyrnological determination of free carnitine concen-
trations in rat tissùes.
{. Lipid. Res.,
1954, 2
184-187(5).
1:l0SKOWIn, J., HARWqOD, J.P., FORN, J., KRISHNA, G.,
RODGERS, B., MOHROW, A.,
Effect of noradre~aline and prostaglandin E , on
1
adenosine .3' ,5'-morJophosphate formation in isolated
pericardial fat cells of man.
Nat.. New Biol.,
1971, 230 1 214_-:215(54).
fuOSKOWITZ, J., FAIN, J.N.
Hoemonal regulation of lipolysls and phosphory1?:>e
activity in hurnan fat cells.
J.
Clin. Invest., 1969, ~ : 1802 -180~
(55).

---

-72-
0LSON, R.E.
Effects of PYl'uvate and Ilcetoacetate on the metabolism
of fat~y acids by the perfused rat heart.
Nature,
1962,
ID s 597-599
(31).
PAN DE , S.V., HEAD, J.F.
Distribution of long-chain fatty acid activating
enzymes in rat tissues.
Biochim. Bioph.ys. Acta,
1968,.l2?-
636-638
(34).
RIZACK, M.A.
Activation of an epinephrinesensitive lipolytic acti-
vit Y from adipose tissue by adenosire 3' ,5'-phosphate.
J. Biol. Chem.,
1964, ~ s 392 -395
(78).
ROCQUELIN, G., CLUZAN, R.
L'huile de colza riche en acide érucique et l'huile
de colza Séine acide érucique. Valeur nu tl'i t i onnelle
et effets physioJog-iqlles chez le rat.
I) Effets sur Ja croissance, l'efficacit~ alimentaire
et l'étal des différents organes.
Ann. Biol. Anim. Bioch. Biophys.
1968, 8 z 395-406
(3) •.
ROCQUELIN, G., SIERGEI., J.P., ;,lARTIN, B., LECLEfiC, J.,
CLUZAN, R.
The nutritive value of .refined rapeseed oils.
J.
Am. 01]. Cllem. Soc.
1971, j,§ s 728-732
(~).
ROCQLJELIN, G.
L'huile de coJza et J'huiJe de canbra : effets à tris
court terlfle sur les lipides cardiallue8 et hépatiquos
ÙU
l'at sevré.
C.B. Acad. Scl., 1972, ~ a 592-595
(]).

---

-73-
ROCQUELIN, G., CLUZAN, R., LECLERC, J.
Communication présentée au VIlle Congrès International
de Nutrition, Prague 1969
(9).
ROCQUELIN, G., MARTIN, B., CLUZAN, R.
Comparative physiological effects of rapeseed and canbra
oils in the rat : influence of the ratio of saturated to
monounsaturated fatty acids.
Proc. of the International Conference on the Science,
Technology and Marketing of rapeseed and rapeseed products.
Ste. Adèle, Québec, September 20-23, 1970, p. 405-422
(14).
ROCQUELIN, G., CLUZAN, R., VODOVAR, ., LEVILLAIN, R.
Recherches récentes sur les effets physiopathologiques des
huiles de colza et de canbra au niveau du myocarde et
d'autres organes.
Cah. Nutr. Diet., 1973, ,§., 103-116
(86).
ROINE, P~, UKSlLA, E., TEIR, H., RAPOLA, J.
Histopathological changes in rats and pigs fed rapeeeed oil.
Z. Ernahrungsw., 1960,
: 118-124
(2).
SCHEUER, J., OLSON, R.I.
MetabolislIl of exogenous triglyceriàes by the isolated
perfused rat heart.
Am. J. Physiol., 1967, 212 2
301-307
(33).
SCHEUER, J., BRACHFELD, N.
Myocardial uptake and fractional distribution of
palmitate 1_'4 C by ischemic dog heart.
MetaboliBm, 1966, ..!2 : 945-954
(46).
SKIDMORE, W.D., ENTENMAN, C.
The determination of esterified fatty acide in glycerides,
cholesterol esters, and phosphat~des.
J. Lipid. Res.,
1962, l
: 356-363
(67).

---

-74-
STBIN, Y., STEIN, O.
Uptake of serum 32P-Iysoleci tlürJ by the ifwluted
perfused rat heurt.
l,ire Sei.,
196~ ,.1: e83 -884 .(26).
STRUIJK, C.B., HOU'l'3i'.illLLEH, tT.ll.'I'., .TA;';SEt~, il., HU1SLIANN,':J.C.
Increase in postheparin lipoprotein lipase activity ~n
rat plasma by dietary erucj.c acid.
TIiochi:n.
BiopllYs. Act:::,
1973, ?SIG : 253-2',)6
(é4b)'
SULKIN, N.M., SULKIN, D.F.
An electron microscopie nttuly of the efff;ctG' of chronic
hypoxia on célrdiac musc] '1, hepatic h111.1. Rutuno;;Li.c
gang] ion
cells.
Lnbo~,ltorv Tl1ViHlt.,
1)165, 111 : 1523- 1546 . (45).
t
•
~
THorvlAS;30N, H. J.
The biological value of oi1s ar,rl f:J. tf3. Growth a.nd food
intake on feedin~ with natural oils and fBtS.
J. Nnt.l'.,
1955, ~: 455-468
(1).
THmrASSON,
R.J., GOTT}"~.NBOS, .J ..J., V!:l.n }'IJ?EN, ?T.• , VLF;S,R.0.
Nutritive value of rapeseed oil~'
..,...
.
lnt. Symp. Chem. Technèl. Bapeseèd oil and other
Cruciferae oils.
Gdansk, Pologne
1970,
381-402
( 13) •
WELCH, C. H.Jr., BRAUNWALD, S., CASE, TI. n., SATliHWr.', S•.J.
The affect of me'p~lent8rl;)i.ne sulphétto on !~:/cc~.rdill.l
"
oxycen consulliption, m,yocardin.l c ['fici"HIC./ and 1'9::.'i-
phoral vn.sculal' resistancH •
.Am •.r. :'vled.,
19 fj8,.2,i: 871-881
(82).
VRIE~(de), B., JURRIENS, G.
Trennung von lipiden mittels Dünnschioht-chromatographie
auf Silbermtrat impragnierten Kieselgel
Fette, Seifen, !nstrich., 1963, .§2 : 725-727
(87).

---

-75-
wm;REAT, A.F., HULL, F.!!;., ORISrrIMO, IvI.W., RABTNOWITZ, J.L.
The ~ole of succinate in the reguJatinn of fat~y acid
syn thesi s b,Y hear t mi tocnondria.
,J.
Biol.
Chern.,
1967, 242 : 401)- 4022
_(72).
WJLLEBRA~DS, A.F.
Myocardi3.. J extraction of individual non-esterified
fatty acids, esterified fatty acids and aceto-acetate
in L:Je f:;;.s ti ng human.
CJ i.n.
Chi:lI.
Ach,
1964,.lQ
435 -44 ~
(3e )•
'ln LLEBRAj 1)8, A. F.
UtiJi~ation of indivilual non-esterified fatty acids
b;y the L;ol:Jted perfllsed rat heart.
B:iocfd.m.
nioph,ys.
Acta,
196/),.Qi:
607-619,,_(23).
iNIii Sl~N, C•
Studies i~ lipid mobjJization.
Actq phys.iol.
Scandinav.,
1965, ~ Suppl. 252, 1-46 _(73).
WITTELS, B., BRESSlER, R.
Lipiet
l!Jet'lbolir>m in the newborn heart.
,J.
CL;J. 1nvf3st.,
1965,...1.l: 1639-1646
(43).
eT.
Clin. Invest,
Ca. Lecèl·;)lamines.
G37-746" (81).

---