UNIVERSITE DE BESANÇON -
FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE -
ANNEE 1973
N° 187
.)
EFFETS DE LA SPLENECTOMIE
SUR L'EVOLUTION DU PLASMODIUM
BERGHEI CHEZ LA SOURIS SWISS
présentée et soutenue publiquement·
le 15 juin 1973
pour obtenir le titre de
DOCTEUR EN MEDECINE
PAR
NGAKA NSAFU
, .'
né le 20 septembre 1944 à Kinshasa
.,"
Examinateurs de la Thèse :
Président : M.
GISSELBRECHT
Professeur
Juges
: MM. TRAN BA LOC
Professeur
VICHARD
Professeur
PETERS
Professeur

---

r.·.'~'"l,~"
UNIVERSITE
de
BESANCON
~r
"li'
FACULTE
DE
MEDECINE
ET
DE
PHARMACIE
~EN •••••••••••••••••••••••••••••••• Professeur Louis COTTE
Assesseur Médecine ••••••••••••••••••• Pro~esseur Jean-Pierre ~URAT
Assesseur Pharmacie •••••••••••••••••• Professeur Jacques PANOUSE
Secrétaire ••••••••••••••••••••••••••• Monsieur Armand de MASSOUGRBS
Doyens Honoraires 1
Professeurs Honoraires de l'Ecole
Nationale de Médecine et Pharmacie
Monsieur le Professeur Paul LAUGIER
1
Monsieur le Recteur Pierre MAGNIN
HM. les Professeurs R. JACQUEMAIN
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Directeurs Honoraires de l'Ecole
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Nationale de Médecine et de Pharmacie
MM. les Pro~esseurs P. MILLERET
et
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-~tériologie - Parasitologie
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'ri,
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AœtClllie Pathologique ••••••••••••••••••••••••••••• M. G. PAGEAU'l'
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J1ctériologie - Parasitologie ••••••••••••••••••••• M. Y. MICHEL -.IAID
Biophysique (Chaire) •••••••••••••••••••••••••••••• M• G. ME'l'HLIN
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t
Phanucologie
5 ••••••••••
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,
•
- ~.ique Médicale •••••••••••••••••••••••••••••••• N•••••••••••
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M6decine et Chirurgie Expérimentale ••••••••••••••• M. J.P. MAURAT
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. •
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BRIAIIJ)
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Biophysique (Chaire) •••••••••••••••••••••••••••••• M• G. METHLIN
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- Chirurgie Générale ••••••••••••••••••••••••••••••• M. M. GILLET
Gynécologie
Obstétrique •••••••••••••••••••••••• N•••••••••••
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gastro - entérologie ••••••••••••••• M. P. CARAYON
- Histologie ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• Mme D. LENYS
- Hygi~ne •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• N•••••••••••
- Mati~re Médicale ••••••••••••••••••••••••••••••••• M. M. LEBOEUF
Médecine Interne ••••••••••••••••••••••••••••••••• M. C. PEROL
Neuro-Chirurgie •••••••••••••••••••••••••••••••••• M. R. STEIMLE
Ophtalmologie •••••••••••••••••••••••••••••••••••• K. A. ROTH
Oto-Rhino-L~gologie
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Pharmacie Galénique •••••••••••••••••••••••••••••• Mle D. DUCHENE
- Pharmacologie •••••••••••••••••••••••••••••••••••• M. P. BECHTEL
Psychiatrie
Adultes •••••••••••••••••••••••••••• N••••••••••••
Physiologie Pharmaceutique •• t •••••••••••••••••••• N••••••••••••
Radiologie -Thérapeutique) ••••••••••••••••••••••• M. S. SCHRAUB
Toxicologie •••••••••••••••••••••••••••••••••••••• M. M. VARNET
Urologie ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• M. M. BITTARD
La Faculté a arr@té que les opinions émises dans les dissertations qu
lui seront présentées doivent @tre considérées comme propres A leurs auteurs et
qu'elle n'entend les approuver, ni les improuver.

---

JURY
DE
LA
THEBE
Président 1
Professeur
H. GISSELBRBCHT
Membres
1
Professeur
P. 'l'RAN BA LOC
Professeur
Ph. VICHARD
Professeur
A. PBTERS

---

Avec toute mon a/tection et ma gratitu4e.
1l a été pour moi un exemple de çourage et
de persévérence dans la vie.

---

'~
1
:-~î
,~
.o~~
A _
lib.
En faible têlnoignage de . . tendresse. Je voudZ'a18
que ce jour rot pour elle un jour de joie, cU' je
lui dois plus que la vie, Ni. surtout le .eu des
valeurs réelles et de la liberté.
00,, .
'.
. f
"!.-
"

---

A mes Enfants
avec tout mon amour.

---

A me. fr6res
A mes soeurs
A toute ma famille
A tOUI mes amis

---

A DOtre Maitre et Président de Th~se
Monsieur le Professeur H.
GISSELERECHT
Professeur de Pathologie Médicale
1
Il nous fait le grand hoDneur d'accepter la Pr91d.eDce
de notre jury, et nous sommes heureux de pouvoir le
remercier.
Qu'il veuille bien trouver ici l'expression de DOtre
gratitude et de notre profond respect.
'.>. ~
",
,'
t4t,~ ,
~:.

---

•
A notre Ma!tre et Juge
Monsieur le Professeur TRAN ~ LOC
Professeur de ZOologie et Parasitologie
qui nous a initié au travail de recherche et nous
a guidé avec compétence dans l'étude du Plasmodium
Berghei.
qui a dirigé avec bienveillance notre travail dans son
Laboratoire de Zoologie et Parasitologie, et a inspiré
cette thèse.
".

---

•
A notre Maitre et Juge
Monsieur le Professeur
Ph. VICHARD
Professeur dl Orthopédie, de Chirurgie plastiqll
et reconatruct1ve.
Qulil veuille bien accepter l'hommage de notre
respectueuse gratitude et de notre profonde
reconnaissance.

---

•
A notre Ma!tre et Juge
Monsieur le Professeur
A. PETERS
Professeur dl Hématologie
fivec tous nos remerciements et notre profonde reconnaissance
pour avoir accepté de juger ce travail.
J

---

·
A nos Ma!tres
'.
Monsieur le Professeur
CAUOO'
et
Monsieur le Professeur Agrégé IRAEMER
de l'Institut de Parasitologie et Bactériologie
de Strasbourg.
qui nous ont guidé dans la connaissance de la
Parasitologie.

---

A Monsieur le Docteur Pierre
DESTOMBES
de l'Institut Pasteur - Paris
qui nous a réservé un accueil cordial dans son
Laboratoire d'Anatomie pathologique. et nous a
accordé le privilège de ses connaissances.

---

Avec tous mes remerciements à toute l'équipe du
Laboratoire de Zoologie et Parasitologie de la
Faculté Mixte de Médecine et Phar.macie de
Besançon, qui nous a apporté un soutien efficace
pour la réalisation de ce travail.

---

S E R MEN T
DI H l P P 0 C RAT E
EN PRESENCE DES MAITRES DE CETI'E ECOLE, DE MES CHERS CONDISCIPLES,
JE PROMETS ET JE JURE AU NOM DE LI ETRE SUPREME, DI ETRE FIDELE AUX LOIS
DE LI HONNEUR ET DE LA PROBITE DANS L 1 EXERCICE DE LA MEDECINE.
JE OONNERAI MES SOINS GRATUITS ALI INDIGENl' ET NI EXIGERAI JAMAIS UN
SALAIRE AU DESSUS DE KJN TRAVAIL, ADMIS Lt~NS LI INTERIEUR DES MAISONS,
MES YEUX NE VERRONT PAS CE QUI B1 Y PASSE, MA IJ\\l«:;UE TAIRA LES SECRETS
QUI LUI SERONT CONFIES, ET MON ETAT NE SERVIRA PAS A CORROMPRE LES tlJEURS,
NI A FAVORISER LE CRIME. RESPECTUEUX ET RECONNAISSANT ENVERS MES MAITRES,
JE RENtRAI A LEURS ENFANTS LI INSTRUCTION QUE JI AI RECUE DE LEURS PERES.
QUE LES HOMMES M'ACCORDENT LEUR ESTIME SI JE SUIS FIDELE A MES PROMESSES 1
QUE JE SOIS COUVERT DI OPPROBRE ET MEPRISE DE MES CONFRERES SI JI Y MA~UE 1

---

,.
1-
INTRODUCTION
•
L'impossibilité d'appliquer rigoureusement au paludisme de l'homme
les méthodes pasteuriennes telles que: isolement de l'agent infectieux, cul-
tures, reproduction expérimentale chez l'animal de la maladie, a conduit les
chercheurs à s'adresser à la pathologie comparée pour l'étude expérimentale du
paludisme. De nombreux travaux ont été réalisés sur les paludismes aviaires et
les piroplasmoses. Chez les mammifères ont peut s'adresser soit au singe pour
des espèces plasmodiales qui lui sont propres, mais chez cet animal l'expéri-
mentation est délicate et onéreuse, soit à l'homme en faisant état des donn6es
de la malariathérapie et du paludisme d'inoculation, mais là e1Xore le nombre
des observations reste limité.
La découverte en 1948 au CO~O Belge par I.H. VINCIE et M. LIPS d'wu
nouvelle espèce plasmodiale parasitant les rongeurs sauvages, baptisée Plasmo-
dium berghei en hommage à leur ma1tre : L. VAN DEN BERGHE, apporta l'espoir de
réaoudre expérimentalement quelques uns des nombreux problèmes posés par le
paludisme. Ce parasite est en effet facilement inoculable en série aux petits
rongeurs de laboratoire (rat, souris) j et les souches .furent largement distri-
buées par les auteurs belges.
Le Laboratoire de Zoologie et Parasitologie de la Faculté de Médec~
1.-
et Pharmacie de Besançon entretient depuis de nombreuses années une souche de
Plasmodium berghei. Cette souche est essentiellement conservée sur souris SriSI
par passages successifs.

---

2-
Le présent travail, effectué sous la direction de Monsieur le
Professeur TR1~N BA LOC, a l'intention de dégager les effets de la splénectc
sur l'évolution du Plasmodium berghei chez la souris Swiss. Cette étude a é
motivée'par le fait que la rate représente un organe qui s'hypertrophie au
de la maladie palustre. De plus en plus, la splénectomie devient une soluti
de recours pour éviter les accidents de Thrombose chez le paludéen en cas d
splénomégalie.
D'une part quelle peut être la part de la rate dans la résistance
contre la maladie si l'on admet qu'une splénomégalie modérée semble un tact
de bon pronostic dans la primo-infection du paludisme chez l'honvne ? D'autr
part, le foie ne devient-il pas le lieu de prédilection que les plasmodies
envahir précocement et massivement en cas de splénectomie ?
Nous nous proposons d'examiner l'influence de la splénectomie, a'\\l
ou après l'inoculation par le Plasmodium berhei, sur la durée de survie des
maux infectés, et sur l'évolution de la parasitémie au niveau du sang péri~
rique.
Pour l'exposé de notre travail nous avons retenu le plan suivant
1-
GENERALITES
II-
MŒPHOLOGIE
111-
EVOLUTION HEMATOLOGIQUE
IV-
J'INI'lTOMIE PATHOLOGIQUE
V-
CONCLUSION
Nos remerciements vont particulièrement à
Mademoiselle Jumie PAI
PIERRET dont l'aide technique nous a été précieuse.

---

1-
GENERALITES
•
Dans ce chapitre nous étudierons successivement, l'évolut-ion du para-
site dans la nature, les diverses voies d'inoculation et leur retentissement
éventuel sur la marche de l'infection, enfin la technique d'entretien d'une sou-
che de Plasmodium berghei au laboratoire.
A-
CYCLE DU PARASITE MNS LA NATURE
li
~i
'.'
Dès 1943, I.H. VINCI:E et M. LIFS (64) découvrent le Plasmodium berghei,
en observant les moeurs d'anophèles dureni dans une galerie forestière des en-
virons d'Elisabethville. Ils constatent que cet anoph'le possède un index spo-
rozo!que élevé (7%), qu'il ne s'éloigne pas de son refuge de digestion, ne pique
pas l'homme, et que les globules rouges trouvés dans le sang de l'estomac étaient
toujours des globules rouges de manunifères. Ces auteurs recherchèrent donc quel
pouvait @tre l'hOte intermédiaire de ce protozoaire. Par la méthode des sérums
précipitant ils éliminèrent successivement l'homme, qui ne donnait qu'exception-
nellement des réactions positives, le chien, le chat, l'antilope, pour retenir
finalement le rat. Ils s'orientèrent donc dans la capture systématique des rats
sauvages 1
Thamnomys surdaster, Pelomy~ frater, Otomys irratus, Tatera nyssae,
Lophuromys aquila rita. Fn janvier 194A, ils découvraient chez 2 Thamnomys des
parasites endoglobulaires indiscutables, inoculables aux rats sauvages, à la
souris blanche et à Rattus rattus.
Il restait donc à découvrir le rOle exact de cet anophèle dans la
transmission du parasite. La reproduction complète du cycle sporogonique n'avait
pas pu @tre réalisée: les anophèles dureni ne pouvaient s'élever au Laboratoire
(62). Les repas d'anophèles gambiae sur souris infectées ont abouti à des échecs,

---

ainsi que les essais avec l'anophèle constard , Cependant, de rares dissections
permirent après repas infectant, de démontrer l'extraf1age11ation des microga-
métocytes. G. RAFFAELE et A. BALDI ont fait nourrir des culicinés, culex pipiens
et aedes aegy~ti, sur des souris infectées ; ils n'ont pu par dissection de leurs
estomacs et de leurs glandes salivaires retrouver les stades du développement
du Plasmodium berghei.
En 1950, 1. H. VINCKE et M. LIPS (63) procédèrent à l'introduction
dans la galerie de IISANGA de Thamnomys surdaster et de Lophuromys infectés,
et à l'étud~ systématique des anophèles. Dès janvier, ils trouvèrent des an0-
phèles infectés. De nombreuses dissections effectuées de janvier à mai 1950
leur permirent de constater que la période favorable était janvier-avril. Il
restait à éprouver ces glandes salivaires infectées vis à vis des animaux r~ep­
tifs.
t
Souris blanches
2 groupes de souris, l'un de 10 animaux, l'autre de 5 animaux,
furent inoculés par voie intra-péritonéale ou intra-veineuse,
soit avec des glandes dont la positivité avait été préalablement
mise en évidence par dissection, soit avec des groupes de glandes
non explorées. Le support était tant8t le sérum physiologique
hépariné, tant8t l'extrait globulaire de Tatera. Les examens ré-
pétés pendant plusieurs mois ne montrèrent que de rares formes en
anneau dans le sang ; et aucun des animaux ne succomba. Ce fait
semble paradoxal quand on connait la grande réceptivité de la
souris blanche.
2-
Rats
Les mêmes expériences ont été réalisées avec des rats blancs
Thamnomys, Rattus et Tatera. Sur 20 animaux, 12 sont devenus
positifs. Le temps d'incubation a été de 3 à 8 jours; il n'a
pu être déterminé pour certains animaux chez lesquels il a été
procédé à des réinoculations (66) •.

---

Il semble donc bien établi que le vecteur du Plasmodium berghei dans
la nature est l'anoph~le dureni.
A~ourd'hui, nos moyens d'investigation ont permis d'apporter cer-
taines précisions sur les différents stades du développement du Plasmodium
berghei. au cours de son cycle chez l'anophèle dureni, dit encore cycle
sexu6
ou s~ogonique.
•
B-
CYCLE DU PARASITE CHEZ L' ANOPHELE
Au cours d'une pâqûre sur un
animal infecté, l'anophèle duren1, vec-
teur du Plasmodium berghei, prélève dans le sang circulant à la fois des méro-
zo!tes et des gamétocytes. Les premiers vont involuer rapidement dans la cavité
générale de l'insecte, et @tre digérés. Les gamétocytes, eux lor$que les condi-
tions de température dans le milieu ambiant sont favorables, vont entreprendre
tout un cycle de transformation, cycle sporogonique. Ces gamétocytes sont de 2
types z
le gamétocyte male ou microgamétocyte, et le gamétocyte femelle ou
macrogamétocyte. Le gamétocyte femelle ne connait aucune modification, il COD-
duit directement au gamète femelle. Le premier, c'est à dire, le gamétocyte
mlle subit l'extlagellation pour donner le gamète male. Au sein de celui-ci
s'individualise des masses chrmmatiennes ; en face de chaque masse apparait un
appareil flagellaire à la base du cytoplasme, qui va bourgeonner et constituer
un élément allongé, le gamète male.
Ensuite il y a fUsion des 2
gamètes, male et femelle 1 c'est la co-
pulation. Il y a formation d'un oeuf, l'ookinète mobile. La nidation va avoir
lieu au niveau des muscles du tube digestif. L'ookinète est diplu!de. Il subit
une méiose, et donne l'oocyste qui est aussi diplo!de, stade purement transi-
toire. Ce dernier va aussit8t s'accroitre par simples mitoses successives et
donner de nombreux noyaux. Il y a condensation du cytoplaame autour de chaque
noya~ C'est la constitution des sporozo!tes. Ceux-ci rompent l'oocyste, vont
migrer, et se fixer électivement au niveau des glandes salivaires où ils sub-
sisteront très longtemps.

---

C-
CYCLE DU PARASITE CHEZ L' HOO'E
. Au cours de la piqOre, l'anophèle inocule le sporozo!te dans le sang ;
celui-cidisparait très vite dans le foie. Il se localise au niveau de l'hépa-
tocyte Où il se cache sous le nom de cryptozo1te.
Il va $e développer et se
multiplier
repoussant en périphérie le'~yau de la cellule, et va finir par
constituer une masse
corps Bleu. BientOt cette cellule éclate, libérant de
nombreux mérozo!tes. Ceux-ci,arrivés dans le torrent circulatoire, sont emboli-
'.
sés par les capillaires sinuso1des du foie, et gagnent la circulation générale.
Là, ils pénètrent par effraction dans une hématie ; chaque mérozo!te devenu
ainsi intra-érythrocytaire, constitue un trophozo1te. Celui-ci se développe,
grossit, et son noyau se multiplie; il en résulte un schizonte, qui se charge
progressivement d'une production pigmentaire spécifique, l' hémozo!ne.La multi-
plication des noyaux, qui s'entourent chacun
d'une plage de cytoplasme, forme
un corps en rosace. Celui-ci dilaté et mOr, éclate ; cet éclatement est contem-
porain de l'accès thermique clinique. Les mérozo!tes
libérés vont parasiter
une hématie vierge, et poursuivre le cycle intra-érythrocytaire ou cycle de
GOL3I, dit encore cycle schizogonique. Chaque cycle schizogonique, dans le cas
du Plasmodium berghei, dure 24 heures.
Après plusieurs cycles de GOLGI, apparaissent dans les hématies des
éléments à potentiel sexué, les gamétocytes, qui ne se développent que s'ils
sont absorbés lors d'un repas sanguin par un anophèle femelle.
Tel est le cycle habituel. Toutefois, un certain nombre de méroso!tes,
au niveau du foie, peuvent ne pas gagner la circulation générale et effectuer
donc un cycle exo-érythrocytaire secondaire en allant s'installer dans un nouvel
hépatocyte. En fait, dans le cas du Plasmodium berghei, ce cycle exo-érythrocy-
taire est
pres~ inexistant.
Lors de l'éclatement du corps en rosace, l'hémozo!ne dispersée est
ramassée par des leucocytes polynucléaires ou mononucléaires qui en deviennent
mélanifères ; aven' de voierie, ils déversent cette charge pigmentaire dans les
tissus, au niveau des cellules du système réticulo-histiocytaire : cellules de
Iuppfer du foie et histiocytes de la rate.

---

7-
D-
VOIES D'INOCULATION
. Les diverses voies d'inoculation, tant chez le rat blanc que chez la
souris, et leur retentissement sur l'évolution de la maladie expérimentale, en
particulier sur la période pré-patente, (cf. chapitre IV) ont été étudiées en
détail par G. FABIANI, E. VARGUES, G. FULCHERON, P. GRELLET et Mme A. VERAIN
(1 9) et ( 23 ) •
1-
La voie intra-péritonéale est celle de routine tant chez le rat que chez la
souris. Elle consiste pratiquement à introduire directement le parasite dans la
circulation générale. Des échecs quoique rares ont été signalés par tous les
auteurs. Ils ne peuvent êtr e attribués qu'à une faute de technique. Pour notre
part, c'est cette voie que nous,avons pratiquée tout au long de notre travail,
et nous n'avons jamais observ~ d'échec (1R).
2-
La voie sous-cutanée ne permet l'infection ni chez le rat ni chez la souris.
Aucune hypothèse n'a été retenue pour expliquer cet échec.
3-
La voie intra-eardiaque permet l'infection. Les hématozoaires passent immé-
diatement dans le sang; c'est la seule voie où il y a absence de période pré-
patente. Elle est réalisable chez le rat.
4-
La voie intra-eérébrale permet l'infection tant chez le rat que chez la
souris. Aucun échec n'est signalé. Elle ne révèle aucun neurotropisme.
5-
La voie intra-dermique permet aussi l'infection chez le rat et la souris,
mais avec quelques échecs. Elle n'est suivie d'aucune lésion locale macrosco-
pique.

---

6-
La chambre antérieure de l'oeil est utilisable chez le rat et permet l'iD-
tection. Aucun échec n'est signalé. Après inoculation, on note dans la chambre
antérieure de l'oeil un afflux leucocytaire important, avec constitution d'lm
exsudat important, et purulent.
7- La voie nasale a été étudiée chez la souris avec 50 %d'échecs. Pour réali~
ser ce dernier mode d'inoculation, la souris est préalablement anesthésiée l
l'éther, afin d'éviter le réflexe nauséeux, et on dépose sur les orifices nasaux
quelques gouttes de sang infecté, dilué. L'hématozoaire peut donc traverser soit
les muqueuses respiratoires, soit l'épithélium alvéolaire.
Les auteurs n'ont pas observé de multiplication précoce et intense de
Plasmodium berghei dans le parenchyme pulmonaire.
8-
La voie intra-veineuse a été expérimentée au laboratoire chez la souris.
L'injection se fait au niveau d'une veine de la queue. L'hématozoaire est tout
de suite introduit dans la circulation générale.
D'une manière générale, saur dans le cas de la voie intra-cardiaque
et intra-veineuse, la voie d'inoculation ne retentit pas notablement sur la
durée de la période prépatente et sur la marche générale de l'infection. Seules
les voies sous-cutanées et intra-musculaires ne sont pas utilisables.
E-
ENTRETIEN DE U
SOUCHE AU LABORATOIRE
Notre entretien de la souche s'effectue chez la souris ; ceci pose
tout de suite un problème, celui de la fréquence des passages successifs ; car
cet animal résiste mal à l'infection et meurt souvent avant le 10 ème jour. Nous
pratiquons donc des tranSplantations tous les 6 jours ; la voie d'inoculation
est la voie intra-péritonéale.

---

Pour apprécier le degré de parasitisme sanguin des animaux, on peut
exprvner soit le pourcentage de globules rouges parasités, soit le nombre de
globules rouges parasités par champs microscopiques. Pour
notre part, nous
avons évalué le pourcentage d'hématies parasitées. La technique retenue est
simple ; elle utilise la cellule de Malassez. On se comporte comme pour une
numération normale d'hématies. On compte le nombre de globules rouges parasités
et celui des cellules rouges saines dans la cellule de Malassez. On peut donc
ainsi déterminer le pourcentage de globules rouges infectés. cf. chapitre III).
t
..
•~r4,.,".!

---

11-
G. RAFFAELE et A. BALDI (46) ont confirmé ces données, en insistant auss
sur le polyparasitisme. On peut observer des hématies contenant jusqu'à 20 para-
sites, alors qu'un seul schizonte ne peut donner normalement que 10 à 20 méro-
zo!tes. De pius les,hématozoaires parasitent de préférence les erythrocytes baso-
philes qui augmentent en nombre à mesure que l'infestation évolue en gravité.
Pour L. MUmOW-REICHNOW, les gamétocytes ne sont observés qu'exception-•
nellement et pas toujours avec certitude.
Les aspects décrits par ces auteurs sont ceux du parasite étalé, fixé
et coloré par la méthode de GIEMSA. Le microscope optique courant, à condition de
diaphragmer convenablement, permet d'observer à l'état frais le parasite.
Nous avons pensé à utiliser le microscope à contraste de phase pour pré-
ciser les détails de structure du parasite à l'état vivant. Dans de telles condi-
tions, nous sonnes inunédiatement frappés par la différence d'aspect considérable
que présentent les globules rouges non parasités, par rapport aux cellules para-
sitées. Les premières apparaissent très réfringentes à la périphérie, avec une
zone centrale plus sombre correspondant à leur forme biconcave. Ils apparaissent
toujours entourés d'un halo lumineux. Les cellules parasitées, le plus souvent
des eythrocytes basophiles, mis en évidence sur les préparations colorées, sont
de très grande taille : elle atteint 2 à 3 fois celui des normocyt es , Elles ':?nt
de plus un aspect p~le non refringent, très caractéristique qui permet de les
différencier nettement. Elles sont limitées par une m~rane mince, sans halo
l\\ll\\ineux.
Envisageons sous ce nouvel aspect les divers stades de l'évolution du
Plasmodium berghei :
1-
Les mérozo!tes et les schizontes jeunes apparaissent à l'intérieur du globule
rouge comme des corps de petite taille, avec leur bloc chromatinien brillant et
bien visible. Ils évoluent librement dans le protoplasme de la cellule h8te. Ils
sont animés de mouvements extrèmement rapides, désordonnés, vibratoires, rappe-
lant ceux de certains flagellés. (cf. Photo 1).

---

10-
II-
MOOPHOLOOIE
A-
Données au microscope optique
Dans leur mémoire, I.H. VIlCIE et M. LIPS (64), ont donné une descrip
tion détaillée du Plasmodium berghei :
Trophozo!tc
présente 1 ou 2 points chromatiniens, une vacuo
le relativement importante, et dans le protoplasme un pigmen
noir très fin.
Corps en rosace
présente 8 à 14 mérozottes, exceptionnelle-
ment de 6 à 20, à blocs chromatiniens petits, entourant un
amas de pigment noir central, réduit.
Macrogamétocytes et Micri~amét~te's,'conservent au cours de
leur croissance une VaC,?'le au V~_~sinàge du noyau ; celui-ci
est petit et sc trouve ~~" PÇlsitibt'i: exceJ1trique.
',;,,~-- .
Ils insistent sur le polyparasitisme'poS$~Dle,hypertrophi~lt les
globules dans lesquels on ne distingue plus que les
blocs chromatiniens, la
m~e cellule rouge peut héberger plusieurs Trophozottes, et chacun évolue pour
son propre compte.

---

Photo l
Souris spl6nectomisée;
n· 13 172
numération au 5 ème jour ap~s l'infection
Cliché sur cellule de Malassez, en contraste
de phase.
Commentaire 1
Cette photo permet d'apprécier plusieurs éléments 1
- Le schizonte mftr appara!t comme une formation arrondie, h0mo-
gène, plus sombre que le protoplasme de la cellule hete. Le
globule rouge h8te a nettement augmenté de volume.
- Les gamêtocytes, au nombre de 2 sur le champ microscopique,
sont des formations volumineuses, immobiles, de forme ellipti-
que, avec des amas pigmentaires et un ~au massif peu distinct
d'aspect oranger.
- Les mérozo!tes se distinguent mal. Ce sont des petits points
p~les, normalement très mobiles. Le cliché ne permet pas
d'apprécier leur mobilité.

---

-
12-
2-
Les schizontes mOrs, les corps amiboldes se dégagent comme des formations
régulièrement arrondies ,plus homogènes, se détachant en sombre dans le proto-
plasme de la cellule hOtc. Leurs mouvements sont réduits, de type amibolde,
lents. Ces formes peuvent coexister dans une hématie avec des mérozoltes, et leur
passivité contraste avec l'agitation des éléments jeunes
qui les bousculent. Ils
semblent
rester localisés dans le même secteur de l'hématie. On peut distinguer •
le noyau excentrique. La vacuole n'est pas nettement visible; et le pigment sem-
ble en état poussiéreux mal distinct.
Dans le plasma, on rencontre des formes libres de ces deux catégories,
sans que l'on puisse affirmer qu'il ne s'agisse pas d'éléments libérés au cours
des manipulations, en raison de la fragilité excessive de la cellule enveloppe.
Les mérozo!tes se déplacent avec leurs mouvements propres, rapides, incessants.
Les schizontes mOrs et les corps amiboldes ne présentent que des mouvements pas.if.
4-
Les gamétocytes apparaissent beaucoup plus nettement par ce procédé d'observa-
tion. Ils sont plus nombreux que ne le laisse supposer l'examen des préparations
fixées et colorées. Ils sont de forme elliptique avec des amas pigmentaires et
des enclaves. Leur noyau ne se distingue pas bien, et présente un aspect plus mas-
sif. Ils sont à peu près dénués de mouvements propres. Nous n'avons pu observer
ni l'exflagellation des microgamétocytes, ni l'éclatement des corps en rosace.
Bous avons pu assiter une seule fois à la pénétration d'un mérozo!te dans le glo-
bule rouge.
En résumé, l'observation du Plasmodium berghei sur préparations fixées
et colorées ne donne qu'une idée incompl~te de la morphologie du parasite. l'ob-
servation au microscope à contraste de phase la complète heureusement. Elle per-
met de retrouver les aspects décrits sur les préparations fixées ; elle met mieux
en évidence les modifications de structure des globules rouges parasités. Seule
elle rend compte de la mobilité du parasite , très marquée dans les formes jeunes
ou de division, moindre dans les corps amiboldes. Les gamétocytes doués d'une
motricité restreinte sont plus faciles à reconnaitre et ne sont point rares.

---

13-
B-
Données au microscope électronique
Cette étude
morphologique du Plasmodium berghei a retenu l'intérêt de
plusieurs auteurs, tels que AlKAWA (1) et HEPLER. ERAL (37) en 1966. Elle a permis
d'apporter certaines précisions en concernant l'ultrastructure de l'hématozoaire.
à diÎÎérents stades
de son développement. Les diverses observations permirent de
préciser les principaux éléments du mérozolte et du trophozo!te puis de définir
une classiÎication de l'évolution du parasite dans le globule rouge. Nous ,nous
réÎérons ici aux conclusions apportées par ROGE. LADDA, MASAMICHI
AIIAWA, et
HELMl11'II
SPRUNTZ en 1969 (41).
Le mérozo!te
intra-érythrocytaire comprend une terminaison antérieure,
coup~e en cene, appelée région cono!de. Dans le cytoplasme, près du
cono!de, on voit des Îormations en poire, piriÎormes, dites paires
d'organelles, qui envoient des petites expansions jusqu'à la région
conn!de. On trouve dans le cytoplasme, au voisinage du cono!de des
petits corps de même densité que la paire d'organelles, décrits pour
la première Îois dans le toxoplasme : les toxonèmes.
GUESTAFSAN, AGEN et GRANER (1954) pensaient que ces éléments avaient
un rele au kcours de la pénétration dans la cellule hOte.
Le parasite contient un noyau unique avec un nucléoplasme granuleux,
dense ; il renÎerme aussi des mitochondries, une vacuole à double
membrane, un cytostome, et un réticulum endoplasmique dense. Son cy-
toplasme est plus sombre que celui de la cellule hete.
Le mérozo!te extra-érythrocytaire présente les mêmes traits morpholo-
giques et contient aussi un élément allongé en Îorme de poire. A
l'intérieur de son organisme se rencontre un matériel granuleux, dont
la composition chimique n'est pas connue. Ce mérozo!te extra-eellu-
laire présente un revêtement extérieur qui est dérivé vraisemblable-
ment de la vacuole du globule rouge dans lequel le parasite s'est
développé.

---

;n'j'm.
q
•
,., P1US
14-
Dès 1956
TRAGER (59) et en 1960 HUFFET (3A) ct ALGER, ont entrepris
des travaux sur le phénomène de p~nétration des mérozoltes~ Lors de leur libéra-
tion dans la circulation périphérique, ceux-ci sont en contact i\\vec de nombreux
globules rouges. Cependant ils doivent être orient~s convenablement vers la cellu-
le hOte pour que la pénétration s'effectue. Ce phénomène ne débute que si la région
conolde est orientée vers la membrane de la cellule hete. Selon GARNHAM (33), ceci
semble @tre un évènement passif se produisant au hasard. Il Il n'y a pas d'orga-
nelle spécialisé qui pourrait fournir la fonction locomotrice propre à orienter et
à propulser vers la cellule h8te. Il semble donc raisonnable de supposer qu'il
n'existe pas d'emplacement récepteur spécifique sur la cellule hOte,qui pourrait
mettre en action la fixation du parasite pour la pénétration ".
La région cono!de
engendre une dépression dans la membrane du globule rouge. Une cavité allongée se
forme à l'intérieur de. celui-ci, et va souligner la courbure du mérozo!te. QuaDI
la pénétration est accomplie, la membrane du globule rouge forme un anneau hermé-
tique, isolant une vacuole contenant le parasite. Le processus de pénétration en-
globe donc deux évènements : une orientation adéquate du mérozolte contre le glo-
bule rouge et l'entrée effective dans celui-ci.
GARNHAM et ALGER (1963) ont pensé que les paires d'organelles, et peut
@tre les corps denses (toxonèmes) de la région cono1de du parasite, contiennent
des substances qui facilitent le processus de pénétration. Pendant les étapes pré-
coces du phénomène les paires d'organelles du mérozolte diminuent en taille, de-
viennent moins denses et disparaissent rapidement. Cette séquence d'évènements,
constatée par Allf.'vlJ.. (1), HEPLER (37) et ALGER (1966) dans d'autres observations,
confirment la théorie qui veut que les matériaux contenus par ces organelles sont
dépensés uu cours du processus de pénétration. On pense qu'au niveau du cono!de se
localisent des enzymes protéolytiques qui intensifient la pénétration du parasite,
On peut suggérer donc que celui-ci secrète une substance protéolytique capable
de créer une cavité dans la membrane du globule rouge. R. LADM, Alr.AW/~ et HELMUTH
en 1969 concluent qu'il n'y .:1. pas rupture de la membrane de la cellule hOte. La
région cono!de contient certainement un agent actif en sur~~ce qui altère la sta-
bilité de l'enveloppe de l'hématie, permmttant la formation d'une ,cavité, ct fina-
lement d'une vacuole intra-eellulaire contenant le parasite.
.~

---

?PI)U2
7
R
il
15-
Une fois le processus de pénétration terminé, le parasite entreprend
une transformation remarquablement rapide d'une forme mérozo1te, hautement struc-
turée, à unè forme trophozo!te structuralement simple, entourée de deux membranes.
f
l~
La membrane interne est le "plasmalenvna" originel du mérozo1te ; la membrane ex-
~
terne est dérivée du "plasmalenuna" du globule rouge. Le parasite n'est donc pas
,
en contact direct avec le cytoplasme de la cellule hOte, mais est séparé par un
espace étroit et irrégulier à travers lequel se réalise un échange de métabolites
;
~.
par simple diffusion. On accepte à présent que le parasite dégrade l'hérooglobiDe
de l'hOte, libérant l'hème de la globine pour l'utiliser comme source principale
d'acides aminés.
C-
Développement du Plasmodium berghei
Éssayons de définir les différentes étapes du développement du parasite,
en se référant à la classification de JHON D. ARNOLD,
FRA~ LALLI, Daniel C.
MARTINS et HARRY TRUM/'"N (4), qui modifi e légèrement le schéma de RAMAXRI5HNAM (48) 1
Etape 1
( semblable à l'étape 1 de RAMAIRI5HNAM ).
Ce sont de petites formes en anneau qui n'altèrent pas la cellule rouge.
Elles n'excèdent pas 1 à 2 microns de diamètre et n'ont pas de pigment
visible.
Etape I I :
(
·comprenant les étapes II et III de RAMi\\XRI5HNAM ).
Ce sont de grandes formes en anneau qui n'altèrent pas la cellule rouge.
Elles ont un pigment détectable et la vacuole devient visible •
~
I,.i: ,..:;..
Etape III:
(étape IV de RAHAIRI5HNAM ).
Il
s'agit de trophozo!tes tardifs dans lesquels les vacuoles ont dis-
1
·.'~1.<l,"
,
paru. Les parasites ont 1 ou 2 grains de chromatine. Le trait le plus
caractéristique est un pigment lourd ; l~ cellule est agrandie. Le pa-
rasite occupe la moitié ou la
totalité de l'espace de la cellule rouge.

---

- - - - - - - - - . ' rt '
_1IIiIIIIIIIII
_ $
16-
Etape IV
( étape V de RAW.KRISHNAM ).
C'est le d~but de la segmentation. Les parasites ont 3 à 5 grains de
chromatine. Ils ont un pigment lourd qui est habituellement massif. La
cellule sanguine est élargie.
•
Etape V:
(étape VI de RAMAI:RISHNAM ).
Les parasites ont 4 grains de chromatine ou plus. Le globule rouge est
même plus agrandi que dans l'étape précédente. Les touffes de pigment
sont plus larges et peuvent atteindre la moiti~ de la taille des grains
~':.
de chromatine. Ceux-ci ont habituellement la forme d'une rosette.
, ;"
fI
Etape VI :
On rencontre les mérozoItes libres et flottants. Cc sont de petits para-
sites non attachés qui sont formés surtjut de chromatine. Ils apparais-
sent tout à fait semblables à de petits anneaux à l'intérieur de la
cellule rouge.
Voilà brièvement les stades de développement du Plasmodium berghei au
cours de son cycle intra-érythrocytaire, schizogonique ou de GOLGI.
Nous devons retenir de cette étude au microscope électronique les points
:,~'", essentiels suivants :
l i ,
"
Le mérozo1te présente une structure complexe différente chez le méro-
zo1te intra-cellulaire et chez le mérozoIte extra-eellulaire.
Les éléments structuraux tels que : la paire d'organelles et le co-
no1de jouent un rÔle dans la pénétration du globule rouge. Au niveau
de la région conoIde, il existe des substances protéolytiques capa-
bles de créer une dépression dans la membrane de la cellule bOte.

---

~.t--
....
17-
-
A l'intérie~ du globule rouge le parasite prêsente une double
membrane: l'interne est propre au "plasmalernma" de l'hématozoaire,
l'externe provient du "plasmalerruna" de la cellule hete.
Entre les deux membranes se situe un espace clair à travers lequel
s'effectuent les échanges
de métabolites par simple diffusion.
La globine de l'érythrocyte h8te constitue la principale source
d'acides aminés du Plasmodium berghei.
,~."
"
,
"

---

111-
EVOLUTION
HEMATOLOGIQUE
Dans ce chapitre nous étudierons comparativement l'évolution de llinEe
tion cré6e par le Plasmodium berghei chez la souris blanche normale et chez la
souris blanche sp Lénec'tomf sêe , Nous savons que la souris Sviss est très sensible
à ce parasite. Toute infection conduit inévitablement à la mort de llanimal.
A-
Matériaux et Méthodes
Notre série d'expériences s'est effectuée chez des souris Sviss adultel
dont liage variait entre 6 à R semaines. Pour compléter cette étude de llévoiutic
de 11 infection au Plasmodium berghei, nous avons utilisé également une autre sou-
che de souris, les souris C3H qui représentent une lignée pure.
Les différentes techniques utilisées au cours de nos travaux furent le!
suivantes 1
1-
Frottis de sang
çOnfec~_~~2!~!~ : Poser la goutte de sang à 1 cm environ du bore
droit de la lame. L'épaisseur de celle-ci ne doit pas dépasser 3 à 4 ni
Poser le bord~ la lamelle à un angle environ de 20 à 40 0. Amener celJ
ci au contact de la goutte. Pousser la lamelle vers le bord libre de lë
lame. Maintenir toujours l'angle primitif et pousser d'un seul coup sar
s'arr@ter. Le sang suit la lamelle.
Llétalement est d'autant plus mince qu'il est fait lentement, et que
l'angle est plus faible.
Sécher rapidement en agitant à l'air. Ne jamais chauffer.

---

q
•
- - _......_------------
19-
Coloration des lames de sang:
Placer
sur un cristallisoir un sup-
------------------------------
port à lames fait de 2 agitateurs réunis à leurs extrémités par un
tube de caoutchouc ; y poser les lames en évitant qu'elles se touchent.
Verser à l'aide d'une pipette environ 1 cc de KaY-Grunwald; attendre
1 à 2 minutes et verser la même quantité d'eau distillée neutre. Au
bout d'une minute laver à l'eau distillée et recouvrir de colorant de •
,
Giemsa dilué (·1,5 cc dans 20 cc d'eau distillée neutre).
.
Laisser 15 à 30 minutes, laver, essuyer le dessous des lames et les
mettre à sécher sur un portoir en bois.
A noter que le colorant ne doit pas @tre versé en inclinant la lame
mais chassé d'un jet de pissette.
2-
Numération
Prélever le sang à la queue de la souris à l'aide d'une pipette de
Potain. Diluer avec la solution de Marcano. agiter. Puis déposer sur
la cellule de Malassez. Dénombrer au microscope le nombre de globules
rouges parasités et celui des cellules rouges saines.
3-
Frottis de moelle
Les frottis doivent ~tre exécutés avec délicatesse pour ne pas écraser
les éléments qui sont très fragiles.
On procède par apposition avec la surface de section de l'os ou d'un
petit fragment de moelle que l'on tient au bout d'une pince. Ou peut
aussi étaler la moelle avec une aiguille ou un fil de platine, en di-
luant au besoin avec un peu d'eau physiologique.
Sécher rapidement ; colorer comme les frottis de sang.
4-
Empreintes
Prélever l'organe, couper longitudinalement et verticalement la pièce.
La prendre avec une pince et la posez délicatement sur une lame très
propre. Puis colorer au May Grunwald-Giemsa.

---

-
5- Goutte épaisse
Dégraisser les lames au mélange alcool éther ; les manipuler en les
tenant par les bords, sans jamais toucher la sur.face de la lame avec
la pulpe des doigts.
Déposer une grosse goutte de sang au centre de la lame. Etaler en couchel
minces en tournant avec le coin d'une lamelle jusqu'à ce que le sang
soit sec. Laisser sécher à l'abri de la poussière quelques heures à
1'6tuve pour éviter le décollement de la goutte lors de la décoloration.
Déshémoglobiniser en la recouvrant d'eau salée à 9 pour 1000 ; jeter le
liquide.
Fixer par l'alcool méthylique pur pendant quelques minutes; jeter
l'alcool.
Préparer extemporanément la solution colorante 1
- colorant de Giemsa 3 gouttes
- eau tamponnée ( Ph 7,5 ) 1 1 ml
et en recouvrir la goutte épaisse. Laisser agir 20 minutes et laver à
l'eau du robinet. Sécher et examiner à l'immersion.
6-
Coupes histologiques
Le prélèvement de l'organe est suivi d'une .fragmentation de la pièce en
3•
morceaux de taille variant de 1/3 à 1/2 cm
La .fixation est assurée dans du liquide de Bouin selon la technique
classique.
Puis suivent le lavage, la déshydratation, l'imprégnation au toluène et
à la para.f.fine, l'enrobage.
L'orientation optimale était atteinte par hasard ; en e.f.fet nous n'avons
pas pu obtenir sur les lames spécialement celles de .foie et de rate, la
présence de capsule caractéristique de l'organe. Nous pratiquons au
microtome des coupes de 1 à 2 microns d'épaisseur. Nous collons nos cou-
pes à l'eau albumineuse.

---

21-
Après séchage, déparaffinage, hydratation, elles étaient colorées
généralement à l'hémalun-éosine (hémalun de Mayer) selon la technique
b~en connue.
7- Technique;de transplantation
Nous avons utilisé deux méthodes dif'férentes 1
, .
a)
Première méthode
1
Prendre une souris adulte de 6 à A semaines, vérifier son poids.
L'endormir au Nembutal en raison de 100 mg,/Ig
par injection intra-
péritonéale. Pratiquer une incision parasternale gauche pour obtenir
une voie d'accès rapide au coeur. Puis à l'aide d'une aiguille et d'une
seringue prélever du sang par ponction intra-eardiaque.
En règle on obtient à peu près 0,3 à 0,5 cc de sang. Prendre 0,1 ml
de sang pour effectuer des dilutions successives dans 0,9 ml d'eau
physiologique stérile.
A partir des dilutions prélever 0,1 ml et l'injecter à la souris
"receveur" par voie intra-péritonéale.
Nous avons connu quelques échecs par cette méthode •
L.·'
, b) Deuxièmeméthode
.'
Anesthésier la souris à l'éther sous une cloche; et pratiquer une
ponction au niveau du sinus caverneux à l'angle interne de l'oeil à
l'aide d'une pipette Pasteur, au préalable héparinée. Le sang monte
par capillarité.
Verser le contenu dans un verre de montre. Puis prendre 0,1 ml et se
comporter comme prL~édemment.
Cette méthode nous a donné satisfaction, et elle a l'avantage de ne
pas tuer la souris.

---

.7_..........
__
' S
22-
A- Technique de la Splénectomie
Endormier la souris au Nembutal à raison de 100 mg/Ig conune précédem- .
ment, et compléter l'anesthésie par l'éther.
Mettre l'animal sur une planche et fixer les membres par de l'alba-
pIast. Pratiquer une incision de 1 cm oblique, sous costale gauche.
Inciser les différents plans pour atteindre la rate. La disséquer de
sa loge graisseuse ; et localiser le pédicule splénique que l'on liga-
ture par de la soie. Puis prélever la rate ; refermer plan par plan
en suturant.
Prendre la souris et la placer dans une cage 00 elle est réchauffée
par une lampe. Lui donner à boire . 6 heures après ; et la laisser
s'alimenter normalement au bout de 24 heures.
B-
Résultats
Nous groupons dan~ ce même chapitre l'évolution et l'hématologie, car
les signes cliniques sont peu importants et ne se manifestent qu'aux approches
de la mort. J.près inoculation intra-péritonéale, les hématozoaires n'apparais-
[
sent dans le sang qu'après un certain délai, que nous appelerons "période de
~
(,
latence hématologique", au cours de laquelle se rencontrent des modifications
~~
sanguines
très importantes. Peu avant la mort se dégagent des s~ptomes clini-
/"
ques évidents:
amaigrissement, décoloration des téguments ; l'animal frissonne,
s'isole et cesse de s'alimenter.
1-
Symptomatologie
Au cours de nos travaux notre attention a été retenue par un phénomène
de perte de poids de l'animal, qui était nettement plus accusé chez la souris
spléncctomisée 72 heures après l'infection. (cf. Tableau nO 1). En se rapportant
à celui-ci, on peut l'apprécier d'une manière comparative. Il s'agit de 12 souris
dont R sont splénectomisées. On remarque que la perte de poids est à peu près
identique entre les souris normales et celles splénectomisées 8 jours avant

---

'"!'-;O:-~-~,
Tableau
N°
1
·
Souris infectées normalement
1 Souris splénectomisées avant injection
1 Souris splénectomisées après injection
·
·
:
·
:
1
·
1
N° Souris
: P. Vivante
1
P. Morte
·
·
1
·
1
N° Souris
: P. Vivante
: P. Morte
·
·
: N° Souris
1
P. Vivante :
P. Morte
··
·
1
·
·
·
·
·
1
·
··
·
1
1
·
13 222
:
29 g
1
25 g
·
·
•
13 192
:
25 g
·
21 g
· 13 237 1
27 g
·
21 g
·
·
·
·
:
1
·
13 226
·
·
·
25 g
1
21 g
· 13 181 ·
21 g
·
18 g
· 13 236 1
22 g
·
15 g
·:
1
·
·
·
·
·
·
:
13 227
·
·
·
·
27 g
1
23g
:
13 185
1
26 g
·
22 g
· 13 235 1
23 g
·
16 g
·
1
·
·
·
·
1
1
13 228
·
·
·
29 g
1
25 g
· 13 038 ·
32 g
·
28 g
:
13 231
1
30 g
·
25 g
·
·
·
·
·
·
1
·
·
1
·
·
:
1
·
·
·
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1

---

24-
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l'infection. Pour celles splénectomisées 72 heures après l'infection, l'amaigris-
sement est très intense. Or, au moment où a lieu la splénectomie, c'est à dire
3 jours ap~s l'infection, la souris ne présente pas encore d'altération de l'état
général ; son poids n'a pas varié. Mais à l'autopsie l'animal accuse une forte
diminution de poids. Pour illustrer ce fait, donnens deux exemples z
•
- Souris nO 13236
- Infection le 30 - 03 - 73
- Poids : 22 g.
- Splénectomie le 2 - 04 - 73
- Poids 22 g.
Autopsie le 5 - 04 - 73
- Poids 15 g.
- soit une perte de poids de 1/3.
- Souris nO 13237
- Infection le 30 - 03 - 73
- Poids 'Z7 g.
- Spl6nectomie le 2 - 04 - 73
- Poids 'Z7 g.
Autopsie le 5 - 04 - 73
- Poids 21 g.
soit une perte de poids de 1/4.
Les autres signes cliniques n'ont pas présenté de particularités dans
les trois types de souris que nous possédons.

---

i:'cc,
25 -
,i
f;
2-
Durée d'évolution
Les premiers auteurs avaient donné des chiffres superposables •
I.H.VINCXE et M. LIPS (63) 11 à 15 jours, H. GAILLARD et J. LAPIEIRE (29) 19 à
22 jours, G. RAFFAELE et A. BALDI de la 2 ème à la 5 ème semaine. Actuellement
on sait que l'infection au Plasmodium berghei de la souris Swiss conduit inév~­
tablement à la mort de l'animal dans un délai rapide. Pour notre part nous avons
observé des morts s'échelonnant entre 5 et 10 jours,mais d'une manière générale
l'évolution ne dépasse qu'exceptionnellement 15 jours. Les divers groupes de
souris, normales, splénectomisées R jours avant et 72 heures après l'infection
présentèrent des comportements différents que nous résumons dans les tableaux
2 et 3.
Les souris normales, c'est à dire, non splénectomisées, ont un pic
d'évolution qui se situe sur le A ème jour. Leur
durée d'évolution ne
dépasse
pas A jours.
Les souris C3H présentent aussi un maximum de mortalité au R ème jour.
Ici, on est frappé par la régularité du phénomène (tableau IV).
Les souris splénectomisées A jours avant l'infection ont une durée
d'évolution qui s'échelonne entre 6 et 10 jours. Elles présentent donc ainsi une
évolution prolongée par rapport aux souris normales.
Les souris splénectomisées 72 heures après l'infection accusent une
durée d'évolution diminuée variant entre 5 et 6
jours. On peut suggérer qu'elles
révèlent une certaine fragilité ; la mortalité des splénectomies chez les sou-
ris non infectées a été nulle durant cette expérimenta~ion. Les suites opéra-
toires furent très simples. Nous avons rencontré deux accidents au cours de
,. l'anesthésie à l'éther. Nousavons 3cas oàl'animal n'a pas survécu24 heures
apris la splénectomie.
3-
Période de latence hématologique
C'est la période pendant laquelle l'hématozoaire n'est pas encore
décelable dans le sang circulant. La variabilité de sa durée a été signalée
par tous les auteurs ; les chiffres donnés vont de 1 heure ( H. GAILLARD et

---

NOMBRE DE SOUR IS
INFECTEES
NORMALEMENT
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JOURS

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---

26-
J. LAPIERRE - 30) à 4 jours ( G. FABIANI et Collaborateurs - 19 ). Il est certain
qu'intervient dans la dèt ermdnat ton de ce temps la rigueur avec laquelle l'esamen
du sang a été pratiqué. Il est à noter que le chiffre d'une heure a été trouvé par
des auteurs qui exigent pour la négativité d'un examen de na pas avoir vu un
hématozoaire sur 500 champs microscopiques à l'immersion, alors que d'autres
n'exigent que 50 champs examinés.
Mais il est un problème plus intéressant que la durée de cette phase,
c'est celui de sa signification. En particulier doit-on lui attribuer la valeur
d'une incubation vraie correspondant à une phase tissulaire du parasite? Des
formes exo-érythrocytaires de Plasmodium berghei ont été décrites par L. VAN DEN
BERGHE, 1. VlNeKE et M. CHARDOME (60) dans les cellules histiocytaires du foie,
de la moelle osseuse, et dans les cellules endothéliales des capillaires. Elles
se distinguent par un nombre élevé de mérozoltes ( + de 30) et un cytoplasme plUS
basophile. Ces formes ont été retrouvées dans le poumon par Ed. SERGENT et MINe
A. PONCET.
Cette conception séduisante devait être par la suite discutée par de
nombreux auteurs qui, malgré de patientes recherches, n'arrivaient pas, avec les
souches parvenues en Europe, à retrouver les aspects décrits par les auteurs
belges ( J. SCHNEIDER et C.R. SCHNEIDER, H. GAILLARD et J. lJ\\PIERRE, L. MUDEROW
et REICHN~l ). Elle fut battue en brèche par deux séries d'expériences.
Pour J. SCHNEIDER et C. SC~nJEIDER (52) le temps d'incubation doit cor-
respondre simplement au temps n6cessoire à une multiplication suffisante du para-
site pour qu'il puisse se révéler à l'examen du microscope. Ces auteurs ont em-
ployé pendant cette période de latence chez la souris la
méthode de l'isodia-
gnostic. Celle-ci consiste à prélever à un moment donné 1/1000 de cc de sang et
à l'injecter par voie intra-péritonéale à une souris neuve que l'on vérifie ulté-
rieurement pour prouver la présence de parasites dans le sang. Ils ont ainsi
effectué des passages quotidiens à partir du premier jour, des passages pendant
"
les 14 premières heures, et enfin de 10 mn en 10 Mn. L'iso-diagnostic était posi-
tif pour toutes les souris. Ils conclurent : " nous avons acquis la conviction
que lorsque le Plasmodium berghei est transmis de souris en souris par injection
intra-péritonéale de sang infestant, le sang de la ·souris receveur devient à son

---

'rI-
tour infestant dans un délai très court, inférieur à 1 heure, qui peut m""e atre
de 10 mn seulement. Il correspond à la vitesse de passage dans la circulation
générale dU "r-eceveur" des hémoparasites injectés dans son péritoine". Il n'y
a donc pas dans ces conditions d'incubation. De plus ils constatèrent que le
"potentiel schizogonique " du Plasmodium berghei ne subit pas de variations au
cours de l'évolution chez une même souris.
Dans nos travaux, au vu des courbes représentant les parasitémies san-
guines, cette période de latence serait de 24 heures. En Eait les hématies para-
sitfes se rencontrent beaucoup plus tOt. Mais durant les premières heures leur
évaluation en nombre est sujet à une grande marge d'erreur.
G. F1\\BI1\\NI, R. Vh.RGUES, G. FULCHERON, p. GRELLET et Mme A. VERAIN (19)
ont étudié les Eacteurs et la signiEication de cette période de latence hémato-
logique qu'ils ont appelée période pré-patente selon une terminologie proposée
par JAMES.
a)
Influence du nombre d'hématozoaires inoculés
L'inoculation se Eaisait par voie intra-péritonéale. Pour dét~er 11
nombre d'hématozoaires inoculés, ils Eixent préalablement le pourcen-
tage d'hématies parasitées par un examen du sang sur lame. Le sang
prélevé est alors mis en suspension dans du liquide de Ringer ; le
nombre d'hématies par mm3 est déterminé à la cellule de Malassez.
Deux séries d'expériences ainsi eEEectuées chez 51 souris et 49 rats
blancs ont permis à ces auteurs d'établir une courbe donnant la durée
de la période pré-patcnte en Eonction du nombre d'hématozoaires inocu-
lés. De plus ils ont recherché si des doses très minimes étaient sus-
ceptibles de créer l'infection. C'est ainsi que 7 souris, dont 4 splé-
nectomisées ont reçu dans le péritoine : pour 5 d'entre elles une hé-
matie parasitée prélevée au micro-manipulateur de Foltbrune, une autre
2 hématies et une dernière 4. Aucune souris n'a présenté d'infection.

---

,t
Il semble qulil faille inoculer au moins 1000 hématozoaires pour obtenir une
infection suffisamment constante.
Une partie de nos expériences s'est effectuée avec des dilutions
variées. Dans un premier temps on a cherché à mettre en évidence Ulle modifica-
tion dans la durée d'évolution en fonction du nombre de parasites inoculés, et •
voir s'il n'y a pas variation aussi de la période prépatente.
Examinons les ~rois exemples suivants :
1-
Souris nO 13041 male
- splénectomisée le 6 - 03 - 73
- infectée le 14 - 03 - 73 par 200 00
éléments dans 0,1 ml
- période prépatente 24 heures
- autopsie le 21 - 03 - 73
2-
Souris nO 129AA femelle
- splénectomisée le 6 - 03 - 73
6
- infectée le 14 - 03 - 73 par 2 x 10
éléments dans 0,1 ml
- période prépatente 24 heures
- autopsie le 21 - 03 - 73
3-
Souris nO 13225 mâle
- non splénectomisée
6
- infectée le 21 - 03 - 73 par 1,73 x 10
éléments dans 0,1 mJ
- période prépatente 24 heures
autopsie le 2A - 03 - 73
Les différentes concentrations que nous avons utilis~es n'ont pas en-
trainé de modification, aussi bien sur la durée d'évolution de la maladie que
sur la période pré-patente.

---

"
t
",c
t
,
b)
Influence de la qualité de l'inoculat
. Pour expliquer les variations importantes de la période pré-patente
avec des inoculats par ailleurs quantitativement égaux, ces auteurs font inter-
venir la qualité de l'inoculat. En effet, tant chez le rat que chez la souris,
•
à nombre égal d'hématozoaires inoculés, la durée de la période pré-patente est
plus longue pour un inoculat provenant d'un animal en fin d'évolution que pour
celui provenant d'un animal en début d'infection.
c)
Influence de la voie d'inoculation
D'une manière générale, la voie d'inoculation influence peu la durée
de la période pré-patente, et l'évolution générale de la maladie, tant chez le
rat que chez la souris. La période pré-patente est cependant absente dans le
cas de la voie intra-cardiaque utilisée chez le rat.
Quand à la signification de la période prL-patente, G. FABIAN! et ses
collaborateurs (19) rejettent après discussion l'hypothèse d'une phase exo-éry-
throcytaire du Plasmodium berghei, n'ayant observé qu'une seule fois la schizo-
gonie réticulo-endothéliale décrite par les auteurs belges. Pour défendre leur
conception, ils inoculent par voie intra-cardiaque chez un rat un nombre consi-
dérable d'hématozoaires ( 50 à 100 millions dans 0,5 cc) ; ceci permet de dé-
couvrir immédiatement les parasites au niveau du sang périphérique à l'examen
microscopique. Ils effectuent des examens répétés immédiatement après inocula-
tion pendant 4A heures. Dans ces conditions ils observent :
l'apparition des hématozoaires
dans le sang de la queue aussitet
après l'inoculation;
la diminution du taux des hématies parasitées dans les 10 mn qui
suivent, phénomène qu'ils expliquent par l'arr@t d'un certain nom-
bre de parasites dans les organes profonds.

---

30-
l'augmentation du nombre des hémntozoaires dans. le sang circulant
18 heures après inoculation intra-eardiaque, augmentation qui ne
peut s"expliquer que par une multiplication active du parasite.
Ces auteurs ont fait remarquer que, lors des premiers examens, ce sont des hé-
maties poly-parasitées et polychromatophiles provenant manifestement de l'anima~
donneur qui se rencontrent dans la circulation, tandis que plus tard ce sont des
hématies oxyphiles contenant un trophozo1te jeune et ne pouvant appartenir qu'à
l'animal receveur.
Ces expériences confirment donc les expériences de J. SCHNEIDER et de
C.R. SCHNEIDER (52). Il devient difficile d'interpréter l'effet observé par les
auteurs belges. G. FABIAN! et ses collaborateurs (19) y verraient volontiers
"le souvenir
de l'évolution du Plasmodium dans sa transmission naturelle".
4-
Période ';hématologique
Au décours de la période précédente,mais progressivement, les héma-
tozoaires suffisamment nombreux pour être décelés à l'examen microscopique,
apparaissent dans le sang de la souris ; ils vont se multiplier, créant des lé-
sions hématologiques de plus en plus importantes qui aboutiront à plus ou moins
brève échéance à la mort de l'animal. Ce sont ces modifications hématologiques
que nous allons étudier maintenant :
l'augmentation du nombre des hématies parasit6es,
le développement synchrone et la séquestration vasculaire en péri-
phérie,
la diminution des cellules rouges du sang avec les modifications
globulaires,
- la leucocytose et les modifications de la formule leucocytaire.

---

31.
a)
AUgmentation du nombre des hématies parasitées
f
,
Elle se fait régulièrement jusqu'à la mort, moment oÙ le pourcentage
d'hématies parasitées peut atteindre AO et même 90 %. Cette variation des éry-
throcytes parasités va être caractéristique de chaque catégorie de souris. Le
tableau
nO V présente les 3 courbes de variation correspondant à chaque type
de souris.
1-
Les souris normales, c'est à dire non splénectomisées, présentent
après 24 heures d'infection un pourcentage de globules rouges parasités aux en-
virons de 25 %. Puis s'effectue une ascension rapide le lendemain à 65 - 6A %
c'est un véritable envahissement brutal. Par la suite la progression est plus
lente pour atteindre 90 % à la mort de l'animal.
2-
Les souris splénectomisées A jours avant l'infection accusent tout
de suite au bout de 24 heures, une parasitémie atteignant presque 70 %. C'est
une véritable "septicémie" d'évolution rapide. Il aurait été intéressant de pré-
ciser l'allure de la courbe durant les 24 premières heures. On aurait pu véri-
fier si le développement et la croissanxe du Plasmodium berghei obéissent à une
loi mathématique du type
N = No x e t. Mais ici encore nous avons rencontré
des difficultés pour apprécier quantitativement les cellules rouges parasitées
durant les premières heures. A partir de 70 % la parasitémie augmente progressi-
,.'..~ vement pour atteindre également 95 %à la mort de l'animal.
...'."~.
3-
Les souris splénectomisées 72 heures après l'infection présentent
la particularité suivante: le début d'évolution est comparable aux souris nor-
males avec une parasitémic aux alentours de 75 % au 3ème jour ; et le lendemain
de la splénectomie le nombre d'hématies parasitées monte brutalement à 85 - 90 %.
Il n'y aura plus de variation sensible jusqu'à la mort de l'animal.

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2
3
4
•
• JOURS

---

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_
En conclusion, la splénectomie entra!ne une parasitémie importante,
supérieure à l'animal normal; le lendemain de l'ablation de la rate s'effectue
uae véritable décharge parasitaire en périphérie mise en évidence par une élé-
vation rapide de la parasitémie. GAILLARD (29) a montré que la splénectomie pro-
voque chez le rat blanc une infection comparable à celle de la souris avec para-
sitisme intense et mort dans les mames délais, alors que chez le rat normal la •
guérison survient spontanément au 3D ème j OW'. En réal!té les rats j eunea ( 80
t 90 grs ) meurent par.fois de Leur infection dans un délai de 5 jours environ,
et avec un nombre de parasites aussi élevé que chez la souris. En fait, l'êVo-
lution de l'infection même mortelle est progressive chez le rat, et véritable-
IIeI'1t explosive chez la souris.
BROON MURARD (13) en 1954 a cherché à savoir si la splénectomie pouvait
provoquer un réveil de l'infection avec un car-ac tèr-e évoluti.f aussi intense et
ausd grave que chez le rat splénectomh6 avant l'in.lection. Il o~re donc 3
rats, 5. 10, et 20 joW's après la disparition apparente des parasites. L'inocu-
lation du sang des deux dernier à 6 soW'is, la veille de l'opération, a entraiDé
une infection dans le premier cas, et n'a pas donné de résultats dans le second.
La rechute parasitémique s'est produite chaque fois 4 à 5 jours après l'opération.
Mais le nombre maximum de parasites a été dans chaque cas le mame que celui de
la primo-infection. La guérison apparente s'est produite 23 à 25 jours après la
splénectomie. L'infection est don: restée bénigne. Le sang du rat 2 guéri depuis
6 jours, a été injecté par voie intra-péritonéale à 2 souris qui se sont infec-
tées après une incubation de 7 jours. Ce rat a présenté par la suite deux autres
rechutes durant 4 à 5 jours à une semaine d'intervalle. La splénectomie provoque
donc une rechute de l'infection, mais elle présente les mêmes carac~res de du-
rée et de banignité que la primo-infection chez le rat normal. La résistance
acquise au cours de la primo-infection est su.ffisante pour que l'évaluation ne
soit pas aussi grave que chez le rat inoculé après splénectomie.
Les e.ffets de la splénectomie sur l'évolution de l'infection et sur la
rechute parasitaire dans le cas du Plasmodium berghei chez le rat et la souris,
conf::Lrment ceux qui ont été signalés à propos d'autres Plasmodiums. Ainsi les
iDfections sont plus intenses chez les singes spl~ectomisés que chez les normaux.

---

33-
(GONDER et ROŒNWALT'l' 1910
SINTON et MULLIGAIS 1935
IRISHNAM, SMITH et LAt
1933-1934 ; INOWLEC et GUPI'A 1934 ; NArcx et KALLA!tJS 1935 1 MULLIGAIS,
SOHMESVILLE et SWAMINATH 1940 ). D'après KRISHNAM l'infection au PlasmocU\\ID iDu
est plus sévère et plus réfractaire à l'action des médicaments chez le siDge
splénectomisé que chez le singe normal. Pour TERZIAN (1946) la splénectomie ré-
duit l'immunité acquise dans le cas du Plasmodium gallinaceum. TALIAFERRO (194ê
1949) montre que la splénectomie aggrave l'infection au Plasmodi\\ll\\ gallinace\\ll
chez les poulets traités ou non par la quinine. D'ap~s cet auteur le r8le de
la rate n'est pas d'accroitre l'action suppressive de la quinine, mais d'ajoute
un facteur anti-parasitaire. Ce facteur concerne l'iJmnmité acquise qui est ré-
i'
•
duite par la splénectomie, mais non l'immunité naturelle.
Récemment (1973) WILLIAM E. COLLINS, Jinvnie C. SXINNER, Peter G.
CONTAGOS, E.G. GUINN et Bettye B. RICHARDSON (71) ont examiné les infections à
Plasmodi\\ll\\ fieldi dans 3 groupes de singes "macaca mulata" pour essaper de dé-
terminer les parasitémies, les gamétocytémies, les anticorps indirects immune-
fluorescents et l'infection des moustiques 1 anophèles rreeborni. Un total de
410 lots, contenant 9687 moustiques, ont été disséqués et observés pour déceler
la présence des oocystes.
Le premier groupe concerne 4 singes intacts inoculés respectivement
8
7
6
8
avec 1,8 x 10
;
96 x 10
•
12,5 x 10
et
19 x 10
parasites. Four le8
quatres singes le point maximum de parasitémie était bas. La parasitémie maxi-
3
male de 25300 /
mm
se produisit 7 jours après l'inoculation. La première mon-
tée .fut suivie par des niveaux parasitaires plus faibles pendant une période de
10 jours ou plus. Chez 3 des animaux cela .fut suivi par une seconde montée de
densités parasitaires. Des 137 lots de moustiques alimentés sur ces singes pen-
dant la période d'observation de 35 jours, 86 (62,8 %) étaient infectés. Les ni·
veaux d'index gamétique les plus élevés se situaient entre 25 et 30 jours ap~s
l'inoculation. Les montées initiàles dans la réaction des anticorps indirects
se produisirent entre 7 et 9 jours après l'inoculation. Les infections initialeJ
des moustiques semblaient @tre en corrélation avec l'apparition des anticorps
détectables. Les périodes sub-séquentes d'infection des moustiques apparaissaien~
co!ncider soit avec des degrés élevés es anticorps indirects, soit avec un dé-
clin graduel dans les niveaux de ceux-ci après un~ réponse maximale.

---

-
Dans le deuxième groupe, i l s'agit de 4 singes ayant subi l'ablation de
la rate 1 jour avant l'inoculation. Pour ces animaux les auteurs observèrent une
montée précoce bien distincte de la parasitémie qui atteignit un maximum entre le
6 ème et le 7 ème jour après l'inoculation. Les niveaux parasitaires étaient plus
élevés que ceux obtenus avec les 4 animaux intacts du premier groupe. Les degrés
d'infection des moustiques étaient étroitement liés aux "maxima" de la parasitém1e.
Ils ont été obtenus entre le 4 ème et le 7 ème jour, entre le 12 ème et le 15 ~me,
entre le 24 ème et le 34 ème. Sur 137 lots de moustiques alimentés, 109 (79,6 %)
contenaient des moustiques infectés. Plus designificatif, le degré d'index gaméti-
que était nettement supérieur à celui du groupe n'ayant pas subi l'ablation de la
rate. Les montées initiales des anticorps indirects se sont produites entre le
7 ème et le 10 ème jour après l'inoculation. Les premières infections des mousti-
ques ont été obtenues avant l'apparition des anticorps détectables.
~.
La 3 ème série d'expériences se réalise sur des animaux ayant subi l'a-
blation de la rate après inoculation. Les 4 singes concernés furent opérés respec-
tivement à 21,13 et 12 jours après l'infection. Pour les 4 animaux la période
avant la splénectomie peut être comparée à celle du premier groupe de singes. Chez
3 singes de ce dernier groupe, opérés 12 ou 13 jours après l'inoculation, les in-
fections des moustiques après l'ablation de la rate ont été obtenues dans 50 lots
sur 66 soit 75,8 %, avec un index gamétique faible. Chez ces animaux la production
des anticorps diminue après la splénectomie, atteignant un point faible pendant
4 à 8 jours. C'est pendant cette période que certaines des infections des mousti-
ques les plus élevées furent observées.
Il semble donc que la splénectomie, en plus de son effet d'augmenter la
parasitémie, a également un effet marqué sur les degrés d'infection des moustiques.
L'ablation de la rate chez les animaux, ayant présenté pendant 2 ou 3 semaines une
parasitémie patente, entratne des densités parasitaires plus basses que celles de
ceux splénectomisés avant l'inoculation. Les parasi témies chez ces animaux étaient
semblables à celles de la réaction première de ceux laissés intacts. Nous n'avons
pas observé ce phénomène chez les souris splénectomisées en cours d'infection. En
outre, les infections des moustiques s'étaient accrues de fa~on dramatique. Il
appara!t que la splénectomie soit stimule la product~on des gamétocytes, soit sup-
prime les mécanismes qui chez l'hÔte peuvent avoir un effet défavorable sur la pro-
duction des gamétocytes. Ces résultats montrent aussi que l'ablation antéri~ou

---

35-
postérieure de la rate entra!nerait une augmentation de la parasitémie indiquant
une réduction des facteurs de défense de l'h8te.
Ce problème de l'immunit6 acquise aux infections à Plasmodium berghei
a retenu l'attention de plusieurs observateurs. Willie M. CHAPMAN, Wulliam L.
HAUSON (72) se sont intéressés à l'effet de la thymectomie sur l'immunité au
Plasmodium berghei chez le hamster doré. Ils constatèrent que les hamster DOuvea~
nés thymectomisés développent plus rapidement un parasitisme important et présen-
tent une mortalité plus précoce et plus forte que les sujets de contrOle. Ces
observations suggèrent que l'immunité dépendant du thymus, qui est cellulaire,
joue un rOle primordial dans l'acquisition de l'immunité au Plasmodium berghei
chez le hamster doré. Le mécanisme exact, par lequel la thymectomie altère la
réponse de l'hOte, n'est pas connu; mais la ré~ction affectée par celle-ci est
l'immunité cellulaire.
Le problème de l'immunité dans le paludisme est à l'ordre du jour &
Les chercheurs visent à découvrir une méthode immunologique de traitement per-
mettant de remplacer la chimiothérapie. Il n'y a pas d'immunité naturelle dans
le paludisme, seulement une immunité naturelle relative très limitée & l'hémoglo-
bine 5 protégerait .contre le Plasmodium
falciparum, de même que la déficience
en glucose 6 phosphodéshydrogénase. Il existe surtout une immunité acquise pla-
çant à la longue l'h8te et le parasite dans une situation de "paix armée".
L'existence de cette immunité acquise, pour fragile qu'elle soit, a été démontrée
en particulier par 1 ' arrivée d ' individus neufs en zone endémique. Chez eux le
paludisme fait des ravages, alors qu'il régresse cliniquement chez les autoctones
en fonction de l'age. Ceux-ci, transplantés en Europe ont rarement des mani.festa-
tions cliniques du paludisme, même si on surprend par des .frottis la présence
d'hématozoaires. Comme ils ne sont plus soumis à l'infestation, leur immunité
s'affaiblit et dispara!t en 2 ans environ. A leur retour chez eux ils se présen-
tent alors comme des sujets neufs et sont exposés à un accès pernicieux. L'immu-
nité palustre est précaire et instable, elle s'acquière lentement, dépend du
.facteur temps et du facteur densité parasitaire. Elle doit @tre entretenue pour
durer ; c'est en fait un état de prémunition, de semi-immunité ou d'immunité rela-
tive ( SERGENl' ).

---

'..,'; ,
36-
Le paludisme endémique est la cause majeur de l'élévation des gamma-
globulines chez l'africain. Les immuno-globulines varient en sens inverse de la
parasitémie. Les IgM qui sont peu spécifiques apparaissent d'abord, tandis que
les IgG plus spécifiques ne surviennent que plus tard ; les 19A et 19D sont par
contre normales. Ce sont les schizontes et les trophozo!tes qui sont antigéniq~
mais non les gamétocytes et les corps bleu&. L'acquisition'de l'immunité est liéE
à la synthèse de ces immuno-globulines actives contre les formes endoglobulaires
et la liason antigène-anticorps efficace s'effectue
vers la fin du cycle asexué.
Quant à llimmunisation active tendant à remplacer la chimioproPhylaxie, elle est
encore tain de recevoir des applications pratiques. Peut @tre l'administration dE
doses sub-curatives d'antimalariques de synthèse permettrait-elle de trouver poUl
l'instant un juste équilibre entre la nécessité de protéger l' hOte contre les
effets nocifs le plus souvent mortels de 1 'hématozoaire et celle de lui permet-
te
d'acquérir un certain degré d'immunité.
b)
Développement synchrone et séquestration vasculaire en périphérie
Nous avons tenté d'apprécier le phénomène de la division synchrone et
de la séquestration vasculaire qui ont fait l'objet de nombreux travaux au cours
de ces dernières années. Notre principe d'étude s'est basé essentiellement sur
la technique des empreintes d'organe, des frottis et des coupee histologiques,
.;
'.
pour évaluer l'importance de la séquestration vasculaire en périphérie au cours
de llinfection à Plasmodium berghei. Nos observations suggèrent que cette séques-
tration vasculaire au niveau des capillaires périphériques est plus intense chez
la souris splénectomisée. Ce phénomène revêt une importance particulière au ni-
veau des capillaires hépatiques. (Photo II). Sur toutes nos lames, on constate
que cette séquestration au niveau des vaisseaux sanguins intéresse principalement
des schizontes mOrs. Ainsi la splénectomie favoriserait le d6veloppement et la
division synchrone du parasite en périphérie, et dans une certaine mesure sa
~6questration vasculaire.

---

-
-----------------------
•
l,
,...,~ 1:.",
~
~J, •• ~~.'....~
.,
o
t
.
Photo
II
Souris splénectomisée J
13 172
Autopsie - Poids
21 g
Foie:
1 ,3386 - 6 %
Empreintes du Foie
Commentaire l
On dis~ingue bien les schizontes mOrs au niveau des capillaires hépati-
ques. Ce sont des FOrmations de grande taille, régulière•• Les corps en
rosace présentent des petits blocs chromatiniens qui se dégagent nette-
ment.
, ,

---

_.r.*.'ft.t.......
_
31-
En fait, ce phénomène de la capture et de la libération des formes
tardives du, Plasmodium berghei est sous le contrOle de plusieurs facteurs.
1-
Rythme photopériodique
Le r81e de l'hOte dans l'influence ou la prédisposition au développe-
ment et au synchronisme de division du parasite, lorsqu'il y a modification due
au milieu, a été noté par de nombreux observateurs. Jhon D. ARNOLD, Franck !.ALLI,
Daniel C. MARTIN (4) en , 969 se sont efforcés de déterminer les divers par~­
tres qui influencent le développement et la diviàion synchrone du Plasmodium
berghei. Ce sont essentiellement : les modifications du rythme lumineux, l'inten-
sité de la lumière et la qualité de celle-ci.
Ils remarquèrent d'abord que le synchronisme de développement n'est
pas évidant chez des animaux, soit soumis à une lumière artificielle continue,
soit maintenus en permanence dans l'obscurité. Ils observèrent pour la première
fois une augmentation du développement et du synchronisme de division dans l'in-
fection à Plasmodium berghei lorsque les animaux furent logés avec une exposition
au soleil d'été. Les résultats suggèrent qu'il est possible d'accroitre le déve-
loppement et la division synchrone par
le modèle de lumière type
nétalarc
d'intensité de 300 bougies avec 20 heures d'exposition. Il semble que les para-
si tes murissent en synchronie de 24 heures et segmentent largement
entre rninui t
et A heures du matin. Enfin il appara!t que dans certaines conditions les schi-
zontes mOrs sont libres dans le sang périphérique. Avec 22 heures de lumière à
300 bougies le schizonte mQr est séquestré par l'endothélium vasculaire et ne se
rencontre pas dans le sang périphérique. Cette séquestration vasculaire est un
problème important, non seulement parce qu'elle affecte notre étude des popula-
tions des parasites, mais aussi parce qu'elle représente un des processus patholo-
giques maj eurs dans les infections avec le Plasmodium .falciparum (GARNHAM 1 966).
Quant à l'intensité de la lumière, elle est
une variable d'une certaine impor-
tance 1 seul les animaux exposés à des intensités lumineuses de 300 à 600 Ft-e.
montraient avec évidence un type d'augmentation de développement synchrone des
infections au Plasmodium berghei. Avec des intensités plus faibles, il se produit

---

r:
,
une augmentation du pourcentage des réticulocytes.
En conclusion il apparaît que l'intensité de la lumière aussi bien
que sa durée sont des facteurs importants pour l'augmentation du synchronisme
de division. Et à de fortes intensités de lumière la séquestration vasculaire
•
des schizontes mftrs est prononcée. On a pu donc observer jusqu'ici deux effets
du rythme photopériodique. Le premier est la régulation du développement et du
synchronisme de division; le second paraH être la tendance des parasites seg-
mentant à séquestrer ou à être séquestrés à certains endroits du système vas~
laire. L'infection des souris par le Plasmodium berghei est un exemple de s~
chronisme particulièrement intéressant, car le cycle de génération du parasite
est de 24 heures. On pense que la capture et la libération des parasites vivants
par l'endothélium vasculaire pourraient demander un mécanisme différent de celui
de la phagocytose ; car les parasites ne sont pas détruits. Ce processus de sé-
questration a été appelé "margination" par certains auteurs parce que les schi-
zontes paraissent collés aux parois des capillaires.
2-
R6le de la gl~nde pinéale
Le r6le de la glande pinéale comme agent médiateur du contrOle photo-
périodique du développement et du synchronisme de division, et comme médiateur
de la séquestration capillaire du Plasmodium berghei, a été démontré par les
mêmes auteurs : John D. ARNOLD, Arthur BERGER, Daniel C. MARTIN et Harry
STRUHAN (5). Cet organe avait été .impliqué dans les effets avec la lumière dans
un certain nombre d'autres systèmes. On avait noté précédemment un effet sur
le testicule et l'ovaire (REISS et AL 1963 ; HOFF~N et REITER 1965 ), sur
~'oestrus (CHU. AL 1964), et à un certain degré sur le contr6le ~l'eau ct des
électrolytes ( TAYLOR et FARREL 1973 ; WURTMAN et ALGER 1960). D'après 11 étude
précédente, on peut avec un rythme lumineux de cjoix provoquer une augmentation
de développement et de division synchrone du parasite chez l'animal intact.

---

_.".m."till1i"....
_
39-
Cet effet Fut aboli par la suppression de la pinéale à la souris. Les donn~es
suggèrent un r8le spécifique de la pinéale ou des parties adjacentes du diencé-
phale. Les animaux chez lesquels la pinéale était intacte avaient produit une
forte quantité de formes segmentantes dans le sang périphérique. Mais la plupart
des tissus ne présentaient pas de schizontes mOrs marginés. Chez les souris op~
•
rées de la pinéale, on constatait que les Gchizontes mOrs étaient fortement sé-
questrés en périphérie. Cette séquestration était marquée dans la rate et le
foie, moins marquée dans le poumon et la moelle osseuse. Les autres tissus accu-
saient peu d'éléments séquestrés.
Comment peut-on interpréter ces résultats ? Deux voies générales se
dégagent : la première cOBSidère le globule rouge parasité comme un indicateur
sensitif d'une étape fonctionnelle chez l'h8te ; la seconde suppose que la sé-
questration est affectée par certains agents de la pinéale qui agissent sur le
schizonte mOr à l'intérieur du globule rouge. Quand la pinéale est présente, et
l'animal influencé par un rythme photopériodique spécifique, la capacité de
l'endothélium pour retenir les schizontes mOrs diminue.
3-
Agents chimiques efficaces comme intermédiaires
Les m@mes auteurs, c'est à dire, JOHN D. ARNOLD, Arthur E. BERGER,
Daniel C. ~mRTIN et Harry STR~N (6) étudièrent la nature de la pinéale comme
conducteur chimique ; et explorèrent le r8le de plusieurs :agents chimiques
connus et isolés d'elle. Passons successivement en revue les résultats obtenus
par ces observateurs avec haque groupe d'agents chimiques.
Mélatonine et sérotonine
La mélatonine et la sérotonine furent administrées à des animaux ayant
subi l'ablation de la pinéale et soumis à un rythme photopériodique entrainant le
synchronisme. Les études ont montré que ces deux agents ne sont pas capables
d'agir en tant que médiateurs chimiques sur le développement et le synchronisme
de division. De m@me ils n'ont aucun effet sur la. libération vasculaire des schi-
sontes mars.

---

2 SUt :rtrY's
Effets de l'ubiquinone
--------------------------
Les études ont mis en relief un effet prononcé de l'ubiquinone sur le
développement et le synchronisme de division. On a pu montrer cela avec des doses
d'ubiquinone aussi faibles que 5 \\-lg par jour. Avec une dose de 25 ~g par jour i l
y a une complète restauration du synchronisme, qui semble m@me supérieur à celui
qui se produit chez l'animal ayant une pinéale normale. Avec des doses plus for-
tes d'ubiquinone (250 ~g) l'effet synchronisant disparait. Les données montrent
que l'ubiquinone produit un rythme de développement synchrone augmenté, mais
qu'elle n'exerce pas un effet
complet sur la libération des parasites. On a en-
trepris un second groupe d'expériences avec des animaux maintenus dans l'obscurité,
l'ubiquinone à la dose de 25 ~g n'était plus capable d'augmenter le développement
et le synchronisme de division. Le rOle physiologique de cette hormone est rela-
tivement obscur. On pense qu'au niveau des mitochondries elle agirait sur le trans-
port d'électrons et participerait à la phophorylation oxydative.
Vitamine l et vitamine E
La vitamine K est équivalente de l'ubiquinone ; elle facilite le déve-
loppement et le synchronisme de division. Par exemple 12 ~g de vitamine In' avaient
pas d'effet, par contre 1200 ~g de vitamine K semblaient restaurer complètement
le synchronisme. La vitamine E ne semble pas avoir une capacité aussi facilement
démontrable à remplacer la pinéale comme le font l'ubiquinone et la vitamine l.
Elle doit avoir un effet limité ; certains animaux synchronisant et d'autres pas,
pourtant soumis à des doses relativement élevées (300 ~g) de Vitamine E. Ni la vi-
tamine E ni la vitamine [ ne sont capables de permettre la libération totale des
~:: schizontes mOrs dans la circulation.
't.
;1
•
,"
Dans cette étude l'efficacité de l'agent est mesurée par l'effet sur
le développement et le synchronisme de division du Plasmodium berghei. Les r~
plaçants chimiques les plus efficaces sont l'ubiquinone et la vitamine l. Les
données présentes ne prouvent pas que l'action de la pinéale de l'animal intact
est directement entra1né par ces deux agents. Néanmoins l'action d~ l'ubiquinone

---

7i:%"tt' !
•
41-
est équivalente dans ses effets
sur le développement et le synchronisme de divi-
sion à celle de la pinéale. Avec cette hormone la question de l'inter-relation
entre le phénomène de séquestration et celui de synchronisme surgit à nouveau.
L'accent est mis sur le fait que l'ubiquinone ne remplace pas toutes les fonctions
de la pinéale, puisque la séquestration ne retourne pas à la normale chez l'ani-
mal privé de pinéale, et traité avec des doses suffisantes à restaurer le déver
loppement et le synchronisme de division. En conclusion l'ubiquinone, la vitamine
l, et à un degré limité la vitamine E sont des agents permettant le développemant
et le synchronisme de division.
c-
La diminution des globules rouges et les modifications globulaires
C"st le problème de l'anémie, constance que l'on retrouve dans toutes
les affections palustres. Déjà signalée par J.H. VlNCIE et M. LlPS, elle a été
étudiée par H. GAILLARD et J. Li\\PIERRE (2R); Pour ces auteurs le nombre des hé-
3
6
6•
maties par nun
(normalement de 9 x 10
) peut descendre à 2 et m@me 1 x 10
Parallèlement le nombre des hématies polychromatophiles augmentent régulièrement.
Elles s'hypertrophient, qu'elles soient parasitées ou non. L'anisocytose est
marquée. Les érythroblastes, contrairement à ce qui se passe chez le rat, n'appa-
raissent que tardivement ; ils peuvent ~tre parasités et m~e polyparasités.
A. BALDl (A) a repris cette étude ; et par la méthode des colorations vitales, il
a mis en évidence l'augmentation du nombre des réticulocytes, qui peut passer de
10 à 50 %. Cet auteur insiste sur le fait que les ~ématozoaires parasitent de
préférence les hématies inunatures, les réticulocytes et les hématies basophiles
ou polychromatophiles. Cette prédilection expliquerait pour cet auteur l'évolu-
tion de la maladie chez la souris; l'anémie entrainerait une hématopo!èse accé-
lérée,à l'origine des formes immatures qui favorisent à leur tour l'infection,
donc l'anémie. Au cours de nos travaux nous avens pu, par simple coloration au
May Grunwald GlEMSA, constater l'apparition des réticulocytes, caractérisés par
de fines granulations brunes, irrégulières qui, lorsque le réticulocyte est para-
sité,peuvent en imposer pour des granulations spécifiques, du type granulations
de SCHUFFNER. De plus A. BALDl confirme les chiffres donnés par H. GAILLARD et
J. LAPIERRE, relatifs au degré d'anémie, en les complétant par la mesure de la

---

·2S. ,.
42-
valeur globulaire qui passe de 1,5 cl 2 et m@me 3. Il s'agit donc d'une anémie
hyperchrome, avec macrocytose, polychromatophilie, réticulocytose, et enfin
érythroblastose.
Donnons ici quelques chiffres d'anémie que nous avons retrouvés 1
Souris nO 12540
- splénectomiséc le 1 - 02 - 73
- inoculation le 9 - 02 - 73
6
3
- numération avant inoculation: 5,2 x 10
/ mm
- numération le 15 - 02 - 73 , 24 h avant la mort 1
6
3
1,2 x 10
/
mm
- autopsie le 16 - 02 - 73
,.
~
Souris nO 13 009
- non splénectomisée
- inoculation le 22 - 02 - 73
6 /
3
numération avant
inoculation: 5,4 x 10
mm
6
3
- numération le 28 - 02 - 73:
1,08 x 10
/ mm
(quelques heures avant l'autopsie)
Souris nO 13 01 6
- inoculation le
26 - 02 - 73
6
3
- numération avant inoculation
4,9 x 10
/ mm
splénectomie le 28 - 02 - 73
6
3
- numération le 2 - 03 - 73 : 0,5 x 10
/ mm
(quelques heures avant l'autopsie).

---

43-
Ces données montrent que l'évo~ution de l'anémie chez la souris normale
est identique à celle de la souris splénectomisée A jours avant l'infection au
Plasmodium'berghei. Par contre les souris splénectomisées en cours d'infection,
c'est à dire 72 heures après l'inoculation, accusent au terme de leur évolution
une anémie plus marquée que les autres.
Nous avons retrouvé aprês chaque splé-•
nectomie chez la souris non infectée une légère anémie passagère, conséquence
directe de l'intervention. Cet élément peut être mis en cause dans l'anémie de
la souris splénectomisée 3 jours après l'inoculation. Pour tous les animaux, le
prélèvement de sang à la queue était difficile à la fin de l'évolution; le sang
devenait très coagulable. Et l'animal présente très souvent peu avant la mort
un état de choc.
Quel est l'intérêt que suscite à l'heure actuelle la pathogénie de
l'anémie dans les affections palustres? Certes on incrimine toujours un facteur
mécanique pour expliquer la destruction des globules rouges par les
parasites
mais le phénomène de l'anémie est en fait plus complexe. Tout d'abord on peut
retenir un processus d'auto-immunisation. Les globules rouges parasités devien-
draient des auto-antigènes, ce qui entrainerait une lyse auto-immune. A la mort
du globule rouge infecté, celui-ci transfère son message antigénique à une autre
cellule saine; et cette dernière serait lysée par les anticorps antiparasitaires.
Parfois peuvent se fixer sur le globule rouge non parasité des complexes anti-
gène - anticorps qui provoqueraient la lyse de celui-ci.
Quant au système réticulo-endothélial il a le pouvoir de capter les
globules rouges malades ou non j et ceux-ci vont être lysés. Cela concerne essen-
tiellement lB rate, le foie et la moelle osseuse.
En outre on peut évoquer pour expliquer l'anémie l'envahissement médul-
laire par les parasites. Nous avons pu constater que dans le myélogramme, chez
la souris en fin d'évolution, la série érythroblastique est très basophile, avec
prépondérance de grands éléments rappelant le mégaloblaste, mais dont la chroma-
tine en damier et non en dentelle fait penser à des pro-érythroblastes patholo-
giques. Ces éléments peuvent passer dans la circulation peu avant la mort.
Les
hématozoaires sont trés nombreux dans la moelle osseuse
et le bloc chromati-
nien des corps en rosace est souvent plus visible que sur les lames de sang cor-
respondantes. Nous n'avons pas pu mettre en évidençe des cellules réticulaires
de la moelle contenant dans leur protoplasme des hématozoaires.

---

Enfin Robert HERMAN (49) en 1969 démontre une fragilité osmotique des
érythrocytes sous l'influence du Plasmodium lophurae. La question de savoir si
la fragil1 té osmotique des érythrocytes est altérée dans les affections
mala-
riales a fait l'objet de nombreuses études. Toutes confirment que la fragilité
osmotique est accrue. Dans ces travaux l'auteur montre que la fragilité osmoti-
que des érythrocytes du canard normal est augmentée de façon significative ap~:
exposition
in vitro à des extraits de cellules libres de Plasmodium lophurae,
ou à des globules rouges de canard infectés par ce même parasite. L'extension d4
l'effet pouvait ~tre mis en corrélation avec la période de développement du pa-
rasite ; cet effet était plus grand quand la plupart des parasites avaient des
formes segmentantes tardives, et moindre lorsqu'ils étaient en grande partie
des jeunes trophozottes. Ces données suggèrent que les facteurs responsables de
l'augmentation de la fragilité osmotique induite résident principalement à l'i&
térieur du parasite. On ne peut que spéculer actuellement sur la nature de cet
extrait. Il peut s'agir d'un matériel soluble (SHERMAN -54, ROGERS et AL. 1966)1
ou d'acides gras et de lipides (WALLACE -70).
Ainsi peut-on retenir plusieurs explications pour justifier l'impor-
tance de la gravi té de l'anémie rencontrée dans les infections au Plasmodium
berghei chez la souris. Tous ces facteurs contribuent en m@me temps à engendrer
cette forte anémie. Il peut s'agir donc :
soit d'un facteur purement mécanique de la destruction des globules
rouges par les parasites.
soit d'un processus auto-immunitaire, responsable de la lyse des
cellules rouges,
soit de la capture des globules rouges malades ou non par le système
réticula-endothélial, où ils sont lysés,
soit de l'augmentation de la fragilité osmotique des globules rouges
en présence d'extraits probablement d'origine parasitaire qui conduisent à une
hémolyse des érythrocytes,
soit enfin d'un envahissement médullaire important par les hématozo-
aires, freinant ainsi dans une certaine mesure l'hématopot.se.

---

45-
d-
la leucoçytose
'Evoluant parallèlement à l'anémie, elle a été étudiée par H. GAILLARD
et J. tt.PIERRE (2R). Elle débute souvent avant la fin de la période de latence
hématologique, argument de plus à la multiplication simple de l'hématozoaire
dans le sang pendant cette période. Elle passe de 10 000 globules blancs par
3
nun
normalement à 120 000. De plus on observe des modifications de la formule
leucocytaire qui se compose normalement de la façon suivante 1
Granulocytes neutrophiles 20 %
Mononucléaires RO %
dont 70 % de lymphocytes et 10 % de monocytes.
Chez la souris splénectomisée, non infectée, la formule varie peu ,
il Y a plutOt tendance à l'abaissement des granulocytes neutrophiles 1
20 % avant l'opération
10 % 7 jours après.
Au cours de l'infection le nombre de granulocytes augmente aux dépens
de celui des lymphocytes, tandis que le
taux de monocytes reste conStant.
L'éosinophilie est très variable pouvant passer de 1 % à 5 % et même 10 %. Cette
polynucl(~se s'accompagne au niveau de la moelle d'une prolifération de cellules
jeunes de type myélo!.de.
Nous devons insister sur la présence en fin d'évolution des leucocytes
mélanifèrcs, déjà signalés par I.H. VINCKE et M. LIFS. Ce sont des monocytes
bourrés de granulations de pigment noir, arrondies, volumineuses. Exceptionnel-
lement, et quand l'évolution a été particulièrement prolongée, on rencontre
quelques polynucléaires neutrophiles chargés de pigment spécifique.
Ainsi les modifications de la formule leucocytaire évoluent parallè-
lement au degré de parasitisme des hématies dans le sang périphérique.

---

46-
IV-
ANATOMIE - Pi\\THOLOGIQUE
•
C. LEVADITI et A. WAISMI\\N (42) ont étudié les lésions anatomo-patholo-
giques créées chez la souris par le Plasmodium berghei. L'attention de ces au-
teurs a été attirée par deux ordres de lésions hépatiques, la "Mélanose" et la
"Lipidose". Les autres altérations tissulaires sont faites "de foyers rnonocy-
taires au niveau du foie, de taches de nécroses dans le m@me organe, de zones
congestives et nécrotiques de la rate, coexistant avec une intégrité absolue du
poumon et du rein. A cela s'ajoute selon les cas, la présence de schizontes dans
les capillaires et les gros vaisseaux hépatiques, schizontes pourvus de granula-
tions pigmentaires.
1-
Mélanose
" Une teneur pous ou moins considérable de la rate et
surtout du foie
en dépots pigmentaires accompagne fréquemment l'évolution de la para-
sitose sanguine. Souvent de tels dép8ts confèrent aux tissus h"~tiques
une coloration grisatre (allant du gris clair au gris foncé). Cet as-
pect se traduit macroscopiquement par la présence de granulations méla-
niques, soit dans les macrophages sanguins, soit dans les cellules de
KUPFFER, soit enfin au sein des hépatocytes. Ces dép8ts deviennent
confluents à une période tardive du processus, ce qui provoque une con-
densation de taches noiratres, surtout au voisinage immédiat des vais-
seaux sanguins ".

---

47-
Quelle est l'incidence de cette mélanose hépatique?
Cette étude fut réalisée par LEVADITI et WAISMfiN (coloration à l'héma-
t6ine - éosine). Sur 7 souris contaminées par injection intra-périto-
néale du Plasmodium berghei, 2 d'entre elles moururent le 6 ème jour
et le 20 ème jour. Parmi les 5 autres sacrifiées le 10 ème jour, 4
souris offraient une parasitose sanguine d'intensité variable. La
pigmentation h6patique est apparue chez 4 animaux. Celle-ci atteignait
une intensité extrême dans 2 cas, alors qu'elle apparaissait légère
chez 2 autres souris sacrifiées le 10 ème jour.
Ces constations prouvent que l'accumulation du pigment varie d'un cas
à l'autre, tout en étant plus accusée chez la souris dont la circula-
tion sanguine est particulièrement riche en schizontes. On remarque
sue la présence des ces schizontes sanguins, n'implique pas forcément
une pigmentation positive. En général, on peut affirmer que la pigmen-
tation hépatique est en rapport direct avec l'intensité de la contami-
nation sanguine et la durée de l'évolution de l'infection.
l,
Par ailleurs, il semble incontestable que le pigment provient des
hématies parasitées, lesquelles sont phagocytées soit par les gros
monocytes sanguins soit par les cellules de IUPFFER, et paraissent
réussir à pénétrer même dans le cytoplasme des él6ments nobles du foie.
2-
Lipidose
Dans la généralité des cas, les mêmes éléments nobles subissent une
dégénérescence lipidique dont le degré est proportionnel à celui de
l'infection parasitaire. Une simple vacuolisation du cytoplasme marque
le début de cette lipidose, laquelle s'intensifie ultérieurement; cha-
que vacuole se comble de graisse que des méthodes adéquates (rouge
écarlate et soudan III) mettent en évidence. Il arrive souvent que les
gouttelettes lipidiques aient les dimensions d'une hématie et qu'ell~s
renferment un ou plusieurs corpuscules pigmentaires.

---

----------_._---------------------
Nous avons étudié les lésions anatomo-pathologiques des principaux
organes d'un certain nombre d'animaux parasités au Plasmodium berghei •
.Nous décrirons essentiellement les lésions observées en fin d'évolution
mortelle chez la souris.
•
A-
Anatomie - macroscopique
Il existe dans toUS les types d'(volution, tant chez la souris que chez
le rat, une hépatosplénomégalic importante. Le pigment colore tous les organes en
gris, en particulier le foie et la rate. Pour apprL~ier l'hépatomégalie nous te-
nons compte, non du chiffre donné à la pesée de ces organes, mais du rapport de
ce
chiffre au poids du corps. Le tableau nO VI permet d'apprL~ier l'importance
de cette hépatosplénomégalie chez la souris normale. Nous présentons des chiffres
relevés sur certains animaux au cours de notre expérimentation.
Les
données macroscopiques au cours des autopsies ont suggéré que les
souris splénectomisées, présentent une hépatom~galie plus importante que les sou-
ris normales. Pour cela on peut se référer au tableau nO VI.
Prenons les exemples sudvant s relevés chez les souris qui ont eu la
Meme durée d'évolution de l'infectionJ
1 er cas
souris normales
- Souris nO 12 975
Poids = 20 g - Foie
1,2620 9
- 6,3 %
- Souris nO 12 974
Poids = 21 9 - Foie
1 , '360 9 - 1, a %
- Souris nO 12 979
- Poids = 30 9 - Foie
1,6846 9
5,6 %

---

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: Souris infectées
: Poids de la
: Poids Foie
: Poids Rate ·
:
Pourcentage
·
·
normalement
: Souris morte
·
·
:
: .
·
·
·
·
·
·
: Foie
1
Rate:
:
·:
·
·
·
:
·
•
·
·
·
.
·
·
·
·
·
·
:
:
·
·
·
·
·
N°
12 975
P II: 25 9
:
20 9
· 1,2620 9 · 0,149 9 : 6,3 % : 0,7 % :
·
·
·
·
·
:
·
·
· N° 12 974
p ... 25 9
·
21 9
· 1,5260 9 : 0,2029 9 : 7,2 % : 0,9 % :
·
·
·
e.
·
·
·
·
·
·
:
·
·
s . N°
12 979
p ... 34 9
·
30 9
· 1,6846 9 · 0,2368 9 : 5,6 % : 0,7 % :
·
·
·
·
·
•
:
:
·
·
•
N°
13 009
P :0 22 9
·
17 9
· 1,3758 9 · 0,1 21 0 9 : 6,9 % : 0,7 % :
·
·
·
·
·
·
:
:
:
·
·
N°
2 000
P cr 31 9
:
25 9
:
2,0597 9
:
0,3213 9 : 8,2 % :
3 % :
·
·
·
·
·
·
:
·
·
N°
13 225
P:o 28 9
·
26 9
· 1,7450 9 : 0,1550 9 : 6,7 % : 0,5 % :
·
·
·
·
·
·
·
:
·
·
· N° 13 220
p • 28 •
:
27 9
· 1,5055 9 . : 0,1950 9 : 5,5 % : 0,7 % :
·
·
·
·
·
·
·
:
·
·
·
·
·
·
·
· N° 13 221
P - 30 i
·
25 9
· 1,7183 9 · 0,2120 9 : 6,8 % : 0,8 % :
·
·
·
·
·
:
·
·
·
.
·
·
·
·
·
.
·
:
·
:
·
·
1
·
·
·
·
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..
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.
1
1
1
1
1
1
.
: Souris infect~es
1 Poids de la
: Poids Foie
..
1
Pourcentage
..
..
..
:
splénectomisées
..
1 Souris morte
•
..
1
1
..
•
..
•
•
•
..
1
Foie 1
•
•
•
..
..
..
•
1
1
1
1
1
•
..
..
:
1
:
1
1
1
:
N°
13 161
P "" 21 9
..
1
17 9
:
1,1424 9
1
1
6 % 1
..
..
..
..
..
1
1
1
•
..
·
N°
13 172
P = 26 9
:
21 9
.. 1 ,3386
..
1
6 %
..
..
..
..
..
:
..
..
..
..
..
1
..
:
....
N°
13 173
..
P '" 30 9
..
25 9
..
.. 1 ,8174
1
1
7 %
:
:
•
..
..
..
i
1
•
..
..
..
1
N°
12 969
P '" 25 9
1
20 9
:
1,3962
1
1
6 %
..
..
1
..
1
1
:
..
..
1
..
•
..
N°
12 980
..
..
P '" 32 9
:
27 9
..
1,6CflOg
..
1
5 %
·
•
..
..
1
..
:
..
..
..
..
1
:
N°
13 022
P = 25 9
1
20 9
:
1,8680 9
..
1
9 %
..
:
..
..
..
..
1
1
..
•
..
1
..
..
..
N°
13 021
P .. 32 9
1
27 9
•
•
2,3059 9
....
•
•
6 %
....
:
..
..
..
..
1
..
N°
13 071
P '" 26 9
:
21 9
.. 1,93045 9
..
..
..
1
1
9 % 1
..
..
..
1
1
1
..
•
..
1
..
:
N°
13 042
P .. 32 9
:
25 9
1
2,4970 9
•
1
•
9 %
•
•
1
•
•
..
•
•
N~
13 043
P • 31 9
1
30 9
.. 2,2324 9
1
1
7 % 1
1
•
..
..
1
1
1
:
1
1
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•
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---

2 ème cas
souris splénectomisées 8 jours avant l'infection
- Souris nO 13 022
- Poids : 20 g
Foie
1 ,A6AO g - 9 %
•
- Souris nO 13 043
- Poids : 30 g
Foie
2,2324 g
- 7 %
- Souris nO 13 071
Poids : 21 g
- Foie
1,93045 g
- 9 %
Nous constatons donc que pour des animaux accusant des poids équiva-
lents à l'autopsie, l'augmentation du foie est supérieure chez ceux splénecto-
misés avant l'infection. Normalement, au cours des infections malariales, il y
a hyperplasie du système réticulo-endothélial ; Ceci concerne essentiellement le
foie et la rate. En cas de splénomégalie, on pense que la capture des parasites,
des globules rouges parasités, et des grains de pigment s'accentuent au niveau
du foie. Finalement, trop sollicité, le foie se fibrose, et les cellules sont
remplacées par des fibroblastes. Dans nos travaux, nous n'avons pas cherché à
apprécier cette fibrose. Ceci nécessitait soit des colorations au trichome de
Masson pour révéler le collagène, soit des colorations spécifiques pour mettre
en évideœe la réticuline (WILDERo ) avec les fibres prC--eollagènes qui apparais-
sent précocement.
Nous avons essayé également d'évaluer l'augmentation de la rate d'une
manière quantitative. Sur le tableau nO VII nous avons relevé les différe:lts poids
des rates, prises au cours des splénectomies réalis~es avant l'infection. Compa-
rons ces données à celles enregistrées sur le tableau nO V et dégageons quatre
exemples de chaque cas.
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---

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M
52-
1-
Poids des rates opérées avant l'infection
- Souris nO 13 277
- Poids : 21 9 - rate
0,0506 9 - 0,2 %
•
- Souris nO 13 202
- Poids : 21 9 - r~te
0,0542 9 - 0,2 %
- Souris nO 13 022
Poids : 25 9 - rate
0,1460 9 - 0,5 %
- Souris nO 13 071
- Poids : 26 9 - rate
0,1035 9 - 0,3 %
2-
Poids des rates prélevées à l'autopsie
- Souris
nO 12 974
- Poids : 21 9 - rate
0,2029 9 - 0,9 %
- Souris nO 12 97~
- Poids: 20 g - rate
0,149 9 - 0,7 %
- Souris nO 2 OOJ
- Poids : 25 9 - rate
0,3213 9 - 1 %
- Souris nO 13 225
- Poids: 26 9 - r~te : 0,1550 9 - 0,5 %
Pour des animaux de poids équivalents, les chiffres confirment bien
la splénomégalie. Dans les cas significatifs, cette hyperplasie de la rate peut
aboutir à multiplier le volume initial de l'organe par quatre.

---

Tableau
N-
VIII
.~
-
1
:
·
1
•
Souris non infectées splénectomisées
1
Poids des Rates
:
Pourcentage
1
1
·
:
1
1
·1
1
1
1
'N° 13 022
P.25 9
:
P .,. 0,1460
:
0,5 %
1
•
1
1
1
·1
N°
13 023
P .. 23 9
•
P .. 0,1892
1
0,7 %
1
•:
1
1
·•
N°
13 021
p .. 32 9
· P .. 0,1400
1
·
·
0,4 %
1
:
·:
·
N°
13 Cfl1
P .,. 26 9
· P = 0,1035
·
0,3 %
·
·
·
·
·
:
·
·
N°
13 041
P .,. 31 9
1
P .,. 0,1574
:
0,1 %
•·
·
·
N°
13 042
p . 32 9
· P .,. 0,3225
•
·
0,3
•
%
1
·
1
:
·
N°
13 201
P .. 23 9
· P .,. 0,0794
·
0,3 %
1
·•
·1
•
·
•
N°
13 202
P .. 23 9
:
P .,. 0,0542
1
0,2 %
·
:
•
:
:
N-
13 278
p . 24 9
:
P • 0,0650
1
0,2 %
1
:
1
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VI
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---

Dans la littérature, les divers observateurs ont noté des splanoméga-
lies plus importantes qui pouvaient atteindre jusqu'à 10 % du poids du corps de
la souris. Nous n'avons pas pu r-encnntr-er un exemple de ce genre.
Nous pensons
que l'évolution rapide de l'infection au Plasmodium berghei chez nos souris, avec
une durée s'l."Chelonnant entre 6 et 10 jours, ne pouvait pas permettre un dévelop-•
pement plus marqué de la rate. Dans notre laboratoire, nous travaillons également
sur la leucémie, transplantée au même type de souris ; et les sp16nomégalies dans
cette affection ne sont pas du tout comparable à celles observées dans l'infection
au Plasmodium berghei. On peut suggérer que l'augmentation de la rate chez la
souris infectée au Plasmodium berghei reste modérée.
Dans le tableau suivant, nous avons relevé le poids des rates chez des
souris sp16nectomisées en cours d'infection. (Voir tableau nO IX). La plupart
des splônectomies ont été réalisées 72 heures après l'infection de la souris au
Plasmodium berghei. La rate prélevée à ce stade d'évolution de la maladie pré-
sentait déjà l'envahissement caractéristique à type de mélanose, et elle avait
augmenté de volume. Les résultats ont montr6 que l'intensité de la mélanose, et
l'importance de la
prise de volume étaient fonction de la quantité de parasites
inocul~s au départ. Certes, nous avons pratiqué des dilutions différentes, comme
nous l'avons expliqué plus haut. Notre idée de départ était de mettre en (~idence
une différence dans l' évo Iut.Lon de la parasitémie chez chaque type de souris au
niveau du sang périphérique. Ceci n'a pu se vérifier? C'est plut6t au cours des
examens macroscopiques des rates opérées 72 heures après l'infection que nous
avons remarqué ces particularités. Il semble donc que l'intensité de la mélanose
et l'augmentation de la rate sont influencées par la quantité de parasites injec-
tés par voie intra-péritonéale.
Citons deux exemples 1
Premier cas
nombre de parasites inoculés
6
0,2 x 10
dans 0,1 ml.
(24 heures) - Souris nO 13 223
- poids : 34 9 - rate
0,0870 9 - 0,2 %
(72 heures)
Souris nO 13 224
- poids : 34 9 - rate
0,095R g - 0,23 %

---

Tableau N°
IX
..
·..
·
·
.1
·
..
· Souris infectées splênectomisées
1
Poids des Rates:
Pourcentage
1
··
·
1;',
;
1
·
1
·
·
1
1
·
N°
13 008
P ... 23 g
·: 0,1609 (72 H) :
0,6 %
1
·
·
:
1
·
·
N°
13 095
P = 30 g
: 0,0918
(24 H) 2
0,3 %
1
:
:
·
1
·
N°
13 096
P = 28 g
: 0,1174
(72 H) :
0,4 %
1
·
·
1
a
·
·
N°
2 000
P = 31 g
: 0,1155
(72 H) :
0,3 %
1
:
·
1
·
·
N°
13 203
P ... 31 g
1
0,0946
(48 H) :
0,3 %
a
·
·
·
•
·
·
•
:
N°
13 204
P ... 29 g
: 0,1046
(72 H) :
0,3 %
1
a
N°
13 230
P = 28 g
: 0,1630
(72 H) :
0,5 %
:
1
·
1
1
1
·
N°
13 223
P = 34 g
1
0,0870
(24 H) :
0,2 %
a
·
1
1
a
·
·
N°
13 224
P = 34 g
: 0,09958 (72 H) :
0,2 %
1
··
·
·
1
·
·
1
:
·
·
a
·

---

_......--------~._-------_.~~------------------
56-
Deuxième cas
nombre de parasites inoculés t
6
16 x 10
dans
0,1 ml
(72 heures)
- Souris nO 13 008
- poids : 23 9 - rate
0,1609 9 - 0,6 %
•
Dans le premier cas, les deux souris ont le même poids et ont reçu la
6
m@me quantité de parasites ( 0,2 x 10
) inoculés par voie intra-péritonéale. La
première souris a été splénectomisée 24 heures après le début de l'infection,
la deuxième 72 h après. En 48 heures d'intervalle il y a eu augmentation de la
rate, celle-ci est restée modérée. Macroscopiquement ces deux rates accusaient
une pigmentation modérée avec un aspect gris clair.
Dans le deuxième cas la souris a reçu une forte quantité de parasites,
6
de l'ordre de 16 x 10
dans 0,1 ml. J\\u bout de 72 heures nous avons réalisé la
splénectomie. L'augmentation de volume de la rate était nette. Et macroscopi-
quement elle présentait déjà une pigmentation complète et intense.
B-
Anatomie - microscopique
Les lésions que nous allons décrire sont pratiquement "superposables"
d'un animal à l'autre. Pour réaliser cette étude, nous avons combiné deux tech-
niques t les empreintes d'organes et les coupes histologiques qui se complètent.
La première permet de prL~iser à quel stade d'évolution se rencontrent les héma-
tozoaires au niveau de l'organe ; la deuxième permet d'identifier le type de
lésion occasionnée par l'hématozoaire au sein
de l'organe. Nous avons choisi
pour notre exposé l'exemple présent :
Souris nO 12 974
- non splénectomisée, évolution mortelle
- infection le 13 - 02 - 73; poids 1 25 9
- autopsie le 20 - 02 - 73;
poids t 21 9
- foie
1,5260 9 - 7,2 %
- rate
0,2029 9 - 0,9 %
- fixation au bouin.

---

_........._--- _._-------_._------------,.
-
---- ...
*
57-
-
Foie
L'architecture normale du foie n'est pas mise en évidence sur notre
coupe. A première vue, on est frappé par la prolifération importante d'histio-
cytes macrop~ages contenant des grains de pigment brun, parfois localisés par
plages. Les dépOts de pigment sont très abondants dans les cellules de IUPFFER et
hors de celles-ci. A la périphérie, les cellules hépatiques sont très souvent
dégénérées, à protoplasme acidophile et à noyau pâle. Mais il n'existe pas de
zOnes centro-lobulaires da dégénérescence aigue des cellules hépatiques. On peut
supposer que la durée d'évolution rapide de l'infection chez cet animal n'a pas
permis l'instauration d'un tel processus de dégénérescence. (voir photo III).
Le pigment brun se présente sous deux aspects, soit de petite
granules
foncés, arrondis, disséminés à la périphérie des cellules, soit en amas opaques,
mOriformes, massifs, extra-cellulaires. Il existe par ailleurs un pigment ocre
encore plus répandu, en amas translucides, irréguliers, intra et extra cellulai-
res, s'insinuant beaucoup plus loin dans les mêmes cellules. Ce pigment ne serait-
il pas d'origine ferrique ? Pour préciser cela on aurait dQ recourir à la colora-
ti~n de PERLS. (voir photo IV).
-
Rate
O~ sait que la pulpe splénique comprend
2
formations enchevêtrées ~
l'une lympho!de, la pulpe blanche, l'autre hémolympho!de, la pulpe rouge. On
constate que la pulpe blanche est totalement respectée. Elle présente, cependant
une imporante hyperplasie lympholde. Les corpuscules de Malpighi ne sont pas vi-
sibles sur notre coupe. La pulpe rouge, elle, accuse un aspect "tatouée". Les
cordons de Billeroth sont envahis par des histiocytes macrophages énormes, ren-
fermant en leur sein des grains de pigment. On rencontre un pigment mat, brun, et
un autre qui est ocre. (voir photo V).

---

Photo
lU
Souris splénectomisée
n- 13 172
Autopsie • Poids.
21 g
Foie:
1 .3386 g - 6 %
Commentaire 1
On note une prolifération d'histiocytes macrophages bourr6s de grains
de pigment brun. Le système de Iupffer présente des dépets de pigment
en amas. Aucun processus de dégénérescence, ni de fibrose n1est mis en
évidence.
1
, ,
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---

- ............
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1i,
1
1
Souris spl6Dectomisée ~
nO 13 172
Autopsie p Poids 1
21 g
Foie 1
1,3386 g ~ 6 %
Commentaire 1
Cette photo met en évidence les histiocytes macrophages, cellules volu-
mineuses, à noyau central peu visible. remplies de grains de pigment.
Elle rév~le aussi les petits granules de pigment brun en amas opaque. On
peut aussi apprécier le caractère irrégulier et translucides des avina
de pigment 8cre.

---

--_ .._-_._-
--_ _-------_."
....
Photo
V
Souris non splénectomisée 1
nO
~ 000
Autopsie • Poids :
25 9
Foie 1
2,0597 9 - 8,2 %
Rate 1
0,3213 9 - 3 %
Canmentaire J
La photo montre bien la pulpe blanche,intacte, non envahie; on apprkie
mal l'hyperplasie lympho1de. Par contre, elle révèle une pulpe rouge
"tatouée", remplie d'amas pigmentaires au niveau des cordons de Bill--h.
On peut distinguer un pigment brun en amas. qui se voit ne;tement1 et W1
autre Ocre. qui est plus fin. disséminé.

---

.cl .-, "
' • •7
7
•
. e
---~--_._--- -- -. -.- -- --
58-
Rein
Le glomérule de Malpighi présente une surcharge pigmentaire, en dépOts
massizs entre les capillaires, et semble-t-il ~ussi dans les cellules de l'endo-
thélium vasculaire. En certains points du tissu conjonctif inter-tubulaire On
retrouve des cellules macrophagiques littéralement
?ûurrées de pigment ocre. Le·
tube contourné du rein présente par endroit seulement et de zaçon très limitée
une vacuolisation supreficielle et une desquamation intra-tubulaire. Le reste du
tube semble normal. Il existe une vasodilatation marquée.
-
Cerveau
En fait, il n'y a pas d'atteinte du cerveau. Par endroits, on voit au
sein des capillaires des globules rouges entièrement parasités. Les cellules
endothéliales sont hypertrophiées, et remplies de granulations pigmentaires.
En conclusion,le Plasmodium berghei réalise des l6sions anatomo-patholo-
giqucs très voisines,quoique caricaturales de celles observées dans le paludisme.
L'étude de ce parasite ne peut qu'aider à une meilleure connaissance de l'histo-
génèse des lésions que nous observons chez l'homme.

---

-
,
" . i . .
59-
v- CONCLUSION
Au cours de ce travail nous avons effectué de nombreuses splénectomies
sous anesthésie générale. Ceci nous a appris à résoudre certains problèmes posés
par la chirurgie expérimentale,
Nous avons pu nous familiariser avec les diverses techniques de Para-
a)
la goutte épaisse nous a permis de recherche l'hématozoaire dans
le sang.
b)
les frottis de sang nous ont aidé à identifier le parasite, et à
définir les caractères morphologiques du parasite fixé et étalé.
c)
les empreintes d'organes ont présenté un double intér@t 1 celui
d'apprécier l'envahissement capillaire au niveau des viscères, et
celui de préciser à quel stade de développement se rencontre le
parasite.
d)
les frottis de moelle ont apporté la preuve d'un éventuel envahis-
sement m~dullaire par les hématozoaires.
e)
les coupes histologiques ont permis de décrire les lésions cré~es
par les parasites au niveau des eifférents organes.

---

_. -'- -_..._---
60-
Nous avons obtenu les diFFérents résultats suivants :
a-
Les souris splénectomisées en cours d'infection, c'est à dire 72 h
après l'inoculation par le Plasmodium berghei, ont révélé un amaigrissement in-
tense, plus important que celui constaté chez les autres. A l'autopsie l'animal
•
pouvait avoir perdu le 1/4 de son poids de départ.
1>-
Les souris splénectomisées A jours avant l'infection ont accusé une
durée d'évolution prolongée par rapport aux témoins. L'ablation antérieure de la
rate aurait ainsi un meilleur pronostic sur le déroulement de la maladie.
c-
Les souris splénectomisées 3 jours après l'inoculation par le Plas-
modium berghei ont présenté une survie raccourcie par rapport aux souris normale,
n'excédant pas 6 jours. La splénectomie n'a pas du tout ici le but de supprimer
les
Facteurs compressiFs de la splénomégalie. On pense tout simplement qu'elle
est pratiquée sur un terrain déjà fragilisé par l'infection en cours, et aggravée
par le choc opératoire.
d-
L'observation des différentes parasitémies a conclu que la souris
splênectomisée présente un parasitisme élevé, supérieur à celui de la souris nor-
male. La splénectomie provoque ainsi une véritable décharge parasitaire au niveau
du sang périphérique. Elle augmenterait le pouvoir de croissance et de division
synchrone du Plasmodium berghei.
e-
La souris splénectomisée a révéle en fin d'évolution une anémie
plus importante que le témoin. L'augmentation considérable et brutale de la para-
sitémie est certainement responsable de ce phénomène. En cas de splénectomie,
l'envahissement médullaire s'effectue plus t8t, et avec une plus grande intensité.
f-
Au cours des examens macroscopiques, les souris splénectomisées ont
présenté une importante héPatomégalie, supérieure à celle des souris normales.
L'ablation de la rate favoriserait la capture des parasites au niveau des cellules (
de ~upffer du foie et le dép8t des grains de pigment.

---

"
.'."
.
g-
Au cours des splénectomies réalisées 3 jours aprts l'inoculation
au Plasmodium berghei, il nous a semblé que l'intensité de la mélanose et
l'tmportante de la splénomégalie sont influencées par la quantité de. parasites
inoculés par voie intra-péritonéale.
•
En conclusion, au cours de ce travail consacré à l'étude des effets
de la splénectomie sur l'évolution du Plasmodium berghei, nous avons pu montrer
que l'ablation de la rate avant ou après l'inoculation du parasite entraiDe
deux effets contraires sur la durée d'évolution de la maladie. Dans le pre.ier
cas, la spl~tomie semble prolonger la survie des animaux privés de rate 8
jours avant l'inoculation du parasite, par rapport aux témoins. Dans le 2 ~Ile
cas, la splénectomie réalisée 72 heures après l'infection dtminue la survie des
animaux. De plus nous avons observé que la parasitémie des souris splêDectOlli-
sées est nettement plus élevée que celle des souris normales inoculées. Ces
données expérimentales suggèrent que l'ablation antérieure de la rate serait
favorable A l'évolution de la maladie palustre. Si cette constatation peut ttre
vérifiée chez l' hOrJ'llle, on serait tenté de préconiser la splénectomie sysUmati-
que comme moyen de lutte préventive contre le paludisme. Mais DOS résultats ont
révélé aussi que les souris splénectomisées présentaient à l'autopsie une im-
portante hépatomégalie. Si l'on a recours à la splénectomie pour éviter les
accidents compressi.fs, on n'aura donc pas résolu dé.fini tivement le problèle ;
car l'augmentation considérable du .foie, conséquence de la splénectomie, va elle
aussi engendrer des troubles compressifs, qui seront.s~rtainementplus redouta-
.
~
. ...."'-...
bles, et plus décisifs sur le pronostic vital de-"l' indivi~-, Nous pensons donc
~
~
que l'indication de la splénectomie dans le paludisme devrai t-~.rester limitée ;
.
"
elle n'est qu'une solution palative.
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---

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•
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---

_ _ _ _ _ _ _ _iiiii6i·.,"
1-
TABLE
des
MJ\\TIERES
•
1-
GENERALITES
A-
Cycle du parasite dans la nature
3
1) souris "blanches"
2) rats
a- Cycle du parasite chez l'anophèle
5
C-
Cycle du parasite chez l'h8te
6
Do-
Voies d'inoculation
7
E-
Entretien de lù souche au laboratoire
R - 9
II-
MœPHOLOOIE
A-
Données au microscope optique
10
a- Données au microscope électronique
13
C-
Développement du Plasmodium berghei
15
III-
EVOLUTION HEMl\\TOLOOIQUE
A-
Matériel et méthodes
1A
1)
Frottis de sang
18
2)
Numération
19
3)
Frottis de moelle
19
4)
Empreintes
19
5)
Goutte épaisse
20
6)
Coupe histologique
20-21
7)
Techniques de transplantation
21
a)
1 ère méthode
b)
2 ème méthode

---

î~;,
2-
R)
Technique de splénectomie
22
B-
Résultats
22
1 )
Symptomatologie
2)
Durée d'évolution
3)
Période de latence hématologique
a)
influence du nombre d'hémato-
zoaires inoculés
b)
influence de la qualité de
l'inoculat
29
c)
influence de la voie d'ino-
culation
29-30
4)
Période hématologique
30
a) Augmentation du nombre des
h~~tie. pare.1t6e.
31-3'
b) Développement synchrone et sé-
questration vasculaire
' 36-41
- Rythme photopériodique
- R8le de la glande pinéale
- Agents chimiques efficaces comme
intermédiaires :
-
mélatonine et sérotonine
- ubiquinone
- vitamines K et E
c) Diminution des globules rouges et
modifications globulaires
41-44
d) Leucocytose
45
"

---

IV-
ANATOMIE PATIIOLOGIQUE
1 ) Mélanose
46
2) Lipidose
47
A-
Anatomie macroscopique
4A-5~
B- Anatomie microscopique
56
1)
Foie
57
2)
Pigment
57
3)
Rate
57
4)
Rein
5A
5)
Cerveau
5A
v- COlCLUSION
59-61
~I.,

---