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l .c1.LO r~
p1.·éscntée à l'li. E. R.
des Sciences de la Vie et clU Con!.pol·ternent.
de
pour l'obtention
DU
GRADE
de
DOCTEUR
de
SPECIALITE
(3èlTle
Cycle).
1
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1
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- - - - - _..-- ._ .. ---.....,..,,~"'.~_ ...
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Soutenue le,2/
1972 devant 12v'comnüssion dl~an1en
Frésidellt
M. le Professed.l" JACQUE7
E:xr:Lrnil13teurs
1\\'f. le Profess2ur 'f:2ISSE"'{RE
Sc 2.~n.ce5.

---

SCIE~SES n~ LA VIE
_i
l'E-1.
JACQUET (Dirc.ct.·::.,-~·c U .E.R. des. SC-L(~"G.C'-~:'s
P::.--oi:e.s~cu:"
(1·ii_c.1~0~)j_()lc!SiG)
cl:2
12. Vi 2
etc: i.~ COl ~-: pIJ 1." t.:.: '~:2 L t )
PITOT
P;\\.RLY:'{
Professeur (G601ogi2)
Prcf2ss~ur (Bat~~ique)
BEET
LUEET
SIG~ORET (Directeur U.E.1. Sciences)
VICEDROFF
l·n,!.
DCGUET
P~ûfCSS2ur sanG ch~irc (DioJ.Dgie)
DOULET
1-1:'1.
BOIVIlŒT
SùUSSEY
O'ALCfJE
SIREIFF
V
d .
DREVILLCJi1
Charg6 dr2ns~igne~:~:~t (rsychologi.e)

---

Je tiens J. apporter le térnoignage de Dla r2specteuse
gratitude à Monsieur le Pl:ofesseur JAC(2UET qui a bien voulu m1ac-
cien"lents· et toute rr~a l' econnais sance.
l'vIes l'crnerc~emcnts vont de même à lvlonsieur le Profes-
seur VEIS5EYRE qui al!a. fait l'honneur de p2.rticiper à rnon jurY'et
J'acll"CSSe toute 1112. gratitude et ma profonde reconnais-
sance à l'vron~:;icur le Docteur BQTJTIBONNES dont les p:cécieux conseils
mront servi quoLdiennerncnt de guide dans la rf;;;:llisation de mes reche:r:-
ches.
ASSlSCë~nts, aux A:::si.stants lOt à tout le personnel du Lo.bo:i:atoire d.e
1v1iCl"obiologie dont l'aide et llalTlitié m10nt pel"mis de m.ener à bien ce
tra'i<!.il ainsi qu!'à. tous (:(;1.1:: qui m!ont apporté lelll" airnable bi,~nveillance"
- - - - - - - - - - - -
------------

---

. l -
PLAN
pages .
INTRODUCTION
. . . . . . . . . 1
l - DECOUVERTE DE L'EPIZOOTIE DITE "l'vlALADIE XII
"
"
., .. 1
A - Exer étion
'
' .. , , . ,
,
, 2
B - Cane él'i sa.tion ., . , .. ,
, . , .. ,
, . " .. , , ,
, ,
, , , , ..
2
II - LE CHAMPIGNON PRODUCTEUR - REPARTITION DES SPORES .. , , .. , ..
3
III - L'ARACHIDE, PRODUIT DE PREDILECTION,
, .. ,. ,
,
,.5
A - Caractéristiques de la pla.nte et de la graine. , .. ,
,
5
B - Conditions de eontanlination des al'achides
,
,6
C - L1ilnportance de l'al'<lcbide dans l;;}linlentation africaine en
,.
8
lia.ison avec la frécue~,-ce des cance:i:s du foie
IV - INCIDENCES ECONO::vEQUES RELATIVES A LA DECOUVERTE DES
10
FLAVACOUMARINES.
A
L'importa.nce de llarachide au Sénégal
. . . . . . . . . . . . . . . , , 10
B - La production de Parachide en Côte ci'ivoire
12
C
D -
à base d'arachides.
Les nonnes.
PREMIERE
PARTIE
-
ETUDE "IN
SUBS-
e----=..c=-",-,'-"
D1ASPERGILLUS FLAVUS
, 18
CP.,APITRE l
RAPPEL SUR LES MECANISMES D'ACTION DES SUBS-
TANCES ANTIFONGIQUES SUR LES CHAMPIGNONS MI-
CROSCOPIQUES
'
,. '"
19
l - LES FONGICIDES E.JORGANIQUES
19
A
Le s métau.::'C
"
, . . ..
19
B - Les fCllgicides nOll ~néta}.liqlles . . . . . .............. '
.
21
II - LES FONGICIDES ORc;A':~IQUES
21
A - Les dithiocarbamates
,
"
"
"
21
1) Le groc:pe DDC
,
22
, 2) Le groupe n<l bame
............................................
22

---

C - Composés hétérocyc1i.qte.8S azo~és
23
III - LES ANTIBIOTIQUES ANTIFONCIQUES
,
23
IV·· CONCLUSION
24
- CFL!\\PITRE II : LES IvlETE,jDES DE DIFFuSION EN GELOSE ET DE
DILUTION EN IvIILIEU LIQTTIDE SUR CZ_L\\'PEK-DOX
26
l - INTRODUCTION
"
26
II - I\\'1ISE EN EVIDENCE DE L\\EFFET INHIBITEUR DES SUBSTANCES
SUR LA POUSSE D:ASPSRGILLUS FLAVUS PAR LA METHODE DE
DIl'"'F'TJSIOI'J
28
A - lvIilicu de CUltUl'C
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . .
29
B - Pl'6parabon de la solution de substances -tests
" .. 29
C - Iviéthode de CUltU:::8 et lecture
, 30
D - Discussions de la métbcdc
:
30
E - Expression de,:; résultats
31
III - TITRAGE DE VACTIVITE FONGIST ATIOUE ET FONGICIDE DES
SUBST~4NCES n·THIErT RICES SUR LA C ROISSi\\.NC.E DI ASPERGIT _~US
- - _ . _ - - -
FLAVUS EN IvIILIEU DE CZAPEE.-DOX LIQUIDE
42
A - Technique
"
44
B - E}:prcs:3ion des résultats
44
I\\T - CONCLUSIOi\\I
"
50
-CHAPITRE III - EFFETS DE QUELQUES ANTIFONGIQUES. SUR LA TOXICO-
GENESE DE LlASPERGU-,LUS FLAVUS
'
52
l - INTRODUCTION
:
5?
II - MILIEUX DE CULTURE ET COI\\'DITIONS DE PRODUCTION DES FLA-
VACOUlvIAF.II'JES
"
"
53
III - METHODE DE DOSAGE DES AFLATOXINES
56
IV - TECHNIQUES EMPLOYEES
61
A - Ense,nencement
,
61
B - Extraction et chror"l.3.tcgl"aphie
"
" . ..
61
V - RESULTATS EXPERH,,1ENTAUX ET DISCUSSION
,
62
VI - COI\\CLUSION
" . _
81

---

- III -
DEUXIEME
PARTIE
- L.-1. DECONT A l,lI l'L-\\ TION BIOLOGIQuE .. ,
82
- CFLAPITRE l - LE POINT SUR L1ET.L~.T Dl~S RECHERC:E-lES DANS LE DO-
:v-rAINE DE LA DECONTA1\\·[!i',JA.. TIO:N EN GENERAL
83
l - DETOXIFICATION PHYSï:QUE
84
1 - Chaleur . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..
84
2 - Radiations
84
3 - Extraction p2..r les solvc'.nts
85
II - DETOXIFICATION CHllvUQUE
,
85
1 - Le s oxydants
85
2 - Les alcalis et les acides
86
III - DECONTAMINATIOI'·I EIOLOGIQUE
"
86
.
.
- CI-L.t.~PITRE II - LA DECONTA.MINATION BIOLOGIQUE
,
87
l - REVUE DES 'IRA 'lA UX ANTERIEURS
87
II - RECHERCHE D'ORGANISlvŒS INHIBITEURS ET ESSAI DE DETOZIFI-
CATION PAR LE FLAVOBACTERIUM AURAIi.TIACUM
91
A .' Recherche dlGl"ganisl'ues biologiqucrnent actifs SUL' le développem.ent
d'Aspergillus flavus
,
92
B - Etudp- d8 la faculté de clétoxification du FJ.2.vobacte:Cl.U~Tl aül"é'.ntiacul'n ... 94
1 - Origi:lc de la souche utilis ée
94
2 - Description cleo la souche
94
3 - La cor:duite des essais de d~toxification p?.:r le Flavobac-
~~riun1. 2.ur;:l!".ltia~cum
~
98
a) D ~toxification des tourtea.tLX pollués
99
b) Détoxificarion en milieu liquide
102
III - CONCLUSION
; '.'
'.'
106
T ROI SIE .Nf E
PAR T l E
-
AC TI ON DUT .f-':;IAB E NDAZ OLE ET DU FLA VO -
BACTERIU?A AURANTL~_CU:\\1 SUR LA CONSERVA 1'10]\\[ DES _l..Rl\\CHI-
DES EN TAS ET SUR L"_ lvIYCOF LORE DU SOL
107
- Cll.i\\PITRE l -
CO NSERV_-"..T IOI\\j Df:S ARA.CI-UDES EÎ'J T.:\\S PAR LE Tr-IIA-
BE.i':'DAZ Oi-..E ET ETUDE DE LA IvIYCOFLORE D'UN SOL
TRAITE AVEC CE FONGICrDE
103
l '- ETUDE DE LA CON.sEP_V_~_TIONDES AI<..Ji_CHIDES PAR LE THL~3EI'r.oA-
ZOL,E
,
109

---

- IV -
1 - ivlatéric1
109
2 - ExpériIl.ici1tation
109
3 - Rés1l1ta.ts et discussion
"
111
b)Analyse microbiologique des arachides
114
II - ETUDE DE LA :MYCOFLORE D1UN SOL TRAITE AVEC LE: THIABEN-
Dr\\ZO.LE
116
l - lvlaté.;:ie1.
116
2 - Expérimcnt2.tion
116
3 - Résultats et discussion
116
-,)
u .
Reel,
L .
• 'r~he (l'
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\\.....1..
la'la;'o"i'l"S
..1._
t..
~ .... 1 ç
• • • • • • • • • • • . • • • • • • • • • • • • •
. •
116
b) EX::ll'Den des lam.es de rnicroscopie
.
117
-
c) Dé~10mbl"err..ent des SDOl'eS
•
d'Asnerp'illns
_ - - - - U . !
)----.:._
fla.'ius
_
d2.ns la terre
117
- CHAPITRE II - CONSERVATION DES ARACHIDES EN TAS PAR LE
FLAVOBACTEIüUM AURANTJACUlvl - EFFET SYNER-
GIGUE DU TBJ:ABENDAZOLE ET DE CE GERME
119
1- COr·rSERVATION DES AR.c:-\\CEIDES PAR LE FL.AVCBACTERIU2vl ATJRAN-
TI~L\\C Tj lvI
119
1 - EZ}JérimeEtation
119
2 - Analyse et r6sultat
119
II - EFFET S~{l'n~RGIQUE DU THIABENDAZOLE ET DU FLAVOBACTERIUlvl
AURANTIACU2Iof SUR LA COI\\:SERVATION DES ARACHIDES
121
CONCLUSIONS GENERALES
126
BLE LIOGRA PHIE.
- -- ----
--_.- -- -== === ==

---

INTRODUCTION
des besoills 11r..tl·ition11cls cle:3 2.l"lirnai.:..:<: a arn.e!1é les fab:rical1.ts européens, à
transiorrner radicalement la conipositiol1 des rations alinJentairi2s du bétail,
autrefois nouc:is exclusivcnient à l'herbage, à s'intéresser à d'autres forrnes
dlZlpports azotés et ünalernent à y inclure COlnrne base protéique essenti811e
des tOI,rte2.UX d10rigüles diverses.
Les exportatio:1s de ces tourteaux ont pel'mis, certes, à des
pays producteurs d'al-achid8s,
de soja ou de li:'l, d'écouler les excédcüts de
leurs pl"oductions.
IVlais ceS ISchanges économ.ioL,.les, bie:il que bl::nélïques pour
les uns et pour les autre s. n!ont pas manqué de soule '1er de s prcblèlnès tr ès
épineux qui risquent de l:~f)'.'-oqll(;l·l'iO:"fondren.1.ç!ïtde l'économie de.s pays qui
ne survi\\'ent que grâce à la culture de ces oléagineux.
l - DECOUVERTE DE L'EPIZOOTIE DITE l\\.,fA.LADIE "XII.
- - - - - - - - - -
Ainsi en 196ü ~L la suite d'une épidérnie qui décima de s éle-
vages de dindons dans le sud de l'Angleterre, on incl"imina des tourteaux bré-
siliens contarnir:és par des n10isissl1res dans les cales des bâteaux. Les re-
chel'ches qui suivire~1t cette "épizooti.:;", dont fut d'abord rendu responsable
un vi:;:us, aboutil:ent très vite à la d\\~couvert8 dans ccs tourteaLLx,de toxiques
désignés pa.r le S ;:tnglo -S3.xons sous le tern1e général d'anatox.ine [d' Aspel"4il1us
Havus toxin
(CARNAGHAN et coll.
1961)J Rappelant par trop le n"lot d'anatoxi-
nes, m.olécules toxiques ayant perdu lel11"s propriétés nocives,
et prêtant à
confè.:.sion a.vec le
préùxe " a " pTi'.r2tif, JACQUET et BOUTIBONNES:(196ï)lUi
pl"éiè2.·"<::nt le norn de ila. vat 0 XirH2,
saES carnpter qu'il ne s'agit pas de t"::.:-:in"2S
vr:lies ou r:1Ï.eux,
pour faire 6tat de la structure chirniqllc, celui de i1avacourn:l-
ri'lC (JACQUET et BOUTIBüNNES f 1970). La déc'.:mvertc de ces toxiques,
aujcu~ccrh~.ti rJien CQ.:-ùl1.IS, lut associée à la pré~3ence et all développemcn.t d 1P... s-

---

- 2 -
P21~?il.ltlS flaYl:s, espèce de cllan.l.pig11011 l.Jélr:ale et: tl"ès prolifique SCl.lS les clio
ITlêlts cha\\.lcls et l1l1n.1.id.es.
A - EXCRETION.
des H2.-'/acournal'in(;s,
d'Sjà lctrgelTIC1'.t étudiés, m.züs il nous parait \\lita.l de 50\\:
ligner 18 caractère particulièr21I'1eTlt callcé:-ig(:~è ùc ces co.rnposés (ClTTL..LON
et REî'JAU LT 1961, LOOS?vl0RE et ?vlAIU<SON 1901, S ivD TH et 1/Iac IZERNAN
1962, GARDINER 1962, ALLCI\\.OFT et LE\\VIS 1963, BUTLER et' coll. 1%3),
SI-LA..NK etV10(~AN (1965) ont montré que si:<: hc;ures après
e:<piré, Purir~e et dans les fèc,c:s.
Une partie est égédcmcnt excrétée sous for-
A
me d!:::dlatoxine rd:, principalement oLln:, le lait (DELAGE d
FEI:iR 1966 ; PUR,
CHA5E
1966 ; ~\\!:ASRI et coll. 1967 et 1969, ALLCROFT 8t ROBERTS 1963;,
dans le foie,
le
.
l
1'1
~
l:elll,
a ) l
e
eL.
lÎuriEe (NABI'JEY et coU.,
1S'66 et 1967).
11 1 est pas
élir:ninée par les émonctoire s na turcls.
Un::.; fraction non négligea blc
peut influencer considérablement le processus de synthèse des pl'0t6i:1CS en
inhibant la àuplica tian de 11 AD N.
Lô:s gl'ouperneni:s qu5.nones des aflatoxines pourraiÇ1Jt :oe
.l'Llit pOù?" effet d!ernpêchcl' pJ.l'ticllem.ent la sYEth2~:;e protéique, d'mlê part, et
d1indLli:re à doses plus- fcùb1r-;s le processns de c2_,~cé:c'isation, d t 2.utre part,
(FRAYSSI?--ZET et coll.
1~6S et 1966). Il n1::.;st dODC pas étonr.,:wt '18<:; ces cancers
'..,:':.:",>
Se localisent: pl'éfé:.··~~ticllel"l1entau niveau du foie, ùant donné le l-ôlc prépon-
~~~i}Ù~~é.~ant de cet organe d2.ns le n....étabolisme de ces toxiques en particulier. Cette
d<~ con1prcll.è..Ye lr~cuité (les hép;ltomes .c}lez les suje~s, care11-
. cé~ ên pr~téin.es.

---

- 3 -
I\\lais, corn,-.n.e l!Oylt souligaé FR.."'- YSSI0:ET et LAFONT (1966),
les risques dûs aux 3.ilz,tOXlllCS l-estent sous b. dépendallce de del1x facteurs
la répétition dans le temps de Pingestion dialirnents contzuninés dlune part, et
la pré senee dans la ration quotidi<::nl'.e dlune quantité relê.tivernent éle'/ée de
toxique,
de l !autre.
Cepéi1dant, d!aueuns affil-lnent qee les doses présentes au
niveau de la cellule hépatique seraient infinitési~-'11ales et non cUD:nl1atives
(lv[ONJOUR, TOUR-:{ et ='iLARL\\CE 1968).
Des étud2S app:i:oforldies de l'écoLogie de FA_spergil1us Üavus
ont HlOlltré que de norrcbreux produits sont pollués pal" des spores de ce ch2m-
pignon (BOUTLBOl'll\\;ES et JACQUET 1969, JACQUET et coll.
1971).
l.è:3
l--.--.~~~\\icr:Clents et les arléllyscs ef12ctl.lées 2.11 labor2.toire
ont décelé la prése,lce de spores sur presque tons L::s f?i-oduits, surtout sur
cel'Y
-"._- d'Or;cJl·n''''''
- ~b
__
air, pous sièrc s cles routes de
. J
tr,),.-.,è-':>lec;
_ . " .
l.J-'-..........
'-'
(21 i
or·~· mer1
.il.
- t'"
ù
divers
....
,
Côte d'lvoil-e,
Sé'.u.ces d'arachide, billets de banque, oojet:3 courants)_ 1vIais il
est irnportant de préciser que clans ceS diiférents cZ:..s tons les p.::::oduits 2nalysés
ne contenaient pas obligatoirenlent des flav3.coulnarines_
La présence de ces
del-nières nlest possible qc.e si les spores l'cncontrent des conclitions de telnp(~-
rature et d'humidité iavorables à leur développeD:1ent. Heureusen_ent, ces
conidiospol"es ne sont pas toutes toxinogènes et si elles le sont, leur aptitude
à la sécrétion du tc:.;:ique varie ct")!1sidérablelnent d'un clone à l'autre.
une ét,-L2e c:f.teetuée récen11nent au laboratoü-,;; cle j\\ücrobiolo-
gle de C2.en a pel-[TlÎs èe class{~i- les difîé:r:cntes souches isolées par pays avec
leUl· ü-~quence de t:t)xico.~enèse (J ACCUET et coll., 19(1).
:2'-;0'-'.5 rcveocluisons ci-après les résultats de ·cette enq1.:&te
(Tableau 1).

---

l1~r Fréqllcl1Ct~ d'o!n3:.~:rv2t.;.on cl('f3 l\\sp ..::rg.illus et d~ leur sccl"8tioll de
!"L.l\\:l-C1llll1J;II'irlC'c; (.fI\\C:lI.II':T l:t (~l)11., ltJ'll).
1" -.- ... - ....
1
~
~
·~···T·················_·-··--l
:
1 i'!olllb,·c '.le
1 i"}nrn!Jfc de
1 ]?i)Ul'CC~lll.agc
1
Provcnancl; de la s0l1r11c. !
~~oll(~hcs tuxi-l de sonches
~~tlbstt·;'l.t
1 ~;ouch(~s élu- l
'
1 - ,
1
1
di (~CS
1
c:ogt::J1CS
1 tOXICOGCtlCS,
,
1
-I-~._._~-~
·I--~-·--_·_-
.~._.--~--.- ._..-.__ . ·--·-1··- ..-.- .. --.......
.-.- --···-···-1 ._ .. - -... --.- ....-_.
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
/"L I:lal;\\ls
(tvl;:tli, Tchad, (;;]._1
l o/I-'I'udll1L> 1'\\.~t~~t)~-f
1
1
1
-!;;~;~-JiZpl:bli r!, ll,-: Cc 11 Lr::.1. j ,. i - :
~I~~(i~_.--~;~~~-;_--!-?j~-î~-~~~- 1
,
C:I.ÎIIC,
Con::;q,
~A~Ld:l~i"t~;~;)r.1 - 1\\r;lcl1ilk's
1
91,
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1
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80
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III - L'~~.RACHIDE : PRODUIT DE PR2:J'JILEC':"CION.
a.rac 11idicr.
des touffes de 30 ;3.. ~O Crll. cL-],ns J.23 régiolls s~che's 01.1 de 50 ~l 60 C:i1 d.:J.:ilS les
...
vent élU rnêrnc tilT(; que l!,üburl"len,
contcnü' ô.es aJ:1ato:<:Ïües CB!.)UDI:RCUES
etc 0 Il.
l 9 6 6) .
La
no rr1r::lce vuJ.;;;a.ire:nlf311t cacal11.lètc et. con.tenUr3 à l'in-

---

- 6 -
TABLEAU
~._~o
Il
- - - - - - - -
-
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- pro~lde3 (N z. 6,25)
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27 ~~
- e:<tl'actif r:.011 a::oté
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- cellulose: b~c l1.te
2,610
- cc:ndr·cos
2,4 10
- colorie s
5 94 ~10
' .
.... /F~
~~2.12.C tane

---

- ?
ehées sont clon.c c:·::~:l·ê~Tlcn.l2r;.t chargées c.le spol"es~
.~via.is cc Il'est que pendal"!t
Vl"CoS)
dé;-ùu1is de rnoyens nl.<2c2.lliques) .Les cOl"lditiollS de production sont alors
se.
Toutes ces conditions pe:cniettent la ,gel'rnination des organites
plus SOU'iCont il ne suffit que de '~luc:lques graines c'Jntan1inées dans un lot
pour que l:2.l1alys,~:ri',:'~:Lo 1:1. p:;:ésence de flavacouluarine.
)
Les p,:oduits cél'é::.licr::; ou les graines oléa;:;ineuses l'écoltées

---

-:3 -
illdig~11è. Si tous les alirnêT~ts J. bZ:.st2 d1a.rach.icle C011tel~aie.nt réguli8ren.l.ellt
SON 1965, FRA l S5E.JET et coll. 1°66; n1o:,:"t na.s ITlilnaué d!2.ssocier cette
,
~
t"'
....
lna12.. clie ~
traces cle toxjrr.12 q.L:.e J2.l1S tlD seul ca.s,
cllez url jeune S~.ljet rnort de p118umo-
llie.
Il "ne s r;;.gissê.it (lu.e (i!UI'.:.8 absorptio.l1 accidcrltt~lle.
D ' 2.utre part, li:s ;:uJedyses que nous avons effectuées sur les
éch2.n.tillon.s de Sa'llCeS d!a:rach..i.des pl'"éle\\.r~s dans différelltes fa~llilles ivoi-
to~-~ique dans aucun ca.s. Ces ar.a.lyses ne nous perrnettcnt P;lS de ti~cer une
COnCl"llSion déiiniti'\\~e '1ll2..11t à la te!î4~Ur el1 aflato:-.ci.n2s cles ratîon.s afrlcaines,
que la prfsellce (lU2.si-c~:lotidier
.. n.e dt':: liaracllicle (iall~ 1!2.lirnc:ntJ..tio:n africaine

---

r~ŒJruv.
yr;~
T.o.;l~.)I.~~~~~! ..'Ul::u:..:.::lt~~~~:·. . . - . _ ....~.;,;r-.v.""" .....:.~I\\o4.~:;.I,
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Fic;. _1_
Zones géographiques de la répartition principa.le du cancer du foie.
(Concoul's médical du 9. 3. (;8 -)
'-Û

---

- 11) -
IV - INCIDENCES ECOI-.JOI\\IIQUES RZl....."'5IVES A LA DECOU'lERTE DES FLAVACOU?YLA..-
RE"J"ES.
d2.ns les produits al"achidiers ,le s,)'lt pa.s seul~nlcnt cPord.l-e sanitaire ou hy-
giènique. Ils sont aussi d1o"-"d,:e éCOllornique, tJ.l!.t p,)ur les ?ilfS produet~urs
rnillions de tonne:3 peL;: ail.
Les pr<.)ch,ctiolls 2uropéennes (Espag':ec) et arnéri-
Pi) l.-tatiollS in.diè~ln.es.
jusque là restés Ült2.etS,
crurent trO\\_l'!èT la so1.l.1.ti.::;n miracle dan::; llagricul-
tnre.
Les 1]cJlnbrC '.lsc-èS ài\\'ersifir:ations entrepl-i:,;es ça et là n'ont pÛ.s tOUjOU1-S
été \\.1 il S II C C (: S .

---

-1 l -
Actuenerne~1t, avec ;n"ès de 600 000 tonnes par an, la Répu-
'O'.L; a "e::'> ,-1 u c)" /'1' e:' rr~ 1 '/-:1,'::> "Olt 11 e 1"T- (_:'l''-''.:l rit- CI n t·~t~ l-le" .:;: .oa\\ïc. [\\r O,--1'l,-t e· 11 -r <::: Q' e C.... pt o"lr~ a rr1· -
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QOllllèe
a
r~~I)ugn(lnce ces pay-
sans séllégal2.is à pOlll~Slli'vl'e un.c cl1treprise da:ns 12.q~lelle ils Ile trU1.1.\\,-ellt pas
le ur com. pte,
e11 e dtfn"lOllt 1"'0: bic ~1 à '-=-L1.l el point, l' cu' aL: hidc r est c la nlâ.ît 1'c s se
èéjà 1'25
Pe>.:portatiol1 de l'arachide OLt l.lr:.e influence directe sur to,.:te la vie écononù-
(IU2 et sociale.
Ell {~ffet,
sur ll11C porrulation de 4 milliollS d Zhabitant3, 30 1a
gernent les besoin.:::> loc2.t,x.
Le Sénéga.l et les pays voisins ont un irnportant
Comn.l1~rce d'exportation vel'S les pa.ys européens ct surtout vers la Fr2nc2.
Ces eX.l.)oJ:tations SOJT'.t réalisées sous fonnes de coques, d'J.rnandes d'~corti-
Le t~blca.1..1 TIl illustre la .t'.:rocluctiol1 ctr;~.. ch~(lièTt3 des P2.'lS de
l'Afrique Occidenta.le en 1960,
.
Di-x ans plus tard L"::i chiff:ces O~lt sensiblen18nt
/
"V2..l'le dans
leurs l"apports,
~·:iïais les fH"oblèmes restent ~dro,nticLues.

---

- 12 -
T A BLE "\\ LI
N°L II
----_._--
Proclu.ctioll en tOfl-!le,S d!ar2.c!jil.h;3 è.écQl~tiquét~S des pay's dl.i\\[rt<-llle
Occid.eEUlLe en 1960 (3~\\R3IER 19(0).
Pays
[ Tonn3.gc c:XC:'Yc';'~ 'lel'S : l:!:-oè.;lCtion tûLa.lG ba-: Excédent dont l i é-
1 la France base décor-I
sc décortiqu.écs
1 couL~n:ent est régi
prOdi..lctcurs.
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ur~e l1l::goclatlDIl
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ùahomey
1
1
1
Il 000
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17000
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1 700
Pa ute Volta
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1
1
1
1
1
1
1
590 000
753 000
1
168 000
TOTAUX
1 soit 259 COQ d.'huile
1
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
1
.-C...
1
_
B ,. LA PRODUCTION D;A.R...:'\\,C~-EDES EN COTE DÎ~VOIRE.
d'l\\.-oil·8 produit '12 500 tonn~s dl;].Tachicles (coq1.;es sèches) F0.r'lE, centre 31 800 en
1963 ct 28 000 en 1965.
Ces cniih,_~s indiqu'.';'lt bien une production Cl" ois sante depuis 1765. Ce-
Ilhuile dîar;J.chicle brute ou l"2.Efi.i.1.ée.
Po~r l'année 1969, elle a in,-pol"té 677 238 kg
Sur la qnantité d'huile bnlte importée, la SITCOG (Société l'iOirienne
de Transforll.l.atiol1 des Corps Gras) prélève en.vüon 100 tom-:.cs par an pour la iabri-
cation de la margarine. Le reste est raffiné piir cette société pou:, la consom.r:nation
ivoirienne.
D",vant ces do:rL:J.~"'s, nous POUVOLS l"0Corn.aî1::ce que le pl'oblèrne des
fJ.;1,.TiaC()u.n13.1'illes Ile constit1.l'2 pa.s t:.n.,~ cLuestion crl~ciâ.le ·pOl.ll"" lIécoj.1011.1ie i'.lOi2.~ien.ne.
La p·,:odudion. ,Fa.racllides est si négl.i.geable pa., rapport aux autres produits agl'ico-
les qu1eEe ne risque en. rien d'handicape;: la. bal::'-Jlce C0nlll.lerciéd.e ivoiri'~nne.
En revanche, lê'. questiol;, byr;i.é,üque et surtout la fr~quence éven'':'.lelle
des cancers prinl.itifs du :oie
rVrêtc:!1t ta Dl.ên'lc Ï11l.porLJ.:'lce que (lans les 'pays Lû.E'ëe-
..
. : . -
r:'

---

- 13 -
C - BESOIi'TS DE LA FRI\\.~JC:S EL'-·j F'RCDU1TS AR ACHIDIERS,
l'ante, lnalS on constate n~anrnoins qüe sur une conscrnrnation lnoyenne française de
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rnatleres grasses s C .cvanL a enVll'on
,:; J:\\:g par te e
llalHtan
en
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es nUl es
des corps gras alil-ri(;ntail"es a':2C ~2, 2 1~ de la COl1::,omm.aticn totale, deV;ult le bcurr
(40,8 10)' le saindoux (lI, l ~o) et lJ.nc:.rganne (5,9 '1)) (BARBIER 1960).
/
cor::; 01"l11nC e
en
F T;;.nce. Elle est cOD.siclérée CGl1.11ilê ~ln l)yodllit 2.1irne:ntaiI"e COllr2.1.1t,
pour l1alirnentatioll. a.nil-nale <~t son tallX cl8 r.:onsornrnaEon att,::int 35 ~'Îo de l'è!1semble
cles tourtea.ux
(DELAGE et .ESRNACE 19(6).
Une paj·tic du tOUl·te;).u d i 2..::aci"lide l~st
Le t<lDh:(l.u ci-apres indicl'...le as:~ez bien l'importance de lét COn30lTdTlatïo
du t()urt('~au d l al,'é1.chide 311 France par rapport aLLX autre s t01..11·tcaux.
TA.BLEAU
N°
IV
TOTAUX
1 n 1
.LU.
363
395 208
306 145
410 888
123 852
181 902
TOTAUX
526 474
793 560

---

- l.:! -
D - INTERFERENCES DES _-=\\YL-'l..TOXI?,TE:S AVEC LES ECrIA:-}CES C07\\:IMER-
des besoins fl'ar:çais en produits arachidiers,
soulignées précéderr,m.ent, ne
...
1
•
"'-
ecnanges C01Yll-r1erClali..X a
ma tell r s.
lièren'le11t ép.lilt:;1J--:--C au:( P(l'/S IJroflucL::;t:l-S et nota.r.:.l.D'1ent a~l S\\~llégal où l'a:r2..crl.id~
rrl0.11dial,
or: 2.ssist.~ 2,. urJ.e dégl'2..d:lti_Oll du COU1'"S
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les cffor~s du gOllVel·nenlC'.lt et dp3 services de conE1l2rci2.lisation.
Des 2.!l.al)Tsss effectl~é8S all Sé11égal S11r les récoltes (les années
.
,
.
à l'.:jir libre, ont (}G::l::-lC: 1;:1
(1) - Africasia, Ri:",".!.': da Ti.ers 1'.'10noe, :Mars 1971.

---

TABLEAU
Na
V
Teneur en aflatoxinè dèS arachides du Sénégal (GOARIN ct GOARIN A.).
1
1965
1
1 Collecte
1
NbE (+):
Teneur
1
, onl1es
!
: (en pprn)
1
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- - - 1
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1
1
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1
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1
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0,207
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6
1
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1
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1
0, 150
1
1
1
1
1
1
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1
Salourn . . . . . . . . . . . . .. 1
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1
1 432. 000
1
1
61
1
1
0, 116
1
le Oriental
1
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1
194
1
0,155
1
93 400
1
70
1
0,143
1
107 900
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
I
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1
1
1
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1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
;tal
production
1
1 842 5eO
1
1
Il 001 500
1
1
i
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - , - - - - - - - i - - - -
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1
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·
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0,102
1
1
1
0,140
1
1
1
~
I_ _ _
1
(+) NbE
: nombre dl échantillons analys és.
(++) ppm : milligra:mmcs d 1 a.ilatoxine par kg d'a.n'1ande s.
>-.
U1

---

- 16 -
En cornparant ces talL'< à ceux des arach ides du Nigéria par exeln-
ple (0,1 à 0,3 ppm), on se rendcornpte qu'ils sont idenLqlles et que les teneurs
en aflatoxine des arachides du S~nég21 resten.t rèlati..vernent basses dans cer-
taines régions et suivant les an'.lées. Cependant, ces arachides ne sallraient
convenil- telles quelles aux norm.es de consommation hUDlaines ou de confise-
rie 8Ylregistrées par les organisr:nes inten'éitionnaux (0,050 pprrl). Pourtant,
de telles arachides ne,représentent ,;u21"e un danger réel pour llhuilel-ic car
l'huile d'arachide raffinée ne contie:,t presque jalllais de toxique ou très peu.
l'lIais la question paraît plus délicate pour les autres produits à
bas e d'arachide set notarrllTIent pour le s tour tea lL'< qui retiennent a pc.ès ext:rac-
tion de l'huile, pl'ès de 98 10 de la toxine contenue: dans les graines.
Des analys e s effectuée s par GO},.IUN et GO}\\RIN (1970) ont ré vélé
que les toul-teaœ< d1arachide du.Sénégal titre"t appeoxinlativen1ent 0,286 à
0,446 ppm.
C,,;s taux paraissent énOnll.eS en regard des eXigences des p~ys
·européens ou des Etats Unis.
Le Darrcmark par exemple/interdit l'Îlnportation
de tout produit arachidiel- dont la teneur en ailc..toxine dépasse 0, l ppm.
Le 15 février 1971, la Commission du Conseil des Ministres euro-
péens a 3.dopté les normes suiv3.ntes ponr les aliments destinés à l'élevage (1).
Alilnents s Îlnple s
l ppm
Alirll.ents c ornpo sés
Ovins - caprins - bovins adultes
: 0,075 pplTI
Bétail laitie r
: 0, 050
Bovins 2l lle:cgrais sernent - porcins -volaille: 0,038
Volaille à It engr 2.îssement . . . . . '"
'"
., _. : 0,025
Aux Etats -Unis, tous les pl'oduits renEeYlnant des aflatoxines sont
~.
systérn2.tiquer::1ent rejetés, quel~e qu1en soit la dose.
(1) - Renseigner.'1ents fournis par le Bureau Européen de 1iOffice de Comrnercia.
lisation Agncole du Sénégal, 12, av.
George
V
- Paris Sème.

---

- l 7 -
ivlais, si ces n'le sures co!~::;titu<~nt un souci pour les pays produc-
teurs d'arachides, les p,?~cs européens ne SOiît pas Gl.oins concern~s par le pro:-
b~t;m,e des flavacOUrrl2.1-i!leS, ,Les élev'':;~ll'S et les fabricants européens d'ali-
m.ents cornposés se passeraie""t très diificilcn-'ccnt d.es tourteaux d'arachide
d'autant plus que cette pollution en cause actuel1erl1ent n'est pas caractéristique
d'Un s e'.ü pa ys producteu r,
Depuis dLX ans, la sitLlûtion reste entièl'c et tous les efforts dé-
ployés aussi bien par les prClductcUl'S que par les COnSCJnîmateurs sont sans
effet.
Les difîérentes métl:.ocks de dGtoxilic;].tion proposées n'ont pu donner de
résultats probants sans affecter la V2leUl' nutritionndle du produit.
~a lutte
contre les aflatoxines p<d'aft d'aut::u:t :JlLès â[Jn~ que lIAspe.':gillus ile.v'..-ls est
un gerrne C01DlûUl1, abond;].111"--n.cnt répandu dans le, sol et dans la nature,
sur
lC'luel les êlntïfongiqLles com.l1l.e.ns D'ont que peu d'cifet, et que le toxique qu'il
élabore est therrnor6sistant, :lOn dégradé par les tra.iternents Cllirniques les plus
divers, exceptioil bite des agents agTessifs (alûrno:,iaquc, cau oxyg8néc à
pH 10 par exemple).
L'étude CLele nous ccvons entreprise depuis 1970 au laboratoire db
.ivLicl"obiologj.c de Caen et qui constitu,~ l'obj8t de notre thi-::se de troisième cycle
abonde dans Ce sens,
El1(; ne prétend, cependant pas, apporter une solution dé-
finitive à un problè:rne sur lequel d!éD.lillents chercheurs se penchent depuis
plusieurs année s.

---

- 13 -
PREMIERE
PARTIE.
SUR LA POUSSE ET SUR LA TCXICOGENESE DIASPERGILLUS FLAVUS.

---

- 19 -
CHAPITRE
l
RAPPEL SUl"=',- LES l\\iECANIS.:'AES D :"~_C TION DES SUBST ANCES ..ANTIFONGI-
QUES SUR LES C}-L\\.?-.,fPIC~JONS .0iUCROSCOPIQUES ..
COIUIue la plupa:d des substances toxiques, les fongicides se
cOluport.:.':l1t cornlue des inhibiteurs de rnét;lbolisn12 en général.
Ils 3.;.sissentl
soit par intél"action directe avec les Dlétabolitês ou lês enzym.es,
~oit ?~r un
effet compétitif 'lis ~l vis des rr:éta.oolites. Ils peuvent all.ssi sc COIJ:l.pOl"ter en
agents agres sifs ; ils affectent alors l!intégrité de::; structures cellula.ires
sans lesquelles les processus vüau..'{ sc;rai.ent irnpos::;ibles.
Leurs actiO!lS peu-
vent égalenîcnt se tracluiè'e par des défonnations des appa.reils végét" ..tiis et
sporifères,
connues sous 1.e norD. de !Iionnes de souffr3.nce".
-'
.
Ces DleCal1-l..:rTles
rnalgré tout,
certains points restent enCOi-e obscurs.
Cf; rappel d8S connaissances théoricp).. es acqüises dû-IlS le rnode
d1acüon des substances antifongiques nous aidera à luieux saisir le con'lporte-
Cet exposé porte essenti'ellement sur les con'lposés antifongiques
de synthè se : fongicides organiques ,:.:t inorganiq lies. C ependant, no'~s a 'Ions
consacré le dernier par,êcgraphe au..x ant.ibiotiques antifongiques et notamment
à la nystatine (rnycosta tÜle).
l - LES FON-CI CIDES Il''TORGANIQUES.
A - LES 2vlETAUX
PalTüi les ions rr:.étalliques, le CUlvr8 est le plus connu, rr.ais ce
nlest pas cepe!ldant le plus toxique. Il faut souvellt lui adjoindre l'argent et le

---

- 20 -
DallS tou.s les cas,
ces ~021S son.t C0116i(iér~s COlJ.l.l-rle des i.J01~OllS
dont la to:..:icité provi~ndrait de la lorn1cüion de ponts a','cc les groUp0211.1ents
réactiOlLne1s de la c211ule.
Plus ieurs auteu::: s ont rapproché la toxicité de la p1up"nt des ions
métalliques avec la s~:2.bili'~é de leul-s ci:élates (EORSFALL
1956), l'insolübili-
té de leurs sulfures (SHA.W 195,'1:), ou a'/oc leur éleetronégativité (DANIELLI
et DAVIS 1947 ; SOl'vlERS 1959),
l\\'fais ces auteurs sont d'accord pour admettre
que les l'éactions des cations métalliques '10 sont pas toujours de sirnples
substitutions.
On peut égalenlent'ls sisLer à des ruptures de s ponts disiüfures
ou 0. la fonn2.tion de ces derniers P2.1' 12:3 1011S rnt~L:Üliqucs.
D2.11S
l'inhibition des champignons rnicl'oscopiqucs,
il faut clistin-
gller, d'une P;:J.rt, l!action sur la viabilité des spores (respil'ation) et d'autre
part celle Stlr le POll"loir de gê-rrnination ; D-'lais dluTle t.na~1iè~re génf..~rale ) Q~
con:ôté'.te une pl l e3 gr;:tncle sensil)ilité du pou,,'oir cic:rminatif par rapport ~ la res-
piratiol1 de lz.. spore, Il en est de mêm.c pour b. l'(;spira.tion de 11;lPInreil ~l"lY-
c élien.
Ce rt ai~, s ions tel ou e l' a--r~.:J'~/ll-tA-(JétruisCDt p1.ll"Cmen t et s i cnnl(;~11ent
. .6?"A~"· '-...,/~ '~
r-
11 intégrité de la sem.i -pcnTléa bilf§]~n~-t\\esccllu12.ircs, pcrrnett.?rlt la
sortie des métabolites (RICH ct ~{o,R{;F1A~1,L 19(J~3~\\, LêS ions métzdliques oeu-
f~ '\\ .~ ).;;J
•
vent égalenH;nt char,gel' la Ina r~,~~~<~ie de ~/:/~'PignOns sans r6c.luire pour
autant la croissance dlune n'anlere~a~la!<>&e
•
"l,&-'m enr ~\\l\\le'
.
"''-
-
Les fongicides nlétalliqc:es ne se cornportent pas uniquem2nt
con1rüe des inhibiteur s de 11,étabolis lTLe, Ils peu vent éga1811I ent affeder 13. l'es-
piratioll ou la croiss.'lnce.
D2_Ds certains cas,
ils peuvi::ont arrêter la division
cellulaire sans stopper la cl'oissilncc (I\\ICKERSON et VAN RU 19,19). Les enzy-
IDes renf(;1'nDnt les g:;:oupe:cJlcnts SB sont hahituellen1e!.1t inhibées par les fongi-
cides rnétalliqucs,
luais quelquefois, Of'. P(~ut as si:,ter sim,lltanément à une
inhibition de la synthèse et ~'- une dénaturation des protéines (RICH et EORS-
FALL 1963),

---

- 2.l -
On peut resur-ller llaction des fongicides rU3talliques en trois
poi'.:.ts
1) antagonisme entre llio11 inhibiteur et le Dl.étabolite.
2) déplacCluent dl un ion métallique, essentiel à l'activité dlune enzyme.
3) formation de conlplex'~5 ol:gilnornéta.lliques toxiques avec les constituants
intra ou extracellulail"es.
B - LES FONGICIDES NON MET ALLIQUES.
Parm.i Ci';S fongicides,
on F':1-,-t .cetcnir c3sentiellenlënt Jes sulfures
Des trava1.L'( efieetuéspar B YRDE et coll.
(1956) ont clérnon~:n~ e:llectivement
que les sulfures inhibent tr?~s fortellle:.t les enzymes renierrnant des ion::; Fe
a ve c une production concon1itante dl hl'clro gèrle :3 uHuré. On c oniprend alors
aiséll'.cnt l'effet des sulfures sur ces enzymes qlland on sait que l'acide sul-
Fhydrique 5, en soi, peut cornplexer, à ba s se concentration le fer de Ph ème
nu cytoclnome C.
La V" :"l1letioil r:,~ cet acick da.ns le rnilieu à partir de la
chaiE: respiratoire poul"l"éèit donc e:<:pliq1j{~1" la toxicité des sulfures, malS
OWENS (1 <:160) pense que si.multanément à. la production d'acide sulf!.l'/drique,
il y a libération de radicaux libres de sulfure:3 qui scraie 'lt égalen1c::nt L-ès
toxiques.
II - LES FONGICIDES ORGANIQUES.
A.
LES DITHIOCARBA2vlATES.
Dans les fongicides organiqLtes, les dérivés dp. l'acide dithiocar-
banüque sont les plus utiEs(~s et par conséqup.nt les plus 12.rgeulcnt étudiés.
On en distingue deux groupes:
1) L "s
e
d:_l'r··l(1·~L1'1·OC::l·-·I·)-,,,···j-,,s
.1C:...1J.'-. t ..... ....l- ,L,1..1_
c .... J..
C-J..J._c__ t...
qui constituent :e group~·DDC.
2) et les éthvlène:î...JJisdithiocaè·hama.tes, 1J2.. sés SUi' les sels de sodiUlu et qt:i
forment le .~roupe nabame.

---

? '
-
Lt...
-
1) Le groupe DDC.
Les fongicidcs les plus i:ctifs de ce groupe semblent être les dé-
rivés du méthyL:unine ; ce sont des diméthyldithiocarbélmate s de sodiun1. ou
N2.-DDC.
Leurs sels ferrique ct zÜlcique sont appcL~s respectivèlnent le fer-
bam.cet le zirarr,e. Dans ce groupe, il faut ég21en1e~1t inclure le disuHure de
tétraméthylthiurame (ou thirilme), produit d!oxydation du NaDDC.
Selon KLOFPING (I951), les fongicides du groupe NaDDC ag1-
raient très probablenîent par intcrféreuce avec certains processus d'3.ssim.ila-
tian et que les ions dithiocarG<.u:n.ates :sel'aient surtout responsables de cette
toxicité.
D!autreS auteurs (OWEi\\;S 1960, CEEl'URKA 1956) ont constaté
qt'.e les fongicid0s DDC illlübcnt essentidlen1.ent les enzymes reilfernl2.nt des
c;l-oupcments NH
et SE et de s ions Fe et Cu,
dans leur s sit s a etifs.
Il s con-
2
chIent que ces fongicides agissent prÉférentiellenlent sur l'hexose -m.Ol'.ophos-
phate de la voie oxydative du m.étaholî.snl.e des hydrates de carbone.
Les fongicides de ce gTour;e
lnanifc stent leur toxicité pa r deux
veles essentielles
a) inactivation d(~s enzyrnes renfermant les groupl~n1.ents SB dans
leurs sites actifs, telles que les de shydrogéna.ses.
b) fon-nation de liaisons avec certains rnétal.Lx essentiels à llac-
ti'lité des phénol2.ses et des aconitases.
2) Le grml.p~ nabanle.
DH,{Ol\\iTI et coll.
(1.943), ont les pl'el1l1ers, rapporté la toxicité
du nabiln1.e.
L'action llo,:.:ive de r:e fongicide sc manifesterait essentiellcrr:ent
par fonnatiOll de cOlnple:<:es au dépens des ions métalliques indispensables et
par la libél":ltion cl1hydrogèll.e sulfuré toxique,

---

- 23 -
B - LES (2TJI?'-IONE5.
Les fongic~!.des d1..1 g:"c!Llpe (les ql1:-~lolle5 SO;l.t très :ilornbretLX, m~is
très peu SOllt cfficaC2S.
~~~..l cou.rs è.e ses recllèl"clles sur les ..fongicides ,
OV1ENS (1960) a ITlOutl"é que les quinones avaic!lt égalernent Wle action très
sigcüùc2.tif dans la conclu.sion d!O\\:;E;:~S. c'cst Le fait que cC'daines suGst2.nces
corn.rile le 2. - nl~thy.\\. - l - 4 napht8cluinone se soient signal(~cs par leur action
fongicide accentuée alors CluIappa::.-en"l:C:l<~,"tdles n'ont aucun effet sur les enzy-
mes.
lvlais,
cbns l'clès,-::mDl,c; tOlites les ri:;cherches rêconnaisscnt l'int,:;rférence
des conlposés quinGniques Q.-,·cc la phosphorylation, l'é;[ficiencc des'rleshydro-
ITJ.C A.
C - COivlPOSES J:-LSTERCC -"{CLIQUES .'À.ZüTES.
Ces
sh:ucture chirnique très 'ioisi.nc, r:.-:;:;..is cette siUlilitucie ne pern"1et pas de pré-
S1.1111er de leurs efiers n;spectifs.
Cert;}in:, con~lnlf~ le nîtl'opYJ_'azole se cal"ac-
gl,/ocliae, l'oxine et le CnFt:3.nc sc ll12..l1if"eslcnL par quelques réactions spécifi-
qu~'s avec le scons tit-c.allts cc;.J.l1üair(1 s"
Dans cette classe de: c:ûrcpo:3es, nous avons renlarqllé le thiâ.ben-
èazole ou 2 - (4' thiazolyl) cenzimid'l zole. Cette substanc c,
dIa bord indiquée
comme anthelmintique en cédecine vétél"ilJaire (GUG et CI-IODKIEViICZ, 1963),
cornrn.cnce à attirel· l'attclltiGn Qâ.~1S la llllte CClltre les rl'-oisi~:iS1.1rGs·ena.. limen-
tation.
Malgré le èé'~'d()ppement foudroyaùt des antif.::Jllgiques chimiques
de s)'nt11E.:se, les antibioh('i'.les antiJongiqu,::s ont fait leur aDDa.ciLion ces dernièl"e~
.
" .
,
années, notanU::l(;nt avec la griseolul\\·:'ne. Depeis qu.elques a.rù1ét:;S, leur nOIT1Dre

---

") .,1
-
.... -r
-
ou
se nréiJentc sous fO:':.~n1è dè: pcudre jé.une clair, hygros copique de saveur arnère
.l
et iEüdore. Son activité s!exul·i!i'.è errùnité lnycostatine qui correspond Ilà la
.l
1
plus petite quantité de fongicide qui il1hibe complètenH~nt la croissance d'une
3
souche
de Sa.cchal·omyces ce:cevisi2.<2 dans 1 cnl
de bo~~illon (bns des COEldi-
tions standardisées" (BESSeT et PICOT 1963). Son 2.ctivité se porte eo;sef,-tiel-
ler-nent snr 1eo; rnicroorsanis:cnes de nature iongiqaè et aifecterait surtout le
systèrne respiratoire. Elle inhiberait la respiration endogè21e et l'utilisation
tant aérobie qu'anaércbie du glucose, n'lais ne bloquerait pas la pénétration de
ce sucre dans la cellèüe.
IV - CONCLUSION
Il existe actucUem.è2èt Ln r,ornbre considérable de fongicides (car-
bures, acides gras, cornposés divers); et il ne nous aurait pas été possible
r-JéaIJ.ITIoir.. s, nO"LLS r(~tiJ~ndrons qlle,
COl11lnc
tous les iIlbil)it:~urs,
ces Sul)st.anccs se COlnr)Ol~tc_nt l)rE:sq~e tOlltes de la. rnêr-n~~ nlaniE::.re, soit erl
interférant avec les gl"oupen'.ents SE, NH
ou avec les enzynle~3 à co-facteur
Z
m.étallique,
soit ell agIS sant COrYlIY12
.. des clén3.tul'ant3 protéiques ou CCD1Dle
de simples agents ph:fsiques.
?vI<~is ';'·â.l·es sont les antifongiques qui agissent
suivant un Dèécanisme bien dét8l'lniné.
Le plùs souvent il slagit de plusieurs
actio.i.'ls corYibii1ées. C'est pourquoi, il paraît difficile de parler d 1 irJ1ibition
spéciii(_11~e, bie.rl Qll t u:rl fu:n_[~~cide donné pu.isse rlJ.élniiester quelqllefois et ùans
des conditioI1S pa.rtic\\_tlièT'es~ un.e grallde SI)écificj_té.
Pén ailleur s, on pourrait se dernand;~r sile s phén.omènes d!inhi-
vis à vis des charnpignons.
Dans ce don1aine particulicl: de s fongicidc~3, d'autre s questions

---

?S -
- SUL" une concentl"ation (dose) cùn::3idérée connne il1hi'oitl"ice,
qu.::lle est la {l'action de substance qui participe effectivcm.'2nt
il. l'idübition ?
La l' ,,"pCDse à tU\\Ltes ces questions ccntribucra énorrnément à la
lutte contl"e les rnoisissures.

---

- -;> (-, -
C E"L~ PIT R E
Il
LES IvIETHODES DE DIFFUSI0I'; EN GELOSE ET DE DILUTION EN oo\\HLIEU
LIQUIDE Sl.!'R C ZA?EK-DOX.
l - INTRODTjC l'ION.
A'7ec 18 développernel"lt s:cns c.::;sse croissant des industries ali-
mcntain~s on se heul<e de plus .:;cl plus au problèrr-,e de la consei:vatrcl1 des
pl-oduits sto Ckl5 s.
Da.115 ce:ctair1S dOI·{l.2.ill'_~S et notar!.l.11'1ent ~'t"vec les S-UbStl"3..~S· tellllri-
NIais) CClt,S le cas
--
.
pl"CCï.S
a.l..imentail'C;s, le s préoccu-
ou les responsé'.biLtés qU'ellf;s Clll;û.g,,,nt vi:; ~\\. vis de la santé publiquooc rendent
la question encore plL~s délicate.
actuellement le poid cloucial de CEtte spoliation; oob.. présence de la rr..oisissure
et son t~étabolite essc!ltiel représente!1t de1..L'C cibles de grande actuaJ..ité. Ce
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SUjet a
orül.e _l(~U 3. d.e Ll"èS nOrrWre1.iSeS ëLU es concernant preclsement 111111-.
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lt10n c.:.u CJ1.J.ül.ljlg11on eL ~a ClctO:·:1I1C2.L1on (ji~S p,ooc l..UcS contanll11eS ,BOUTIBON-
NES 1')68, ALLEN et c':11l.
1967 ; AI"lD2_LLLOS.et coll. 1967 ; CIEGLER et
GOLDB ..LATT 1')66; LEE d
coU.
1965; :vL\\NN f'J coll.
1C)67; l'vllYAI<:l et coll.
1966 ; TAUCdl\\;L\\l'\\JN" e':: LEIT51'!El\\oo 1969 . . ).
suooscep-
dIA.
fl2.'.us.
Mais la multitude des pl"épara-

---

- 2. 7 -
.
.
cl
J
/
1·
t ·
lJU.lSSan.t3
contarYll.nan.ts
.ê:3
CtC-11re·.;S
3 ... 1D1.8Il dl.1:eS
En ciiet, les investig2.tions de l2-1:;ol-atoire montrellt qu 1il est
facile d!inhiber le développ'::lncllt è.85 clnm.pignons "in vitrS?", la rnajorité ries
substance s testées ayant un fOuvoü- fongicide et fongi statique plus ou nl0111S
DB.rqué,
reais en pr'1tique, rnalh.c:u'..",:;1.ls8mcnt, onest loin dlattcindn~ les résul-
tZ".ts cscornptés, sudout quand il :;12.git d8 prot~ger dl~S produits r'~gis 1)2.1" des
ilOrr:nes très rigoUl"2Uses.
dc'.1X partie s
1) -
5 ü r la
cl'oissanc e (liA. flavus pzu la rn.éthol:l~ de diffusion.
il l'isoll:'nll~nt st il la deSC1"iption d,c;s moisissures appartenant
aw--~ geiue sA '3pergillus et P'~nicilliuln.
Con"lrne les r'~sultats varient d'ulle sonche à llau:1-e, tous nos
essais d1inhibiticm aussi bien de la pousse que de la toxicogénèse fortent sur
7 souches d10rigiilès diverses afin d!o1Jtenü- des rn.oyennes statistiquerneryc va-

---

TABLEAU
N°
VI.
l='l· 0 dtl cLio ~J.
Déri\\-,és
1
.
Sonche
Origine
1
~jg/l)"
Dra duits.
1
•
"
1
1
1
23
1 Terr c de Sidi Fe rruch (Algé rie)
+
260
1
B T G
1
1
1
,
TO
35
++
10 400
D
T
G
1
1
IvL:d's de Loua};:é (Côte d:lvoire)
39
+
5 200
B
1
1
++
18 200
91
1
B
1
,
1
108
Elevage de Dros onhi12. nl.~~lê.~~~as-i
+
2 600
B T G
1
te r.
1
1
138
Cacab.u.ètes de \\tiJ.nl1L10uth
-
(Caen)
, .
++
20 800
1
B T G
1
,
1
0
r
185
+++
65 OO!J
.u T
u
1
voire).
!
~--~~~~--~~~-~~._~~~-----l------~-~--_._--------~~-
N. B.
- 1) C';'êc> tencu:rs dIélfb.lczÏl:es indj·Ciuées ci-(L~~3S\\lS Sl; 1-'-Lpportel1t à. une
cllltul"i~ d/~ ,:3 jO~lrs 211 ~lll)cs rouJ..J.nts. Le nlilicu fle cuitlll·e d.e
It_~spc';~2,ill;~5._flél'"us,
les r"ilétllodes dicxtract.~o111~t d~ titrage des
2..Îlato::-::ir.l.cs S81"0111: déc}.'"its u.ltéri(;Ul'"en.1e:--t-
+
fJ, i b1 e::'1 el"!t to:<ic 0 g èrle
++
l-[lO~/-::rtllêljlcnt to:x~ic ogène
7'~-~
très Iorti;11'lel1t toxicogè11C.
- - - - - -
II -
MISE EN EVIDENCJ~ DE LiE:?FET II"·TF.J:BITEUR DES SUBSTANCES SUR LA POUSSE
D'ASPERGILLUS FLA VUS PAR LA 2"IETEODE
DE DIFFUSION.

---

- 29 -
A. MILl~U DI;; C ULTURE
Ce 11'lilieu est C011Stitué de la.it en.ticr, 110111ogénéisé,
st,~rilisé
(Elle et Vire) enrichi de crèrne ù'a.îche à raison de 20 '1; (20 g de crème;pour
100 rnl de lait) et du Czapek-Dox 3. J.yuble concent:ratioll de gélose. (1).
,
L·e
/]
i.11.~ .2~ ~1.g e
Cl" 2111.e
est sté~rilisé à 115°C pendant
20 mi::lutes P-t le C z<.:.pek -D?x à 12.0 ~ C p(~nclant 20 rninute s après répartition
des deux rniliclL':. déUiS des tllbes ?.i raison de 10 ml par tube.
B - PREFAIU.'.~TIO!'r DE LA SOLLT1'ION DE STJBSTANCES- TESTS,
Peur les cornposés solides,
nous préparon:3 g(~llél'alenlcnt une
G'l2.ntJ. il s:agit de SUSpf~:'lSionscu de solutÙJllS du cornmerce,
nous les 1.1tiliso::1S d~r2ctcr1l.ent S2r~s st(Sl"ilisCLt.ioll pI":2alable.
D;:ons h~ cas (].-~ SLlbstancêS très peu ~)Qltl~les ou insolubles
cla.ns llea:.'-, EOUS êcYOl1S bit us;:>.ge d1autrcéi solvilnts COll:1YllC l'alcool D"léthyli-
préa.lable et nouS pl";-;EOnS so.~n d1c;.t"[i,;ctucr un t(~st-ténloin av(~c le sol,/ant uni-
quclnent.
(~) - Le Czap'ck-Dox (ë:st le rnilie'l p:céférentlellern.ent utilis-i pour les A.sper-
e 3 t la. su i v::Llte :
- Së.ccl1arose .. -
30 g.
- Chlù,;:-ul"C: d(~ potZlssium., , , 0,5 g
.3 g
S,Llf3.. t<-;, iCl-l-eux , , ..... ''''
0,01 g
l g
Ag:lr_ ,R~ar. . ,
,
15 g.
Eau ois bUée .. , ,
,1 000 ml

---

- 3 û -
C - "0AETHODE DE CULTURE ET LECTURE.
_A..ll :::10rl:~nt de 11eillploi, le lait et le Czapèl-:.-.Dox, pr~alable-
ment chauffés,
sontmélangés à. raison de la rnl de Lût IJCHlr 10 ml de Czapek,
dans une boîte de Pétri plastique et stérile de 90 lTIT::.l. conten2.nt l n:Ü d'une
te~1Uè par sinl.ple. lessi\\'a.ge d!tll:e cult1~re de S jours à la. sUl~fê.ce dr'Lllle gélose
additionnée de 0, l '10 0 d/~ triton X 1.00 (Ets T01JZ~~.RT et ,'vL"-.TIGNOI"T). La
7
suspension ai:1si IJl"éparée renf(~::nle en'.:iron 3.10
spores pa}' rli.illilitl:e.
j~ Ijrès b.Oll1.0gé~1éis2.tiollcle llenscr!1ble (lait et c'rènle -+- Czapek-
Dox T l ;,"Ill de suspe':-lsion de spores),
l'lOU::; L''.issons la. gélose
se solidifier
et nous déposons à la surface d,.; celk-ci une pastille de cellulcse stérile de
9 111111.(1) iInprégnée de la solution à tester (solution aque:"1S2 à 5 %) et égout-
té e.
,
-..
f} 01 t·e
~insi
est rnis e à
dtil1cub~tiol1, ?J.Gl1S ûbs~r\\/ons la pr(~fellCe ü111 ;:-;..1JseriCe d'l.lrlC allréo.Le dJinhi-
'
bition autoUl' de la pastille SUiV-<:lllt que la substance testée est active ou non;
réale.
~
D - DISCUSSIOl',rS DE LA lvlE T I-i CI.O E .
Ce~te :-l1éthod:o; avait déjà été utilisé(~ pal" SZABO (1968), meus
et une s por ula tic n particuli è ren>èll t lu~·:uri;lllt(~.
(1) - Ce~ pastilles sont fournies par les Ets ':Filtres GAUTHIER, (65, ruc
des Coqueti.ers à Bobig'lY) Qualité 110, réf.
: R l 593.

---

- 31 -
lvfais, si la méthode est simple, rapide et moins encornbrante,
elle reste sujette à discussions. Le diamètre de Pauréole obtenue est bien
entendu, fonction de Pactivité de la substailce, ITlais comme dans toute ITlé-
thode de diffusion: en gélose, il peut également dépendre de plusieurs autres
facteurs dont la vitesse cle diffusion de la substance, la concentratton de la
suspens ion de spore s et le milieu utilisé.
GAVIN (1957) estime que la valeur des méthodes analytiques
en gélose dépénd surtout des conditions de culture et de la techllicLue employée.
Il cite entre autre parmi les variables
1) L'âge de la cultu re
2) La quantité d'inoculum
3) La température exacte di incubation
4) Le milie u de culture.
5) Le s conditions d'oxygénation
6) La solubilité de la substance dans l'eau.
lvlais, Dl?-lgré le caractère alléatoire de notre test, nous pen-
sons néanmoins à une relation étroite entre les dilnensions des zones d'inhi-
biÙon et le pouvoir fongicide des Sl,lbstances, tant les plus grandes auréoles
correspondent généralem,ent à des cOlnposés reconnus comme les plus agres-
s ifs et toxique s.
E - EXPRESSION DES RESULTATS.
Au cours de nos expériences, nous avons testé 170 substances
diverses.
Mais très peu se sont avérées 'actives Sur le développement d'As
pergillus flavus.:
,",.
-:. . :
Le nombre réduit de 'certains compôs és (o"xydes· et essences)
- -.'. ":-
!le 'no~s pe rrrie:t pa~' d'às s ocier l~aetivité ant,ifoo~lgique à la nature de s substan-
ces; nlais le caractère fongistatique des es'sences nous paraî'l: happant Fa~
,
rapport aux sels
et surtout atLx fongicides etLx -mêmes .. Cependant, à J1excep-
-.- :'- : .....
..
'
; ..
tian de's sels,ita~tivÜé d~;'autres substances n'est" guère , /' 10
b'
, 0
neg 1gea le.
'. "
.0.

---

.
32 :.
. :-
,
TABLEAU
N° .VII
Nature des composés testés et leur pourcentage d'activité.
Nombre de
Pourcentage
Nature des cOlnposés
Nombre
cornposés
des composés
actifs.'
actifs.
Fongicide s
46
18
39, 13
Sels
59
10
16,94
Acides (y cOlnpris les acides gl:as)
25
6
ti4
Oxydes
5
l
20
Essences
10
6
60
Divers (alcools, aldéhydes, etc .... )
25
8
32
TOTAL ...
170
49
29
Dans le tableau VIII, nous donnons la liste de s composés te s-
tés. Le signe (-) correspond à une inhibition nulle.
Les composés pour les-
quels'noüs avons ernployé un sol'/ant autre que l'eau, sont s1.J-ivis du nain du
solvant utilisé
(entre
parenthèses)
Le
sigle DN
signifie un. dé\\Telop-
5
pen~ént'nql,dans toute ia boîte, après ~Cinq jo'urs d'inc:.,batio'n. '.
T A B LE A U
N°V II l
'.
Inhibition de liA spc'igillus flavus par différënts compo sé s chimiques.
1
1
\\ Diamètre de
'Nom dù compos f, 1 .Composition ou constitl!-ants
'1
Pr ésentatiol{
1
;
.
-
.
. .:~ ': -
1
1
l'auréole d'in.
1
actifs.
.; ',.,'
l'
1 hi bition er/mn:;
1 .
1
. i
.
: ". .
l'
.. '.
1
1
1
A.. FONGICIDE~:.\\..1 "~'. :.>'~':' ,'
'. ~'.;,:: .,.'
"
:
.
1
.
"
1
Thiàbendazoie.-.
'./'
2 -( 4' -thiazolyl)behzirrlidazole
Poudre blanchâtr e J
70
.
l , ' ~,.
'.
.
.
,
1
Pimaiicine
',1 Fà'r rri'cl~ brute. C ' H _ NO
.
1
33
,~
.:
Il
1
30
' .
"
' .
.
<
41
14
"
: ..• :..,:.>(,....
(tét'~a~nef "'~:'~ ~
1
é'.:.
"
" . . '.:,.\\
.'.
. ".' ~ ''- '.'
." '.'
'. ~ { ..
.\\
',". " "
. ' .:....
~: 1 :":'--=~~' ..: .:' ;,'.' -: <. ,: .. ' '.'
. '. ;...:
'11
1
Chlorhydroxyquino -
1 ; .. 5,- 7 dichlo~o.8-hydroxyquino-
.11
1
J I ; i np
.
1

---

TABLEAU VIII - (Suite).
1
1
1
. Mycantine
J
Sulfate d1ortho-oxyquinoléine
1 Sohition aq. à ~ %1
65 -
.1
1 · /
1
Mycodécyl
1
1
1
1
Ac. undécylénique : lOg.
1 Solution
1
25
1
Lauro sulionate di:!. triéthanola -'
1
1
1
l
, 1
1
min e
lOg.
1
1
1
Triéthanolamine
13 g.
1
:
1
Glycérine
10 g.
1
1
1
Eau di stillée qsp
100 ml.
1
1
1
1
1
Mycostatine ou
.1
24 d
.
100 000
U/dose
1 S
"
1
1
.
oses:
1
uSpenslOn Jaune
1
15
Nystatine
1
1
1
1
1
1
Fongéryl
1
Ether pentaéthylène glycolique
1 Solution
1
20
1
dichlorocrésol
: 3 10
1
1
\\ . Bromododécyl.din1.éthylcarbc-
1
\\
1
thoxy méthylammonium
: l, 5, '?~ 1
1
.•• ,
1
1
1
Eau distillé~'qsp
: 100 ml. 1
1
Thérops
1
1
1
1
Chiorprothiazole
: 4 g
1 Solution
1
15
1
Ac. SLllicylique
: 2 g
1
1
1
Alcool à 50°
: 100 ml
1
1
1
1
1
Fongibactyl
1
Ac. laurylm.:ypropylaminobut~- 1 Solution
1
18
1
1
1
1
rique
2 g
1
1
1 BE:IlZaL\\:.onium
0, 5 g
1
1
1
1
1
1 Sol. aq. Tampormée
100 g
1
1
1
1
1
1
p_ hydl"oxyphénylsalicylamide
1
\\
la
1
!
1
Gri.séofulvine
1
1
1
1
1
1
Fungizone
1
1
1
1
1 Suspension
1
Thiotox
1
1
1
1 80 '/'0 thirame(disuliure de OlS (
1 Poudre blanche
1
1 dimé~hyl-thiocal'bamate:
:
Me l'coran bouillie
1
1
1
1 1,5 10 de silicate de méthoxy-
1 Poudre mouillable 1
35
1
éthylm.ercure
1
1
1
1
1
Folpet.
1 N -(trid',lorométhylthio) phtali -
: Poudre mouillable 1
1
mide
1
1
1
1
1
Dichloran technique
1 2 - 6 dichlorc-4-nitroaniline
l Poudre
1
uperelgétol
:
52 % dinitro-o-crésol{sel à1arri·- \\ Suspension visq'..leui
15
1 mon(ùm)
.
1 se.
1
i
l
.
1
Cobacui vre
1 50 '10 de cuivre (de Poxysulfate
1Poud:re bru:lâtl'e
1
1
1
1
1 de cui vre)
1 .
_ 1
[
1
1
Dinitro -0 -c ré sol
1
1 Poudre jaune
1
acide.
.
'1
1
'.• '.; " ,
1.
.
\\
. c
:
.
t
1
:: 1
.. , 1
1
Dinitro -0 -c.ré sol : "1
1
., li
. Il
1
40
seldràmm~nium.·.· ·1,·
-
<':.,
~"'-;'l
.:.,. . ,'-,,1'
Elgetive'~~activé
.110'10 D'Noe. +'80 .ih~il~pétr~ie·ls~sp·cns~~n·~erdâ~:.l
25
. ". 1
. ....
.
._.
1t'r e
':"~,,,
. :1. .
1
_- , ' .
1 ....: ... .'
, 1
Melprex '.,:, .
:1 90.'0/0 de doguadin~' (Acétate de:'. :-.J ~ol;~re',,' :
. "'1
'".
' .
;
. .
-... , -l, ·.d~~~cY~lguanidi,ne) ...: . ... t
'. ,\\....
;1 '.
'
.
.= .".
-;. J
, f. •
!
- .
,
1
l ':.' ,

---

""- -.. ~ ".
-
. ,
34 -
TABLEAU VIII - (Suite).
1
1
1
1
1
1
Fluidos oufre
1
99 10 de soudre sublimé (Huent)
IPoudre jaune i}
1
1
1
1
,Il
Perfect
1 95
1
10 de sou:tre trituré (verÙillé) l, Il
J
1
1,
1
Fuclasinultra
1
90 % de zirame (dün:ethyldi-
lPoudre
1
1
thio carbamate zincique)
1
l,
1
\\
1
Arbonèbe
1
80 10 de zinèbe (polymère de N'N'I
"
, éthylène bis (dithio) carbamate
1
l zinciq ue
'1
Il
Rhodianèbe
1
80 % de mal1.èbe[(N 1r,P-éthylène
1
15
,..
_o . ... _
1 bis, dithiocarbamate)manganeuxJ
1
II
Polyram
: 80 10 de méthirarne de zinc (com~
1 plexe du zinèbe et du disulfure
1
1 de polyéthylèGe thiurame a\\Tec~
:
,
8010 dezinèbe,
1
1
1
1
1 •
1
Il
Hexachlorobenzène
1
1
Pern"'.J~anate de po-
\\Liquide
tas s.ium, agricole.
34,5 '10 Mn
Orthocicle 83 RP
83 10 de captan8 (N -(trichloro-
Poudre
méthylthio) cyclohexène dicar-
box Yl:l. ide
Fongiclor
30 10 de q uintoz '\\::ne (pentachlo-
Il
ronitr obenz è,ne).
SOlU5 alèigr an
3,5 10 chloru:;:e de méthoxyéthyl- IPoudre
40
rne l'cure
1
1
Nabasan
27 % nabame (éthyl~ne bis clithi~-: Liquide
33
carban'lat~ de sodium.
1
1
T élone à s oil fumi-
?
'Liquide
1
gant.
1
1
Di-trapex WN - 12
1-3 -did-JoropropE:ne : 48 '70
'Liquide orange
1
1
méthylisothiocyanate : 20 10
1
I
.
Sopraco1781
400 g de dra zoxolon /litred 'H 0
S
1
uspenslOn
"
2
1
'4 -(2 -chlorophé"nylhydrazono)
1
1
3 -méthyl-S isoxazolone
. ' '.
1
'"
"
l
'
Delan-Col
25'0 g
1
ci~ dÙhianon/litre dIH 0
Isusoension
1
•
"
1 (dithia,-l -4 -anthra'c{uinone'
2
l
1
1
1
.r.':;',
,"
1 dicarbonltrile-2 -3).'",
l
,
1
, J'....
1
- . ~ "'-
! ~ ,':'", ' . .
1
StiÜate neutre d1hy- 1
'Poudre mouillable
1
l "
-
.
,1
"
1
"
J
60
droxy 8~. quinoléine 1
1
1
1
..- ';'
1
1
l,
.' ..
'.1
Oxinate' êl~~U:ivre·· 1
;
~ "
"
,
IPoudre mouillable
1
1
1
iH~;ix ':~-:~:;::",,- _" "'<!
1
Il
",'
Il
1
50'10 ~: ':bi'~~pa~r;l (estc~dimé~' '1
..
','
'....
~. ~
l' .', .'-'J".
',-~,~,~,": ~.'."'•• ~,-'
1 thyl ac
~:.. '- .
. '
~yllqU:edu dinit~o -4, ,,'
j ' , "' ' 1 :"',
_-. '.
1 6 s2c-butyl-2-phénol.
1
1

---

- 3.5 -
TABLEAU VIII
(Suite).
1
;?
Karathane -
:25 % de dinocap technique (dini- : Poudremouillable
Itrophényl c.rotonate)
1
1
1
Il
Il
Dithane
:80 10 de mancozèbe (éthylène bis :
1dithiocarbamate complexe du Zn
1
let du Mn).
:
Il
Dac onil 2787
: 27 % têtrachloro -isophtalonitrile l'
"
1
Î
Il
Brestan concentré
160 % de triphényl étain
1
"
1
1
II
Quintozène ou PCNB 1Pentachloronitrobenzène
1
"
.
1
1
Il
Il
Pyracarbolide
ISO 10 de matière active(?)
1
1
1
1
1
l
B - SELS
1
1
1
1
1
1
(
Sels· biliaire s
1Taurocholate + glycocho l.ate
1 Solide
1 •
1
1
1
Sulîate de ba ryum
1
1
"
1
1
Nitrate de bislTIuth
1
1
"
1
/
(nl.l~thanol)
1
1
1
1
Acétate de plomb
1 Cristaux incolores l'
1
1
neutre
1
1
1
1
Chlorhydrate de
1
1
, 1
1
1
phénylhydrazine
1
r
\\
1
Bichromate de po-
Il
56
1
tas siLun
1
1
Acétate de benzoyle
1 Solbtion
42
1
Fluorure de sodium
1 Solide
1
Acétate d lis oamyle
1 Liquide
Sulfite cie sodiUlTI
Solide
Benzoate de'méthyle
Liquide
l
Il
Bisulfite de sodium l
1
.
. " 1
1
II
Chlorure de benzoy~
1
35
. ' .
1
1
le
1
1
1
1
Acétate basique de
1
Suspension
1
25
1
1
plomb.
1
1
' , ( .
.
1
Azothydr â~e de s 0 -: 1- ~ .' ::.,
' .... cDN
1: :',
'·5
;1
dium:
, :
r
.' >
1
..
'~
J
1
-.
"
1
Acéta~e' 'd~ th~lliu~
>
.~ "
11
Il
1
1-,
'.:'
1
. DN
,:J
"
.
5.
.
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. Chromate dé- baryurn..<~· :'. .
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Benzyle benzoate
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36 -
TABLEA U Vin
(Suite).
1
1
1
Sulfate de cuivre
1
1 Solide.
.
1
1
1
1
Acétate de cuivre
1
1
1
"
1
1
1
neutre
1
1
1
.
1
1
1
Chlorure de lantha,
1
1
"
1
1
1
ne
1
1
1
1
1
l'
Ferricyanure de
'!I·
1
1
1
potas siurn
1
\\
1
Thiocyanate d'am-I
1
monlum
1
1
,
1
Nitrate de cobalt
1
!! -Sporulaticn
1
Sulfate d'arnrrLoniu...-nj
l -abondante.
1
1
Hepta molybdate
1
1
Solide
1
1
d'amlTIOniurn
1
1
1
Sulfure d'arnm.oniun~
1
Liquide
1
1
Citrate d'arnrnmiurri
: Solide
1
Pentachlorophéna-!
1 Solide
20
te de sodiurn
1
1
1
1
Acétate de butyle
1
dens ité
0,882
1 Solution
1
1
no rrll.al
1
1
1
1
Acétate d'~thyle
1
dens ité
0,924
1 Liquide
1
1
Sulfure de s éléniun}
2,5 10
i Suspension
'(Selsun)
1
1
1
1
Thiosullate de sa - 1
1
Solide
1
1
dium
1
1
1
f
Il
. CW,orure de baryurp.
1
1
1
Il
Sulfate de zinc
1
1
(Spor.
1
1
abondante).
1
1
1
1
Propionate de so - 1
l'
"
J
diurn.
' 1
,
1
1
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1
1
Propionate de cal-I
1
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1
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1
Il
Chlorure de zinc. 1
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Br·ornure·.de potas-I
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1
1
Ohlorhydr~te de: .. I.
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Iodate de potassiuIll
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Il
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- 3 ï -
TABLEAU
VIII - (SILite).
(1--" ,-,
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1
Solide
1
(alcool
1
1
1
1
Il
Iodure de potassimn
1
rl.êÎ_lt.r e (l\\.lcool ét tl'rl i
1
\\
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1
1
1
1
que)
1
1
1
1
1
1
1
Il
Clnornate de potas -
1
1
1
55
1
SiUTD
1
1
1
1
1
1
1
Il
1
Chlorhydrate de pilé - 1
1
1
1 cvlhvdrazine (alcool
1
1
1
1
/ "
J " ' )
1
1
\\
1
etay lque
:
1
1
1
1
Ac:~Ll;;e de br-ol1zylc
1
1
Liquide
1
15 (SpoJ:.
1
1
1
: ,?bG:ld.:-:ll~t8).
1
1
1
1
1
Solide
1
1
1
Il
Flll()ru·l.·'~ àe bal."yurn
!
1
1
1
1\\
O>:.:ycLlonlloc de CUiVl'~
1
1
!
Il
H·i(!ro~{~:-Ci.llillOlé2.te de 1
i
l5
CU l-.;/r e
1
1
!
1
1
Il
acide de
1
1
1
potas siunl.
1
1
JJ ic tll;7"lb
1
2. 1: Li ttll" a te
1
"
1
1
1
1
"
Il
Nitro -4 -,:;zob""Jl~.:èYle :
cal·bo~·:vle 4 - chlor 1.ael
•
1
ZInc
1
1
1
Il
de SOCÜU1TI
1
1
C - ACIDES
1
1
1
A 'd
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b
,1
_
Cl
e
p -3.11l.1nOI enzoî-I
Solide
i
1
Il
1
Il
p~ sulfanilique
1
1
borique
Il
"
1
1
1
i
salicyliql1 è
Il
"
1
1
1
1
Il
g3.1lique
1
Il
1
1
1
Il
1
fluorhydrique
1
Liquide
1
1
DN,..
1
::>
1
b enz oi'q Be
"
(étha -4
Solide
1
nol) .
1
1
1
1
Il
1
succinique
Il
L
1
1
1
,
Il
1
pic-,:ique
Sel ~~t3.0 r:
1

---

- 38 -
T A.BLSAU
VIII - i\\ Su;->..:-'0)
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1
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1
1
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i AClde sébzcciquë
1
1
Solide
1
1
1
1
Il
DrOD.!.on.io1.1C
1
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L
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0, 996
1
Sol\\ltion
1
1
50
1
1
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1
Il
"/Cl.I_(; rIa n.lq ue
1
Dens ité
0, 960
1
Il
1
1
60
1
1
Il
1
1
soiJil;ue (é'-\\}:.:;
L..l. '._ 'D..'ll
J.
,
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1
,
1
1
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1
j
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oxalique
1
1 Soliclè
1
1
,
1
Il
acotinique
1
1
Il
1
1
1
1
1
Il
1
1
L. glutamique
Il
1
1
1
1
1
Il
1
C2. p:cilique -"or- 1
1
Soll.ttion
1
1
1'n0.l.
1
1
1
1
1
1
1
1
"
b u~:r l~ iCi ue nor -
Il
1
1
1
53
nl.2.1.
1
1
1
1
1
1
1
1
Il
1
"
C:J. pro~:cine nor .-
1
27
1
1
1<'13.1.
1
1
1
1
1
1
Il
iTl~Iri:3tiql.le
1
1
SoLde
1
1
1
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(zl.lcool C)r o \\
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1
1
1
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a l'ê'..C b.idiqLle
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Il
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Il
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bt~}lé niqt~e
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il
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1
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1
1
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1
1
1
Il
1
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Il
1
("lcool 9::i 0)t'
1
1
Il
1)2.J.lIlitj CllJ·e
Il
1
1
(alcool 95 0 )t'
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1
1
1
1
1
iD - OXYDES.
1
- - - - -
1
1
1
1
1
Oxyde cie plomb tecn- 1
! Solide
1
1
:üque (litharge).
1
1
1
1
1
1
1
1
PerlJ..ixyde de benzo y te 1
Il
1
1
/ / L l .
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1
\\ t-:L.ll;'lfl.Ol.
1
1
1
1
1
1
1
Pel'" o:.;,:,/d2
1
d:hyùl"ogè::ncl
SolUtion
1
i
35
110
V.
1
1
1
1
1
1
O:·~)Td8 de cui vr~~
1
1
Solide
1
1
j
1
1
1
1
1
})erox:y-ô.e d8 barY'IEl
1
Il
1
1
1
1
1
1
1
1
E. ESSENCES
1
1
1
1
1
1
Essence de mirbane
1
1 Liq uicle
1
1
30
1
1
1
Il
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1
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Il
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1
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1
Eucalyptol
1
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1
1
1
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1
1
13
1
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1
Il
1
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10
1
1
1
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1
Citrzd
1
20
1
1
1
GOl{une arabique
1
S~_;.S pt::r!.sion ,
1
1
. . . . .
..-
1
1
pll e 111ftII e e
1
1
1
1
1
1
F. DlVERS.
1
1
1
1
i
C I '
1
.1
00 Ll(Je
1
1
1
1
1
1
1
1
drazine
1
1
1
1
Il
1
1
1
1
;)
.Diéthy lrnaJ.on y·lu 14 é:c
1
1
1
1
Il
Cl,10rOll hydraté
1
1
1
1
1
li
1
C llL~ u.:<. soclée
1
1
1
1
C l'C:; :301 pur
1
1
1
\\
1 \\liolct elc rrlôtl1y~le
1
1
1
1
I ~,/
1
l'
l
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1
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i
·S'J11.1tiCIl
DN;-
!
1
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1
i
[ode pur
~)clid8
1
1
B 1'0 tne
1
Liquide
DN;-
1
:J
Allhydl'ide clll'orniquc
1
Soi!ide
70
1
{
1
\\1
Glycel'opllo:;;phatc de
1
sodium (al~ool 90°).
1
1
1
1/
Glycocolle
1
1
Il
_o\\..rnLdopYl· azoline
1
(alcool 95°).
1
1
1
Alcool benzilique
Solution
1
40
1
i
cf naphtol (a.lcGol 95'). 1
i
Solide
lS
,
1
Glyc é::-otr ibutyr ate
1
1
SOlUtjJJll
1
1
1
Diph,inylamine
1
Sc·li.de
10
1
1
(alcool 95°).
1
1
1
1
p -dirn8thy.lamino-
1
1
Il
15
1
1
bSllzaldéhyde
1
1
C=:.lcool 95°).
1
1
1
.1
1
1 ISO.t 'ltj rn1
DI'1

---

T AB LS_:\\U VnI - (Suite).
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1
Dich 101"0 - 2-6
1
Solide
l'
1
1
indopl-:éll01.
1
1
1
1
Il
Créatille
1
1
1
1
Il
1
1
1
1
Il
1
SeL.orriurn pur
1
·1
1
1
1
1
1
1
En raison de b. lOl1~ueèlr du dernier tableau (TabJ.ë;au VIII), nous
ell donrèons un autr~ l'egroupant 1(:5 cornpos\\~s qui nous ont paru intéressants
pell" le'..ll" zone d'inhibition.
IJ. lle s'agit pas d 1une classifi.cation rigou-::euse,
nlais ctlun sirnpl"e résurné du ta.i)leall précédent.
'TA.3LEAU
N°
IX
- - - - - - _ . _ - - - - - -
Diamètr es de S ';:luréole s cl linhibition.
- l-\\zotl~yd.1"at8 (le 30c.lillrll
-Acide Üt'..o:ch"iclr Î.cL'.lP. --
- Ac éta te de thalliuln
- Phénjlhydrazine
- Br Olne .
- Be nzyltncrc2.ptan
- Di-trapex.
2 -
70
à
50
m.,n.
- Thiaber,dazole
Anhyd:cidc c}lronliquc
- l'..ilycantin e
- Phén~.'lhydr::lzine 2..1l
1/2
- Slllf2.té~ neut:ce dlhydro~':!-8-quinoléine
- Acide valérianique no:nnal
- Bichromate de potas SiUM

---

3 -
49
à
20
rnm.
Ac étate de benzcyle
- Alcool benzyLi.que
- Din.itro -0 -cr (~501 (3d Cc 12.i;:l.ffiOlüurn)
- Solusanigran 0
- lvkl'coral1 bouillie
?e l'oxyde cPhyrh:o gè·ne aIL 0 volurne s
- Ciüor;u'c de bcnzoyle
- C:Jlorhyclroxyquirè()l,~~ne
- l'Ja ba s an
"
-
IV[Icodéc yI
- l\\ciè,,:; 50rbiql.:e (eJ, solution 2.1cooli.quc)
pi:';;lt2.chloroph~.:'.atede sodium
,- Cit:i.·2.l
4 -
!nfér ieurs
à 20 mIn
- - - - , - - - - -
- F.)ngi.b3.ctyl
Acide sorb'Lque (en solution aqueuse).'
- Thél'ops
l»
-
Rbodianèbe
- Acét2.te de benzyle
Hydroxyq1J.inoléate de Clllvre.
Es sence de n'lcnthe.

---

_
,1.?
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: :',
-~,
,
.
CiL :.~ ü Tl e 1.1 c l
- C,it2."'otiel1al.
ces
cIe tlo~re ~est
""'1·
.
•
r r e~, lrI1.1nLl.lr C pa 1."' llne
to 1).
antif%JDgiqucs dans une galnrne de pl·od1.üts com.rne celle dont nous disposior
1'·Jéalll-:'r'loi11S J 1101)_5 attendrOlls les résultats (lu titr3. 6 c SUiVZ:ll1t pOUL
nous convaincl'c de la liaison entre l!activité !naté~rialisée par les ;:onC:3
CZ_"~PEK-DOX LIQUIDE.
L,a r~nétllO(~e pal' diffu.sio~ 8n gélose p~r3.11 efficace pour d<Sceler
si une substançe dOn.ll~e a UEC a.r:tion sur la proliif~ration dTA. fla '.'11 S 1 n'lais
elle !1e pennct pa.s èc cOlma~:):e 2.'/,::r: précision la dose inhibitrice. Aussi l
pO'lll"' pJ:éciser C02S (los(~sJ
eJl ce qui ccnceJ.:n.e les SUGstaIlces pr(~~céè.ernrYlent
liquide. C,,,;Uc mi~;:hc(~(' 2. déj\\. été e:'~plorée par BOUTIBONl'·JES (1968),
'.VALÉS et SO\\lERS (1968) et r::;ar STARO~\\r, ALLP_IJ"D et GUC (196 c1:). Ces
del'nie:rs 2:..-:rt8'U.rs or.:.t ut.ilisé le c~~apelc géJ.osé pou;:" .la d.éte:rll:liI1zLtio.n de la

---

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qL:·~.'::·'i8rSen1.e:rl
a - cs~s S1.1.:) CL-LlalCS,
aCIGê
va
l:-rl3.2.'llquc rt~-
d'lit, ?_li contT;cü:r8, la sl')onüation sur 1<1 f:r;'!rl;;(~ de l)ousse.
.
,~
.
(

---

- 4-1 -
doses fon.gicicles et fÛllgista.t.i(lt:.es Sl.1.Y C}l2.C!~]lè (les sept sOllcnes.
i\\ -
T E C l-II',Jl/) Tl E.
Li:; Iyulleu utilisé est le C z2.pek-Dox liquide 211 tube à r2.ison de
9 ~Ll.l ~)2_r tub(=;. NOlls av-ons déj2-. IJ1"8C1Se la compositioll cie Cê lLlilieu.
Les conlposés liquiJes ou JOus Îorn12 de susp3nsions sor,t dilués
diLutions sont efie,:tuéf3S à partir de cL(:ux SOh:~'lOné) 111è.1.-'';s de 5 000 et l OOOfJg
ré'l'
ml.
r~sultélts.
C(~S tubes renfern12.nt cL"5 do:::es croi5santf~s clf~ fongi.cides sont
ene e:::rnenc és avec tl-o LS gouttes d1une suspension de spore s,
S cI11blable à
cdlc utilisét3 lors de la mise crl é-,/idenc,::; de l!(~[fet inhibiteur, La lecture
9 ml de Cza~y:k liq'.lide se,ns fongicide avec l ml d1inocuJ.um.s où le dévelop-
per..."l8nt cl ! ..:.1\\1. •
fle. VI..: ses t
ct c ornrne pl' éc éderr..rnent, la
B - EXPRESSIO>IDES RE.') ULTA TS,

---

CO 11"11l.1. (:: 10..11 ~.::i t oxi~~ li:':: à
'--'
...
;;
E11
2'" 2..1:3 0 Il c],e le"U-r irn. po r ta..r.. r: e
éc 0 r~o 111.icIllC et s 11.1' td li t cl e 1(-:1.11"
- du thia bend2..z ol~
( 10?'::;)
:.. " ,,,/ ... l '
De cett\\~ étude, :10115 avons déduit le tableau XI (rage 47).

---

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~_;l~_~!~_~~_~i..~I_~l__~___~I__
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l'égard des différents fongicides, ce qui rend complèxe l'interprétation de nos
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. résultats. Cependant, à l'examen des tableaèlX X et XL on peut dégager un
certain nombre d' obs erv~tions ':
1 - Il faut d'abord préciser que les chiffres indiqués dans ces tablealL'<: ne re-
pré sentent que des valeurs approximative s. Il nous paraît hasardeux d'affir-
m.er qu'une telle souche est inhibée à telle concentration précise de fongicide.
2 - Nous n'avons pas trouvé de rapport direct entre l'importance des zones
d'inhibition et ).es dos es fongis tatique et fongicide.
Le s subs tance 5 qui engen-
drent les aurécles les plus grandes ou une inhibition totale en boîte d~ Pétri
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ne sont pas néc~ssairementles plus actives par titrage en nülieu liquide. Dans
les cas l,es plus frappants nous pouvons citer par exemple: le sulfat'e neutre
d'hydroxy-8 -quinoléine, l'azothydrate de sodium, l'acétate de thallium et le
/
bichromate de potassium. Inversem.ent, d'autres com.posés comme le driol
GU l'acide sorbique ne donnent qu'une très fÇl.ibleinhibition par la méthode de
difîusioll alors qu'en ffilheu liquide, ils se rnontrellf asse z bons inhibiteurs.
Nous avons essayé d'expliquer ces différences pal- deux types
de phénomènes
a) Influence de la composition des milieux.
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Des essais E::lffectués sur du.Czapek minéral et sur du Czapek
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partie les différènces observées au cours de s' dèlLX titrages.
·.1
La présence de toxine dans le milieu augm~nterait peut être
aussi la sensibilité des souches en modifiant la pénétration de l'antifongique
ce qui peut se confirmer par Pinterférence de la flava~oumarine avec la forma-'
tion de la paroi (: lésions au' niveau de la membrane).
Toujours à propos de l'influence de la composition des milielLxj
on pourrai.t également penser à lrinactivation des groupements actifs de l'anti-
fongique par les protéines du lait (dans la méthode de difiusion).
b) Influence de phénomènes purement mécaniques.
En milieu liquide les spol'es baignent directement dans l'anti-
fongique dès liens emenCelTIent alors qu'en milieu solide les spore s peuvent ge r-
mer légèrement avc.nt1a diffusion de l'antifongique, cela bien sûr en relation
avec la vitesse de diftu::o>n du composé; ce qui. délTIontrerait que la spore a
une sensibilité différente de celle de lIhyphe végétatif.
Par ailleurs, afin de vérifier d'une part, le fondement des dif-
férences observées dans l'activité des fongicides en fonction de la nature des
milieux et dlautre part/la valeur de la méthode des pastilles, nous avons procé-':
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dé à un autre essai. Des titr'ages eIj.inilieu liquide, effectués sur dix composés
reconnus inactifs par le test de sélection ont bien montré qüe ces substances
.' ~vaient un 'pouvoir fongistatique ou fongicide ,pratiquement nul ou en deçà de
la limite d'acti vité décelablé par la' méthode de titrage employée. En effet,
dans tous le s tube s d'ensemencement contenant diHér entes doses d'antifongi-
"que;', le 'développe'nl~nt dTAspergillus flavuss'est avéré aussi intense que
dans ïe's tubes témoins, ; dès le deuxième jour 'd'incubation .
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- le dichloran technique
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- le zirame (Eu da sin ultra)
- le captane (orthocide 83)
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- le fluorure de baryum,
et lIhexachlorobenzène.
Cette expérience nous paraît très confirmative. Elle met non
seulement en valeur le test de sélec tion par la méthode de diffusion, mais elle
dérpontre également la relation entre la fongitoxicité et l'inhibition du dévelop-
pelnent, m.ême si les diamètres des auréoles observées Sur les milieux de
culture ne traduisent toujours exacten"lent Pefficience réelle des composés.
3 - Nous pouvons relever également la différence de sensibilité d'une souche
donnée vis à vis de plusieurs composés; autrement dit, une souche donnie ne
peut être considérée
COlnme sensible à tous les fongicides,
4 - Après cette pl-emière étude, nous constatons l'efficacité particulière du
thiabendazole, du solusailigran et du rhodianèbe sur la pous s'l dtA. flavus et
sur la viabilité de sa spore.
[V - CONCLUSION
De très nombreuses publications font état de P:dficacité de
composés di vers sur la pousse d'Aspergillus, 'fla vus (E L-KHADEM 1968, BAU ~ :
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TE et RICHIR 1966 ; ALLEN et coll. 1967 ; CISEWSKI,
1968; DEVOS et coll.
1968 ; EDWARDS et LATOUCHE 1964 ; FORÇACS et coll, 1'962 ; FREE1v1AN'
et HESSELTINE 1963 ; HUHTANEN et PENSÀCK 1967 ; WOLF et BOBALEK,
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·tant le~c6n:c:'eri't~'afiqnsinhib~tric~s stavère'nt g~né~~l:~~~~t'é~~~ées,::~'e~u~_~e~i,-'l

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cherches, le thia.b~ndazole: exception faite de quelques anomalies, semble
pr~'senter le spectre dtaetivité le plus étendu. Les résultats obtenus avec ce
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'-'-' fongicide sont satisfaisants. -Le's effets sur la"v'iabilité des spores ne -sont:-·:·
~ertes .pas très aigus (50 jJ5s/~1) ; rria~s les concentrations fongistatiqués sont
relativement basses. A Pexception de certaines éspèces dtAspergillus (clava-
:·tus, fischeri),
de levures, de 1\\,'fucor et de G~otrichum, ·la concentration inhi~
·bitrice moyenne (fongistatique) que nous avons enregistrée est de Pordre de
3
pg/ml, ce qui nous paraft con"venable pour le traitement des denl'ées ou des
semences.
Ce cornposé, initialement indiqué comme anthclm.intique est
bien connu a,ujourd 'hui comme un inhibiteur du métabolis me fongique. Il affec -.
terait surtout la synthèse protéique chez les chalnpignons microscopiques
(ALLEN et GOTT LIEB 1970 ; ARIES
1965 ; ST ARON et coll.
1964) alors que
son action e st très faible sür la 'c'onsommation des: sucre set sur la respiration
(ALLEN et GOTTLIEB, 1970).
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CHAPITRE
III
EFFETS DE QUELQUES ANTIFONGIQUES SUR LA TOXICOGENESE DE
. L'ASPERGILLUS FLA VUS,
l - INTRODUC l'ION.
La présence de conidies d'Aspergillus flavus dans l'a.ir, dans
le sol et presque dans tous les produits vivriers constitue certainCluent un
danger, mais à l'état potentiel seulement. C'est surtout la germination de ceS
conirliospores jusqu'au stade d'hyphes mycéliens et la sécrétion inllérente de
métabolites par l'appareil végétatif ou sporifère qui menace réellement la
santé de l'homm.e et des animatL"': d'élevage.
On sait que le mycélium végétatif des Aspergillus est capable
d1élaborer un bon nombre de métabolites: Acide kojique, aspergillo marasrr;-
nes, des aflatoxines et des hydrolases dont la takadiastase est l'une des pre-
mière s en date re COEnue.
Mais eh dépit des cas fréquents d'aspergilloses pulmonaires,
les autres métabolites ne représentent qu'un danger relativement insignifiant
par rapport à celui que les aflatoxines sont à. même d'occasionner. Ces der-
.
.
,
nières se sont déjà manifestées à plusieurs, reprises par leur toxicité (ALL-
CROFT et ROBERTS 1968 ; ARMBRECHT et coll. 1965; BLANCO- LOIZELIER
1963 ; BUTLER et BARNES 1963 et 1966 et CARNAGHAN 1965). Cette toxicité
a'déjà fait l'objet" de p1usiéurs expériment~tions (cf notre mémoire de D. È. A.'
de nutrition, 1970). Elle se manifeste surtout pai" de~lésions et des.pertnrba-',
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ti~~s. des {onction~'métaboliques 'du foie. Che~ les animaux, l'anorexie, le
'~âlenÜssernerit de ta croissa~cé c'hez les jèllnes,"là perte de poids,' les trou-'
b1es nerveux et digestifs en sont les principaux symptômes (FEHR 1968) .
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Quant à la sensibilité des différentes espèces 'animales, des "
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léthale ou ~a DL 50, c'est à dire la dose de toxine qui administrée en une seule
fois,- entraînèiamortde 50-10 des arümallx (SCHOENTA.L-19?7; FÉHR 1968;'
BOUDERGUES 1968). 1'.,;fais d'une ma.nière générale/l'effet du toxique reste prin-
cipalement lié à l'âge de l'animal et à la dose administrée.
Devant l'ampleur de ce danger et la fréquence croissante de la
conta,millatïon des alin"1ents par les Aspergillus et notamment par ceux du grou- ~
pe Havus, on cOlup:::cnd l'inquiétude des chercheurs et des nutritionnistes.
Nos es sais nous ont montré le rôle incontestable des fongicide s
dans la protcct ion de s aliments contre ces luicroor ganis mes.
Au cours de ces expériences, nous avons testé 32 substances
antifongiques a parmi celles ayant manifesté un pouvoir fongistatique lors des
essais en diffusion, sur le blocage de la synthèse de la flavrlcoumarine par
Aspergillus flav"Us.
Nous avons utilisé 7 souches d'origines différentes citées pré-
l
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cédcnuuent.
Dans l'ensemble, nou savons constaté une dégradation progres-
sive du taux de flav-acournarine en fonction de la concentration des fongicides.
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II- MILIEUX DE CULTURE ET' CONDITIONS DE PRODUCTION DES FLA VACOUMARINES j~~
Bien que certaines .espè-ces de Penicillium et notamment 'P. pu-
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bertllurn aient manifesté l'habilité à p'rodui~e des flavac-ou!narine~ (ALLEN. ~
~t coll.. 1964), le .~étabolisme de ceS to;~iques reste i 'apanage ~e's' Asp~~gill~s
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La production dans le~ conditions. expérimentales est assez aisée
et les milieux peuvent être extrêmemed variablës:' Les souchesrtoxicogènes
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d'Aspe rgillus produis ent, soit la fla vacoumarine B, s oit les flavacoumarines
...
B et G et,' cette production évolue vers un maximum qui est atteint au.'C envi-
rons du sixièm.e jour ou du septième jour dans les conditions de température et
d'humidité du laboratoire. Ensuite, le taux de toxique diminue dans le milieu .
. S'agirait-il d'une dégradation des aflatoxines par le germe? ALLARD (1965)
estim~ que l'Aspergillus réutiliserait son métabolite quand la source de carbo-
ne stépuise dans le milieu. Chez les souches toxicogènes la production maxi-
male de toxique correspond toujours à une étape de sporulation intense (RA-
MAUT et coll.
1970)/ du moins dans les milielL'C synthétiques liquides,.
Des essais effectués sur des milieux semi -synthétiques divers
n10nt donné que des résultats médiocres,
regroupés dans le tableau XIII.
TABLEAU
N°
XIII
Différents essalS ùe milieux de cultare pour Aspergillus flavus (1).
1
1
NOln da milieu
Source de car- 1 Source d'azote
Autres constituants iPrésence d'ana-
1
bone
1
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toxine.
1
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1
1
1
Phosphate bipotas-
1
1
sique (1):
1
1
Czapek-Dox
Saccharos e ~ 0) 1 Nitrate de so-
Sulfate de magné -
1
: dium (3)
sium (0, 5)
1
+
1
Chlorur e de pota s -
1
1
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1
1
Sulfate ferreux (0,1)1
1
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Maltose'(3,9)
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1 Phosphate bipotas- :
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: (0,Z5)
: sique (1,Z5)
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Glucos e (2)
Asparagine
Phosphate bipota s-
1
+
1
1
1
Amidon de
(0,2) .'
sique (l, 25)
1
1
1
1
1
pomme de
Sul.fate de magné-
1
1 terre (la)
1
sium (0, 75)
1
1
1
1
1
Emerson
Glucose (la)
Extrait de
Chlorure de sodium
+
levures (1)
(2, 5)
Extrd.it de
boeuf (4)
Peptone (4).
Yeast-Glucos e
Glucose (5)
Extrait de -
Phosphate bipotas-
+
Medium
levures (la)
sique (l).
1
1
'1
1
Asthana-
Glucose (5)
Nitrate de
Phosphate ::"~potas­
+
1
1
Hawker
1
potas sium (3,5)
sique (1,75).
l"
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1
SuLfate de magné-
1
1
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sium (0,75).
1
1
1
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1
1
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1
Amidon (1)
Peptone (10)
Phosphate bipotas-
1
+++
1
sique (q.
Dextrine (la) :
Sulfate fer reux
Galactose (1). 1
(0, 01).
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Cependant des' auteurs ont pu m0!1trer sur milie~x synthét~ques.
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co'se et le galactose (}/L'\\TELES et ...<\\DYE>'963 ; D~:\\VIS et coll. 19,67); d'aci-
-des~mlnés comme larnéthionine' ~t l~ gluta'mine (ADYE et MATELÈS 1964),,:.·
èt enfin'de quelques oligo-élément:~.,.te·ls q~e des sels de ~a~n.~siu~,:de fer
et de zinc (DA VIS et coll.
1967).
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Sur de s milieux semi -synthétique s, CODNER et coll. (1963) ont
également mis. en évidence l'effet positif des concentrats de "Corn steep li-
quor" .
Au cours de nos expériences, nous avons utilisé un milieu qui
s'est révélé con1me le meilleur pour la production de flavacoumarin~,s. Il
a été mis au point au laboratoire de Microbiologie de Caen (JACQUET et
BOUTIBONNES 1967) et servait déjà pour la production de flavacoumarines.
Sa composition est la suivante:
lait homogénéisé, stérilisé entier
800 ml
milieu de Czapek-Dox liquide
200 ml
Ce mélange de lait et de Czapek-Dox est enrichi de pâte d'ara-
;
chicie (beurre d1arachide) à raison de 4 g pour 100 ml de lait entier. Lfensem- ~.,
ble est homogénéisé au "turax" 'et stérilisé à ~ 10°C pendant 20 minutes après '1
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, : :
les 'aüa~;~i'ne~"k,"'b ~~. j\\1 a:insi'que' ,::\\'~'.,
queiques' dérivés, Mais ies premières '(B) ~'emblent bien être les ph~s ré-
pand~es e~,~es plu.~ imp~rt<:l:r:,t~s (SCH,OE NT A~ 1967). Plus ieurs ,rr::-ét~odes .
ont été proposées pour le dosage de ces toxiques, mais pournot:!-"e part,
n~u~ ~v~~s~ r'~~~n~:c'el1~'de'J A~Q~~T et ~oll. (i~96:7,{9 6'9', '19 71 ~:..,i9;l b)
pour sa simplicité et sa rapidité.
Ce procédé, basée sur les propriétés mentionnées ci-dessus
utilise la chrom.atographie sur couche mince.
l - Préparation des la n'le s,
Des lames de verre pour observation microsc.opique (26 x 76 mn::
sont irnm.e rgé es verticalernent à Faide d'une pinc e en bois, dans une suspen-
sion de gel de silice G (ST AHL) (1) à 40 10 dans le chloroforme. Les lames
sont ensuite retirées .puis séchées à l'air libre. L'une des faces et les bords
, 1
sont essuyés à Faide dlune raclette de caoutchouc.
'1
2 - Dépôt des gouttes d'extrait chloroformique d'aflatoxines.
.. ~
A llaide dlune rnicropipette, on place 2,5 - 5 ou 10
\\lI des ex-
traits chloroformiqu'es à 7 mm environ du bord inférieur de la lame. Chaque
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chromatographie est réalisée en pré'sence dlun dépôt témoin du mélange B +
G.
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",~",-La lame ainsi préparée est plongée dani' un flacon de Borel con- :>
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'f::,',·· <: ::," '."': teilant 2 ml de mélange, chloroforme-méthànol ~(95: '5). En général les'.ZITÙ ><:?f
Ct}.:·::·, ~i:"<:~;·~';·:,;.,~'~~'~~.i~·~:~Jti~~?'~'~?~~ri~,;i~~~ ~~~e~~~s' ilit'~1~.::i~'·;f~~~:8~'~~~;iiqJ'~~,":~~i~,~r~·~::i~~hi·i~'+':>'l;
~f.".:""
:'~o:-:.;,::.~~::;·~·.~~:/i';;:5~:·::.,~.: ..... ~}.:.-.'.. '.~'~~.:~?;~;,~.::~" '~"o '~:~"~'>~~"":'~'. ';.' : .-. :~...-~.<:'. ,:.'~'.' '... ,. ,,·.···>.7:·
'.'~'.i.·:~·.,. .:o.._\\:~ .~,"r··'<,._.~.o"
::~: . .',:>..~~,
1." r::--':';':':~'/~·'':'''!:' eal~~ati9r':d~;}a çhEomatpgraphie, 'afin d,e' s~~ùr.er lla,t?:10~ph.ère':de.'la cu ve.,,~::~·:,,;
·zi:-.~~: _. ;.0y:;_;: ~'::.~'~'-~ ·1~.~'~~:"?: .~.;: ~.\\~.~"':'~~::;;~ ':1;'.:~~~r1)~!' .... : r'?..-. ~': ~.I ~ R-~·f':<ù.~.~'~', >: ~.- .:: .;.~t ~;~"">~::'(' -i'~:: ;=.:'~.,
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: :·,~'LeflacO'n "cOnténant la lame éstreëouve'ite "'de 'son couvercle' Au 'bout de _;:>:~,('
·: o~f~ '.~~_~~".' ~,~~; .'~~. ;{~~:,:{~:)~~.:~~~;;~?~./~:\\~~!;~';;?~~'?·i;i:i~.t:;~~~:~{\\~!·.; ;.,~:.:,;~_:~o.{'- .;~:_;~>~.;~~,.~~} ~):~..~,:~~:
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Sous la lumière UV, les flavacoumarines B.apparaissent bleu-
violette, le s a fla toxine s G
comme une tache bleu-turquois e. LI aflatoxine M
. se présente sous forme d'un spot de teinte bleu,'
...... -:.
Dans leur publication, JACQUET et coll,
(1969) propo sent 5
types de solvants. Mais dans tous les cas, la différenciation des spots fluo-
rescents e st facile si on se réfère aux Rf des différents tYI"es dtaflatoxines.
Les différents Rf relatifs au."C 5 types de solvants et au.x diffé-
rente s aflatoxine s sont représenté s dans le tableau XIV ci -après.
•
1
TABLEAU
N°
XIV.
Valeurs des Rf des aflatoxines dans divers systèmes de solvants.
(JACQUET et coll., 1969).
1
-,
Valeur
des
Rf
Cuve
1
Systèmes de solvants
1
1
I-F-l-a-v-a-c-o-u-m-a-.:'IF-'-la-v-a-c-o-u-rn-a--'l-F-l-a-v-a-c-o-u-m-a~
1
rine B
1 rine G
1
rine M
1.
1
1
1
1
1
1. Flacon de Borel 1 Ether éthylique (l00)
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1
0,08
1
1
1
11
Il
2.
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5. Bécher 100 ml .: Be?~è~e :-Al<:I:)O~.~e~~.,;::.,.·.:?: , .....0'; 53: ,,' .1 .. ,O~?O_ '. ..\\ 0, 33 ,-··~,.2.5
~l:~i~~~i~:è~{~,l~lj;~G~(,;;~;19:)#é:';ii~·~~..;·;,~i,;1~ttF!6'f~~:I·;.%jrlœ'~:E~: ·'i~k:::t~,,~,,;
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Fig. 2
'Type de chroITlatographie dtùll extràit, chloroformique de
fla v-acournarine (s olvarit chlorof<:>rme-méÜiano195
....
5).:
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successives jusqu'à l'extinction dU ' - spot., On induit alors la qua~ltité de
,
,
toxine en connais sant la'quantité
minimale de fla vacoumarine c'apable de
donner à la lecture sous lumiète U. V.rune fluorescence visible à l'oeil nu.
a) Dans le Cél5 d'analyse de produits solides,'le taux diaflatoxi-
ne par kg est
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_ ,-",[,-x=-=--=-N~x-,l=---::O-=-O-=-O_
A
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IJg/kg de produit
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[
x
N
ou
=
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en ppm
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E= quantité minimale de fla vacoumarine décelable par iluores-
cence en
~g ( -::::- 0,,00065
l-lg).
N = dilution de l'extrait chloroJormique de départ correspondant
à la la..che visible avant l'extinction.
v = volunle déposé sur le chrornatogiamme (en ml)
p = prise d'essai en gramme (généralement 20 g).
b) Pour les dosages en milieux de culture liquides la formule
devient
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N
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---

- 61 -
Dar.. s les tubes de ~.:lit d8 I±, 5 ml, décrits IJrécéd8111rrlcllt, 110US
efiectuons des dilut:o,",s de 10 ell 1(\\ j1.•. squ l :J. la cc·~",c'è.'ntl'ation lninill1.ale de
1
sUDst::cnce c1ésirie, à pa.rLr de dC\\.L:-<: solutions rnèl"(~s de l 000 et 5 000 \\_~g/1Y'jl
Ces solutions rr.t:l'cs ~,ont celles ~,~ilisées éga.lernent pOLU' la détcnnillZ1Lon
de spou '/Olrs fOll,r;S~~~ttiGlle ~t =0n:~·i.cide. Ces tubes :salit <?:!lsc:rnCIlcés avec
-
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1.
'-'
pCIlsion (; ~3t
ccUes clont nOllS .:1\\'O}lS déjà
Ccs ~l..lbl.~S S0Ilt pl.·_~C·2~) d2.11S Ull ZLP1)tiJ... ~.~il ~ tllbes rQ~..llan.ts pour
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(1)
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cuitul"e d2 tISSU'
et a 1l1Cl:':12..l3011- 1la.. r.~a:)le,
et SOl111115 a une rOL3.L10n lCll!..e
Après 3 jours d1iEC<lbation dans Pappareil à tubes rouLlnts,
nous notons par 1.è sigle DN, 1,-::s cf)ncent1-ations auxquelles le développement!
et la digestion du 12.it sont nuls.
Les autres tubes sont Stél'ilisés à l'aè'.to-
clave à lZO°C pe,:dant 20 rflinutes pour tuer les,spores.
Le mycélium est
décollé des parois ciu tube d
dilac~ré grossièren'lent avec un cl'ochet rrlétal-
lique.
L(-~s tubes l-.:;çoi'.-ent 2.lers 2 g de 52.0],'; de Fontainebleau et 15 rnl de
chlOl"ofoi.'rne" Ils sont ensuite bouchés hel"métiquement à l:aide
d lun bou-
chon de liège m2.intf;nu pal' du ruban adhés if, et plac és da ns llagiteur BT L
où ils subissent ur,e agitation const2.nte et rapide pendant 40 rninutes. Le
contenu des tubes con'lplèteiTIent trituré grâce au sable de Fontaineble2.u est
ü1tl'(~e sur du 5uL2.te de sodiurn anhydre. Dans le;; cas des souches peu
(1) - F. IrnbcrL 85, Faubo'll"g Saint lVlartin'- 7S - Paris.

---

- 62 -
protéo.lytiqucs
l!;).git~~tiùll cond;...~it 3. Ullè bOllillie épaisse difiiciler11ènt iiltl·2.-
J
ole. Une Cé;ntl-ifugat:.,:;n?:3 000 ~OUl'S / m.inute
p8~'ldant 15 nÙllutes '2St ::LI01'S
néces saire pOUl" 0 bte nil' Ul1 filtrat lirr.picle. L lextl':=üt c hloroiornüq 1.1e ainsi
obtenu est éV2.?oré .3GUS '"ride.
Le r(;sidu est dissOtlS dans 1 nù d'3 chlOl'ofor-
D2.r dl-
'-
d(~ tl'avail r;t nota]-C'.D:'é:Ilt le rnilicu au lait utilisf; ne nous ont pas pernEs de
ÏOllgic :tl2 s.
1~t~3 fla \\:-1.1S ct Stl r lcn.l
/
.
.) ~..:; c J. :Ci a 11 S
m.élange chlora fOL-rle -m.éthanol (9S : 5), rnai S lnigr ant avec l !éthe r éthylique.
En 1'ai5·.)1l du 110l'nbl'e de substances à tester, nous avons dû
tr<l'failler quelq,-~.efois 'lVCC des souches repiqué,~s plu:3ieurs fois,
l'nais r;ous
n!a"ions relevé aucun.e différence co".. ~,-,é.btive à la fl'êquence de rel)iquage,
dans le pouvoir de toxicog~nèse dl-:s ~ouches.
.!
Avec tous les ccrnposés, nous avons observéjà llexception de
Cjuelques [l·.lctuaticns, l'.ne din:lÏnution progressive du taux d1aflatoxine en
t'onction d2s concent:-éitions de fongicides.

---

Essai Ô.2 bl<;cage c:c la
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di8estion du la.~t n ~_ll s .

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et coll. (1968), ·DETROY. et HESS,ELTINE (1969)1 et surtout alL"'e conclusions,
de DA VIS et DIENER (1965) qui ont obseryé une régression identique du
taux de toxique avec Pacide benzotque, le sulfite de potassimu et le fluorure
de potas sium.
Par contr,e, nous n'avons relevé aucune action particulière
des composés comlne Pacide propionique ou l'acide sorbique, contrairement
aux conclusions de POISSON et CAHAGNIER (1972) et WALLHAEUSSER et
LU EC K (1970)~ Ce. n'est qu Jaux concentrations de l to~dre de 1000 et 100 \\-lg/
ml que nous constatons l'effet inhibiteur de ce s deux campo sés sur la crois-
sance d'Aspergillus flavus ou sur sa toxicogénèse.
Les figures 3 a et 3 b représentent les résultats relatifs à la
souche 28 alors que
4 a et 4 b concernent la souche 138. C es deux souche s
se sont a vér ée s re specti vement cornme de s souche s faiblement et fortement
productrices de: toxique. Ces gr2.phiques ne renferment pas toutes les subs-
tances que nous avons testées, mais uniquement celles qui nous ont semblé
avoir W1e action plus marquée sur la toxicogénèse d'Aspergillus fla'ms.
A l'examen de ces graphiques, on peut faire un certain nom-
bre dt obs ervations à propo s du comportement des souche s 28 et 138 vis à
vis des fongicides représentés.
1 -'Souche 138 (fortement productrice); figur'es4a et 4b.
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ne sur l3.. souche 138, il affecte très fa rten,ent la sO"lche 23 avec une prod.uc-
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certains composés
paraissent plutôt iEdc:irc la to:.;:ico~énèse. A cc rH'opos, nous pouvons noter
le thiabendazole et la pirHë.ri<.ine
avec Les sOLches 28, 89,
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et 1013 qui
se D;".raît olus s.~nsi:)le à fortes doses que le lJouvoir a,~rD:ünë.ti.f·, par contre, i[
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les souches très fortem.ent productrices cornrne 1.:;s souches 133 et 185 ma-
nifestcnt une gr::;.ncl,:; s8nsibilit(; de dévclopp·;:-ner,t). <.1",s concentrations de
est nul. Au..'< concentl·L'..tioES suivéJ.ntes, la Dl'oduction d!afl;üoxinc est faible

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Aux fortes concentrations de thiabendazole, de pimaricine, de
chlorhydroxyquinoléine, de mycodécyl, de bichromate de potas sium, de chro-'
mate de potassium, d'anhydride chromique et de diphénylamine; par exemple,:
la s~uche 23 se développe et digère 1l~ lait, mais sans production d'aflatoxine.
Ce comportement s'observe également chez la souche 108 avec d'autres com-
posés. Par contre, on trouve chez les souches fortement product'rices, un
développement mù à ces concentrations élevées de s fongicides cités précé-
demment.
.
,
3 - Dans certains cas qUl ne sont sans doute pas liés à la toxicogénèse, la
prolifération d'Aspergillus et la digestion du lait ne sont pas nécessairement
accompagnées de la présence d1aflatoxine dans le milieu. Cette constatation
est illustrée par toutes les concentrations Otl la production est nulle dans le
tableau XV, puisqu'~'ces con.centrations, mal.grél'absence de toxique le dé-
,veloppem,ent et la digestion du lait étaient aussi intenses qu'aux autres concen-'
trations.
4 - Nous avons constaté égale ment un développement et une production de
toxique à des doses supérieures ("doses subléthales " ) aux doses fongistati-
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Si nous nous référons au,. tableau X, nous constatons qu'avec
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le thiabendaz'ole pàr exemp~e, ia dose fongistatique se situe entre 0,5 et ':
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~atoxine à d~s doses bien supérieures à 10 J-lg/ml. On retrouve ;nême d~s
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fongicide d~ 'thiab~ndé!-zole (28,'91 et 138). Nous avons:att;ibué ce faità "la
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1) Actifs sur le développement de l'Aspergillus flavus (1)
Thiabendazole
Solusanigran
Rhodianèbe
Chromate de potassiurn
Anhydride chromique
- Nabasan (Nabame).
Sulfate neutre d'hydroxy-8 -quinoléine
- Mercoran bouillie
Chlor hydroxyq uinoléine
- Bichrom.a.te de potas sium
c:( naphtol
2) Actifs sur la voie de synthèse des flavacoumarines"et sur le
développement d lAs pel' giHus .fla v-us. (2).
Sulfate neutre d'hydroxy-8 -quinoléine
Azothydrate de sodium
- Anhydride chromique
- Ac éta te de thallium
Pimaricine
Cert2.ines substances comrne la rnycantine ou le bichromate de
potassium se sont révélés particulièrernent active~ par la méthode de diffusion'
en gélose, mais les dosages en milieu liquidede Czapek-Dox et de l'activité
sur la tox~cogénèse ne leur ont reconnu qu'une fongitoxicité médioc.r~.
.
-
Par ailleurs, d'auhes composés, tels que l'acide fluorhydrique
la phénylh)'~drazine, le brome, le b~nzy1~mercapta~; le di-trapex ou les es sen-
~~s:, ni~nt:p~'Û~~te~'tésr's'~/ 1~ po~sse d'~~pergill'us:fl~~~sainsi
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.;::.'.~'.:.:...... .~ .... ':~'. :; ùil.déve1oppement nuI dans le rn.ilie.~·Jàu,iait"à: un~ doseinférieur~·ou~~ga.-;
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~~)"".e'-'--._?:Lo.::.'....:S"'-"-0-..L:f:.J::.c(J""""../ ml, etc~.e 7:'._~J:~~_Sg'l::'che s au 'mo in5 . . '
. ' .

---

VI - CONCLUSION
PinterférellCC 0. des degrés di,rel"s, des fongicides avec la voie de synthèsp-
des .flavacouIl1ari:les chez les ASi)ergillus du gl"OUpe fla\\'us.
ivl,Üs il est
m.édiaires de l'é12.b'Jriltion de ce tuxique.
D2.!1.::i
l 'EL:ü acT.uel des COllnê!lS Sélnces relative s à 12. phy:oiolo-

---

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DEUXIEME
PAR T lE
LA DECONT AlvlINA TIaN BIOLOGIQUE.
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---

- 33 -
CH_r\\PITRE
l
LE POINT SUR L 1 ETAT DES RECHERCHES_DANS LE DO~vIAINE DE LA
r-c:nt pos s ~ble s
-
p!..·L;'i':::"'11~4 l!,:;~~c::f~:::.Oll (je: ces tC'~"":..:.cluCS dans les a.lill1ents.
- d_é~o=-:ificr J.c~:3 ol:r::'(:;llts COl1ta.1.~l.il1~S e
C-,l:::'l1t ;;.ux r.l.Ct:hcc!c;s de déto:·:iiic:ltion,
n"lêtlgré llintéri?t accru
(p_1IOn y pc:!:te,
~.1.1es llC SQl1t t01JjOUl'S (ll~!2..l1 3ta.cL~ è:·::?l~rin'ler:tal.
i\\l.lj CUl" cllhui, 8n dépit des connaissances acquises sur la natu-
re chi.m~que de ces toxiques, aucune méthode efficace et déùnitive nlest
adoptée.
D<.l!~S cet c:'"{l)osé, nous Cll':/lsageol15 bri.è'f~~l-:e~t les eS5alS dé-
j?:t entrepris clans ce donlz-i.Ïne/ et nous distinguf~l'l)nS la détoxification physi-

---

- 8-1: -
l - DETOXJFICATION PHYS~GUE.
L~s essél.:S ont P01"t~ surtout sur llutilisation de la chaleur,
l'ex.traction par les solvants et sur les r2..cliations.
l - C::'a.leur
Des tc"ltatives div(;:::~3(~S de chauffaGe ont rn.is en évidence la
l rI 1)'
, . ,
" 1 ' "
Il
' t
~
_'-,n':;:
':a.no.lS
(lU en a.tmosl~)!l,:~re lUrnl(1e,
e ~e~, nre:3el1 CUl
•
J . . . ,
...
le tau.::·: de to::"~quc: ':2.r~s lr;s alir:ner:.~s, llapplic:ltion (ilun tel pl"OCeS sus reste
on l:'C i_~. ~ C 011 S t;~. t (::: r 2.2.11 S P ln s ie u l~ S ca. S Ul'..\\3 clj_1TIi.n.l.1 tia 11 c18 la '/a le u r a.lirll C11 tai re
du substrat.
2 - Les radiô.tions.
En ,:;:-:posa.nt des aliments cOï.l.tarninés à. la huuièl"e UV pc;n.dant
1
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.,,"'T-r 1 r
(1 QI l ,
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.p US12'J.l"S :l(;UreS, .: ":'i..i~ -"-'
_ 100, a
Inontre, apr{;,;::>
es te:;ts IJlO ..oglques s'~r
canetons, q1l':; la ;:\\"L:icit,~ n'avait guère disparu.
D'2.'..:tres étuclP.s de ce genre, aussi bien sur les tourteaux.
(!'"1.l\\HY?\\.ELl..OS et coll.
1%7 j BCSE.i\\iBERG 1969 ; WAISS et NABRY VilLEY
(1969) que sur des solutions rIlaEatoxine (FRANK et GRUNEViALD, 1970)
" t '
1
~
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] "
' 1
on
cZÙ.:.cmcfiL prouve, iY'-d .gre que.:.ques r8S11 rats encourageanLs,
pratiquelnent Ï1Yl}?ossible d1utiliser la radiaticn pour détruire les aflatoxines,
tant les doses nécessaü-es sont élevées.

---

- s~
3 - L\\e~-é:::-~:::':;':-, -=:3.,: les solVê'_nts.
-=--'-:~i.l:'S2.t:O!1 des SOlV(l~lts sell.l.tJle être la rI1eilleure \\"O:'è pùSS1-
A'/ec un ='-:::-:>.__ ~ c.e sol-.'a.nts, '/OL5TSR (1966) a. réussi la èétoxiîic:.::'ùn
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de SIX:. 2.
etcoH.·::~·,.
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L:~ctioll Je 1;=;. c»::.h~Llr 0:3t consid~l":lI)ll~rr.ent alnéliol'ée:31 on
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10 1 :-,)
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---

BELL, 19G5) et enfin le p'~rrIlZ'..g2..::J.te de p0tassiunl. (TRACER et STOLOFF
jonction céüalytique de la chaleul" ou de l'humidité.
2) Les 2.lcalis et les acides.
des rnolécrtlt:;s d.i 3. t12.to:~:ines Q1J.2 d 1tllle réactio11 ch.ill.liquc proprer11ent dite.
tiT en
C...;pellCL..'"l11t,
Zti.L:<
Sl~2_tS-·;j(.:.is 1.111 pl·oc,Sdé baSI~ sur l!llLilis~lt~on
1
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.·,··~.·l. ~.'.
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(le:: _ '- "
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_ '"'
ell '/lgl_~e\\..lr (~11 ,,;/ue d2 l~t. d.éc on.tar:rlirl3. tio.tl de la
III - DECCiNT A.''/lIi'fp_ri'lüN BIOLOCIC)UE.
cation.
l'Teus TeyieDÙi'oüS un peu plus longuement sur la question
dans le chapiti'e suiva.nt où elle sr~ra spécialernent traitée.
aux Etats -Unis (20 mars 1972),

---

- 87 -
C ~L\\.. P l '[' R E l l
P01L' ll'-~::,:l' contl'!; la. r:oJ.h:.Lon péll' A, (1a'/11s et centre ses m<~t3.bo-
C21)2.!)le d;C'~ltl'C;14 1~.!"lCGl~-:l~é,;~i~~1.Url J.\\;;~c 12~ sotlc11e to:{iCOg(;r.l:~ Otl de c16gr2..dcr i85
(iq();::\\
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.-! .J
(1')70 d
19'11). Tl·,".·/2.i~~2.rlt S'il" -sO 'iouches rj1actillOrll.ycètcs isolés du lisier et
COllClu à des pos 3ibil.ités dt~ lutte hioIogicl'.lC C011tl"e i~J...
fL1.'1-.,-l~S et de clég rClda.tion
de ses toxiqu\\.3s . .0il3.is, pê.. :C·;Tli tous ces ~Clic.ro()rs2.nisrnes, seul un a.ctinornycète
liée au.:{ cond~.tio:ns dtl :::ilic 1.1. Ils O~lt égalc;ll")ent réussi à isoler LUle b::'lctérie
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J,.
~, Al.~_'_<'.-:. __ on
L)lOJ..og~que.

---

C8lLX de CrEG LER et ccll.
(1966 et 19(8) qui ont tenté par action mic:robiologi-
que,
de transform.er
appellent !lhydl"o;":'idihy[h-o-alL~.toxiDeBIll, et d:2.utre part, de dégradel' purement
et sirnplerne:lt les afb-to:-:incs d~s tOUl"teaèLX et r.otam.lll.ent du lait. Le dernier
Des levures, des l"Il01S1SS'.ll"2S, des b;lctéric-;s, des algues et des
des élfb.toxine:3 dans le lc-..it ;~t d;-;.ns le:,; '~ourtc;ll1.X, ;:nLsc:i bien pê,.r les cellules vi-
vantes '·11.1e par les cellules rnortes.
Deux faits COY":CO\\Lt"(~nt ?1. 12. dis 1)2.r.i.ti.oll des 2.f1atoxines sf.::1on c;ux
der.
annréciab1cs
" ...
d'anatoxines SUL" leur paTois.
COlllrne lli.ndiqucnt le tableau XVI et la figur,,; 5
représèntant re5-
pecti ven"lent les taux d !aIÎatoXil1p.5 dégr2.dé r; s p<:.r rnétabo1.i 51TI8 et de celle s fi.::,::ées
sur les parois b2.ctél"ie:u:.es, la cE:oparition glob,lle du toxique du r-:lilieu est pro-
portionnelle à la concentration.
~'/lais, l,~ fraction rédlcm.ent déoradée décroit
.C)
a""'i8C la concentr2..tioIl ~lors Cille c:ell,~ fi..~:ée S111'" ~cs pa:.~ois
des bact(~rics l-nortes
augmente.
Par exernplè: ·au:.;: fortes concentl"ations d''lflatoxiI?-p-s, on peut cons-
tater qu'une proportio~ éle·vé2 (;st fi...xée sur les p2.1"ois bactériennes.

---

- s. <; -
T ~-'~ BLE A U
N ~
X V l
Aflatoxine B
d~grildé(~ par les cellul~s de F1avobacterium aurantiacUlTI
l
(CIEGLER et coll.
1966).
1
1
Ternps ci j ineu ba - ! Cane ent ration
Nombre d{~ cel- 1
Aflatoxine B
dégradée.
1
1
l
tion
ini fuI ~ en toxine
1ul'2 S par rnl
1
1
Ta.u...'C
PourceEtage
(hcUl"e s)
1
( pg/50 ml).
1
7
1
( x
10 )
1
( ['<:f/
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hOnù
J
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1
1
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1
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1
1
1
1
270
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1
80
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1
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1
100
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1
900
14
)
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1
1
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1
1
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1
1
·14
0
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1
1
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760
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1
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1
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1
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1
1
1
1
1
68
0
1 L100
1
1
270
680
1
200
74
1
S40
600
1
330
61
1
900
170
1
4/!0
49
1
1
5 000
36
1
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1
1
1

---

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~
80
éD C
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- - ' -
•
•
2.
3
4
5
Fig:.
5 -
Fi.x:;ltion d'afbto:·-ine B
par les cellules
de Fla.\\'obacterium
aUl·2.I~tiacum a.utoc;~a·.·,~Js. (CIEGLER et coll.--1.966).

---

pe2"lser que dans ce C2.S, l !a.ugrr'..811Lë..':ion de la toxicité a vec la conc'~lltration
est responsa.bl,-~ de la. din!.Ïnutior'. dL, (.2.U:': de dégr2.c1a.tion. La iix2.tion du toxi.que
SUL' les pa.rois b2.ctériel1nes intervient dOLIC pour une grande partie dans la
Pour lel d(~toxific2.tior'.-l2 d.en:;:ée3 licluidcs con'lrne le lait, on peu.t cspén~r ob-
NéJ..nr.-:.oi'.'..s, à la l'...;:r;ü:-::l"e des travau~ de CIEGLE:\\. 0;1: coll. (1966
sion de CIEGLER ,~t coLl. (1 ~66 et lfji):3), il est tout lieu de penser qu'i.ln.e solu-
DE DETO~GFICATIONPAR
l
- Isoler é'!ent,-,elL::::>~:,t des or;SJ.nisrnes biologiquern.=:nt ,lctifs sur le dé'7elop-
pement d 1i\\spe1'2ill',-s fla. 'lUS , soit pa.r silnple cornpétition pour le substr2.t
ou pOUL' l' csp"'.ce, s oit pa. r élabûl'ation d !un.e subs tance toxique pour .P... fla vus
cum rapPol-tée p2.l" CIEGLER et coll.
(1966 et 1968),

---

- 92 -
VELOPPE;'ilS 0IT D'ASPE:S.GILL~;S .FLA VUS.
Plusieurs nùcl'oorganisr::es ont été testés 3. cette fin.
Nous
rappQl~tOYlS ci-après la CQEG"llite des e:':périellces et les résu.ltats. Nous a\\"O~_lS
ernployé la rnéthocie des pastüles ~;t la souche N° 55, d.écrites dans b
prerniè-
re p2.rtie de ce ~2.. av2.il.
1 - Des ');,-sti~lcs de cë'J.Llose (1) or:t 2té ;nl.bibécs de cl'uatL';:; extraits éthérés
L
.
Après c':'nq jour:3 à 1incuo2.tioil, le dévclopp::rnent de l'.r_sp,,,r,c:illus
l'cau, les résuJ.taLs so~,t identiques.
2 - Des essais sembbbles eifc:ctués avec des ext:caits bruts de CUltUl"C d'As-
pt->.r~illus parasiti.cus;de diverses espèces de P'~nicilliurn, de levul'es/ de ~",1u-
~or, de C2J.c:Ecb et dt':: Ceotl·ichu'-.l. nIant èonn~ a.Jcun résu1ta.t notable.
3 - Nous a'/ons ég3.1cn~,:o!:t testé des zcrnll'Os anaérobies tels que
- Clostri..dium butyricurn
(1) - Cf 1ère partie de ce travail.
(2) - Isolée et dénomrn6e ainsi par i\\fons ieur le Profes seul' J i\\C QUET et pal'
~vlons ieur B üUTIBONHES.

---

Clostridium caprorcum
. ,
Clostridium sporogenes
Clostridium histolyticum
et Plectridinm tetani
Les cultures réalisées en milieu anaérobie sur bouillon VF ont
été filtrées sur bougie et les extraits concentrés ont été mis en contact avec
une culture d'A.
flavus.
Nous ntavons constaté aucun effet inhibiteur.
4 - Sur dix souches d'actinomycètes isolées des terres du Sénégal, de1.L"'C seu-
lement ont donné une faible auréole d'inhibition.
Les actinomycètes étaient repiquées SUL" du C zapek d'une part,
et d'autre part, sur du milieu au malt. Quàtre jours plus tard, les boites fu-
rent ensem,encées avec une suspension drA.
flavus tout autour des colonies
d'adinomycètes.
Nous avons repris les opérations avec des extraits aqueux de
ce s actinomyc ète s en utilisant comme pr éc éclernment la méthode aux pas tilles.
Les deux
souches qui avaient donné une faihle auréole sur milie1.L"'C gélosés
se comportèrent alo rs indifféremment c omITle les autre s souche s sans action
apparente sur la pousse et sur la sporulation de PAspergillus.
5 - Avec
Flavobacteriuyn aurantiacum, nous avons travaillé avec trois ex-
:
1,
!raits. Sur les trois ~ultutes réalisées, deux ànt été filtrées sur bougie et la
'j11
troisième utilisée brute. Après incubation, aucun effet inhibiteur n'e fut cons-
1
taté avec les trois'extr~its. Dans les bottes 'de Pétri contenant des pastilles
,1
ïITlprégnées de filtrats, nous, avons plutêlt observé une sporulation 'intense au-
tü\\u'des pa stille s,' contrairement aux témoins .
. ,.:
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'....
Dès lors, n,ous .pouvons penser, en 'dépit du po~voir de détoxifi-
'. ' .
cation du Flavobacterium que ~elui-ci nta,él:ucun effet sur le développement.
:. d'Aspergillus' fiavlis aussi bIen par compétition dire~te que par pélabo,ration
.
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J
Nous avons ainsi réaiisé plu~ieurs'a~,âr~~ tentaÙve'~ s~~ diverse~'j1
bactéries isolées au cours' de nos dif~ér,entes :ina~ipulations d'isolement ou de
i
.....
1
re~iquage. Mais ,'nous ne 'voyons pas 'l'intérh de'le~ra.pporter'tout.e's ici d'aù-;
'ta:nt pius que nous n'avons pas réussi à isolle~ un'~i~~oorganisme nousper-
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mettant dTatteindre notre but..
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l."'
.
Ces résultats' ne font que confirmer une fois de plus les difiicul-
tés de lutte 'contre A. flavus J ce 'dont n~'u~ nous sommes rendus compte lors
de l'étude des fongicides organiques, mais à un d~gré bien moindre.
B - ETUDE DE LA FACULTE DE DETOXIFICATION DU FLA VOBACTERIUM
AURANTIACUM.
1 - Origine de la souche de Fla'lobacteriurn aurantiacUlTI utilisée.
.;
;
La souche que nous avons utilisée nous a été fournie sous forme
,
lyophilisée par M. le Professeur JACQUET
elle p(.=-':~ lé numéro B. 134 et
1
provient d'une collection américaine,
11
2 - Description de la souche.
Elle avait déjà été décrite par CIEGLER et coll, (1966) assez
brièvement cOl~nme un b2:tonnet de 2,81-!
sur 0,9, non mobile, sans flagelles
et présentant une réaction n~gative à la coloration de Gram. Sür le milieu
:' tryptone -glucose - extrait de levure, dit milieu TGY (l), il donne des colonies 1
l
ovale s, brillante 5 ef; oranges. C le st un germe aérobie et se développant très
J
bien aux environs de 25°C,la'pousse étant très faible à 37°,C.
1
ll
, . (1) L~ milie~ ~6riginel pro'p~s é par les a~ tèu'r~ à 13. co'mposition sui";'a~te
"
,.~ Bactotryptone .. : . :'. '.... , ., ~ "~'.. 2,,5, g . , :/::"
. "- G l1l.c 0 se, .' ~-.... ;,:; ... '. .: .'- -.. .'. \\.; . .' lOg '.
: ~'~ E~trait de lev~r.e '. ',' ...". '-.'. '.. :' '2,5 g
... ' ,J
. '- k'2 ,H PO4 '. . . . . . .. . . . ~ ." . .' .. ~.
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10'00 ml.'-<, , .-, ',.. '<.>:. ~,:':"j
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---

Fhoto
2
Une c':lture de 3 jo,n"s
o
Photo 3
de ?lavobacteriurù ài~l"anti2.C'.2n.1. sur
tronique (x
18 000).

---

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En plus des caractères indiqués par CIEGLERy~t coîl.· (1. 966),
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nous avons déterminé plusieurs autres propriétés de .çe ger~~ et .?otamment ,
l~s,p rop'r'~ét'é'~ 'e~zy~tiq~e~: ~o~~ la clart'é~d'~;iot~;~;o~xposénq_~'~ 'd'onnons'
-
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'ci":'après un 'tableau général regroupant tes principaux caractères 'de ~e germe.;
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'TABLEAU
N°·XVII
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Principau.'C caractères du Flavo bacterium aurantiacum.
; action négative
action positive.
Caractère étudié
, 1'1ilieu -
Méthode
Résultat.
1
Mobilité (CIEGLER et coll.1966)
Coloration de Gram (CIEGLER et
1
coll. 1966)
TeITlpérature optimale (CIEGLER
et coll. 1966).
1
1
Indole
Eau peptonée - Erlich-Kovacs
1
. ~
1
1
Hydrogène sulfuré
Eau peptonée
- Papier sous-
1
1
ac êta te de pom b
1
1
Gélatinase
Géla tine nutritive à 20 oC
1
1
Caséinase
Gélose caséine pour Bacillus
1
1
Nitrate - réductas e
1
B ouillon -nitra te
1
Uréase' ,
, Fergu!iSlon
1
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"(
Désaminase .'
Bouillon nutritifordinalre: '~ '.
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1
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papier'tournes'ol rouge':
.
Amylase
'Bouillon nutritif -amidon de
1
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1
pomm.e de terre
.,
1
1
1
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Lécithinàse
Gélose ordinaire + jaune d'oeuf 1
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Il
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Lipase
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1.
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Catalase
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'Oxydase'
. Papier Watman impr~gné de
1
N -p.,.phényl~ne diamin'e '
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rieux
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TABLEAU XVII
(S~ite)." .
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1
Hémolysine
Sang de mouton
. 'II .t;"
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Pouvoir pathogène expérimen-
Une injection s/cutanée de 1 ml 1;;.'
. d 1une suspension de FI. auran-
'1 ,~~.
tal (PPE) . .
tiacum
(2.10 8 cellules /ml)
1
- cultures de 7 et 34 jours' ,/.
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"
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1
Caractère de pigmen'tation
Pomme de terre glycérinée
. 1
(Gessard).
1
1
Développement sur milieu de
Dubos
: très faible
1
Il
Il
Il
Jensen
1
+
"
1
Action sur serum coagulé
Loefi1er
1
1
Sensibilité au chlorure de scdiurn
lvIilieu H ponr streptocoques lac _1
l
1
tiques
1
1
- lac to se. _
0 , 5
2 'ta
10 1 Déve10ppemErt
- tryptone Difco
0,5 'ta \\
..
1
3 10
- Extrait Viande Difco . . . . 0,3 '701 Développement:
4 "/0
- pH 7,2
1 Dévelop,t:ement'
1
.
6,5 10
+ Solution de chlorure de so-
1 Léveloppement :
dium.
1
i
1
1
Résistance au chauffage
1
60°C - 30 min.
ID év elo ppe me nt
1
.-
rrn.n.
ID eveloppement
lsans pigmenta-
ition.
t
min.
:0 éveloppement
1
nul.
1
Il
min.
1
1
1
1
1
Sensibilité au thiaberid3.'zole
1 . Milieu tryptone-glucos e
....
-1--
1
1
extrait de levure
'.:'
1
50 000 pg/ml
:
Méthode des pastilles
ID éveloppement
1
1
Sensibilité aux antibiotiques(1)
'Hcatley
1
1
1
.\\
. 1
a) Pastille s Mérieux
1
1
1
l'
Aur~omyci~e (30)' (2)'
1
1
24
.
.
1
1
1
- 1
T~trâcycliiie' (30)
25
1
1
(1 ) Les chiffres de la colonne de droite indiquent les diamètres des auréoles d1inhi-
bition en ITlffi. ,:',,:
.-
(2) Leschiffres entre parenthèses indiquent la charge des disques en o( llg) ou p~u:r:
la pénicilline en U. 1.
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XVII ~,:'.(Suité).
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Chloramphénicol (30)
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1
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Bacitracine
10
(10)
1
1
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1
1
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Colymicine (10)
7
1
1
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1
. 1
Streptomyci~e (10)
J5, 5
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....
-
.-.... ~_. ,.-
.. ,
-.- 1
'-Pénicilline (10)
25, 5
1
1
Erythromycine (1.5)
23
1
1
1
b) Pastille s Institut Pa steur
1
,
1
Erythromycine
24, 5
1
Polymyxine
8, 5
Pénicilline
12
Utilisation du citrate
Simmons
Fe rmentation des sucre s
Eau peptonée supplémentée
Saccharose
en sucre (à 0,5 10)
Glucose
Lactose
3 - La conduite des essais de détoxification par le Flavobacterium aurantiacuITl
Ces essais ont été menés, dlune part, 'sur des tourteaux pol-
lués et dtautre part, en milieu liquide. Aussi bien pour les expériences en mi-
lieu liquide que pour la culture du Flavobacterium aurantiacum, nous avons uti-
lisé le milieu tryptone - glucose - extrait de levure, propos épar CIEGLER et
.coll. ( 1 966)
i
Les tentatives de production de Flav6bacterium aurantiacum
1
en fermenteur slétant avér ées défectueuse s, toutes le sculture s d'e Flavobact'e - 'J
" ' - - - - - - ' - - - - ' - - ,1
.
1
rium aurantiacum" en vue .d1obtention des s~spensions dense.s ont étéréalisée,s '1
dans des fioles de ROlLx ou de Fernbach. Les cultures sont énsuite raclées'
avec des,billes de verre
stériles après addition de 100 ml dteau physiologique,
ce qui nous a permis de disposer de suspensions renfer~~nt ~pprox~rnativement1
8
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·t'
lavé le culot afin d'éliminer les métabolites el repris ce dernier aveC .100 ml
d'eau physiologique."
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-·r:· '.ç:-
a) DétoxificaÜon des tourteaux pollués ..
. ~.. r,\\'
'. ..' ....
. ':. ::.... ~ --. ',' .
.
.
'Des tourtéaux d'arachides conta~inés du Brésil/broyés au
lIWaring blend<:>r ll ,
homogénéisés et titrant 1300
~g de toxique par kilo, ont
été répartis dans des boîtes de Pétri en verre de 120 mm,à raison de 20 g
par boîte,
Les bol'tes sont stérilisées à 120°C pendant 20 minutes et r2parties
en six séries cOlnportant chacune une boîte témoin et une boîte d'expérience,
Les témoins sont humidifiés avec 20 rrù
d'eau distillée stérile et les boîtes
d1expérience avec 15 ml d'eau distillée et 5 ml d'une suspension de Flavobac-
8
terium aurantiacum reniennant environ 2. 10
gern'les par millilitr~ et prove-
nant d!une culture de 3 jours, L'incubation est réalisée à l'obscurité et à g.TC
-
Les
2ème, 4ème, 6ème, 8èlne
10ème et 12ème jours, nous avons procédé
J
-
à l Ianal yse chromatographiqnE:: -:'-::5 dlatoxines re specti vement dans le s séries
Les résultats des analyses figurent dans le tableau XVIII.
Comparativement aux tourteaux témoins, on note une diminu-
tion significative ,du taux d!a±1atoxine dans les tourteaux ensemencés avec le
Flavobacterïu~aurantiacUil'l.
l\\.'1ai q nous ne pouvons consi~érer ce résultat comme con-
c1uant car après douz~ Jairs dIincubatio~ rlOùs r~'trou~ons encore 520' Fg/kg
sur un~ ~:~eur inltia~e de :13 00 iJ,g, soit une destruction de 60 %:
"
• .r.:
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TABLEAU
N°
XVIII
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sée précédemment (environ 2. lq
germes' j ml).
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Parallèlement, nou savons constitué un bécher témoin renfer-
mant également 800 g ~e tourteaux et qui a reçu 2.litres d'eau distillée stérile.
0
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Nous avons abandonné les ode1L~ béchers, soigneusement fermés,
à llobs curité pendant un mois.
Au bout de cette période d'incubation, nous avons recherché
l'aflatoxine dans les deux béchers, après séchage dtune fraction des' tourteaux
à Pétuve à süoe pendant une nuit. Les analyses ont donné les résultats sui-
vants :
TABLEAU
N°
XIX
Dégradation d1aflatoxine dans les tourtea1L~ par le
1
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Fla vobacterium aurantiacum.
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1
1
1
1
oi Teneur initia-\\ TeneUl" après 1 Quantité dé- 1 Pourcentage
1
1
Dés ignation
1 le en afIatoxi- 1 l mois
gradée
dégrada -
1
1 de
1 ne ( pgjkg)
1
IJgjkg)
1
( Vgjkg)
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Tourteaux expérience
1
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1
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1
200
1
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1
1
1
1
1
ToUrteaux térnoins
650
1
600
1
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1
1
1
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1
1
1
1
1
1
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Malgré les proportions de tourteaux ey d~ liji- suspension de
Flavobacteriumo aurantiacurTI, on peut noterde nouveau,'oici une dégradation de
32 10 dtaili.toxine initiale. Conformément a~~ èo~clusioÏis de CIEGLERet coll.
0
(1966) et de RAW~i\\UT ~tcoll. (1970), cOe tauxc~rrespondrairatltoxique~~é~lle~
ment dégrâdé par'les cellules de FlavobaeteriumauranÙacum.
L~ fraction
....
. fixée par les parois des cellul~s mort~s étant restée"°i~taete danos le milieu; a
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bien'été extraite' avec Paflatoxine I)on neutralisée. °Crest pOUrquoi, 'nm.l.5 av'ons
posé la question de P·utiJ.ifé de cette fraction fixée s~r leos parois bactérienlles i
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mettre en évidenc e P élaboration éventuelle p'ar le Fla vobacterium aurantiacum
d1une substance active en pous sant' en pré s~nce d1aflatoxine ou de spore s cl IAs-
pergillus fla:~s:. 'E~~ê~e ~~mp~, nous a vans déte'rminé la 'disparition du
toxique dans le milieu de développement d~ germe.
Sur cinq fiole s de Roux contenant chacun 50 ml de milieu
tryptone - glucose - extrait de levure, nous avons ajouté de s quantités crois-
santes de toxique allant de 20 à 100 ~Lg/ml, dans les 4 premières. pans la
5ème fiole, nous a vans ajouté 4 gouttes d1une suspens ion d' Asper gillus fla vus
(souche N° 55) renfermant environ 16. la 7 spores par ml.
Le témoin est constitué de 50 ml de milieu sans aflatoxine.
nl spores dlAspergillus flavus . Les fioles sont ensemencées avec 4 gouttes
8
(IV) d'une suspension'de Flavobacterium aur~ntiacum (2.10
cellules / ml)
et laissées à l1incubation à Pobscurité pendant trois jours.
Nous avons ensuite
dos é l'aflatoxine dans le s différente s fiole 5 par prélèvernent d'une fraction' ali- .
quote.
Les autres portions du bouillon de culture
sont filtrées sur bougie.
Les filtrats sont évaporés et les résidus repris avec2 ml d1eau distillée sté-
rile. Ces concentrés sont mis en contact avec une souche d'Aspergillus flavus
par la' méthode des disques. Nos résultats sont résumés dans le tableau XX.
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Dans aucun c:as, nous n'avons constaté, ni une inhibition de l'Aspergillus fla-
J
1
vus par les extraits aqueux, ni une disparition de la flavacoumarine dans les
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milieux de culture.
j
J
J\\
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Dans lLlle deuxième expérience';" no'u5 àvons remplacé le
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milieutryptone - glucose- extrait 4e levure par'del'eau.dis!illée, mais ~,::,."
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des quantités décroissantes 'et 'in"';'e;s~m~nt,. nous y ~vons ajo~t'é des vol~mê;
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mis à incuber
en culture stationnaire pendant tr~is joursà -30'o_Cc·e~',àl"~b~c,i·..:·
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Numéros
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1
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1
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1
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1
1
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1
1
1
l
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1
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0
1
...
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1
d'A.flavus)1
1
N.B.
- Les signes(±)et(-)indiquent respectivement une très faible inhibition et une inhi-
bition nulle.
TABLEAU
N°
XXI
Effet du Flavobacterium aur2.ntiacum sur l'aflatoxine dans
l'eau distillée.
1
1
Quantité de sus pen-
Ea u distillée
QU2.ntité de solu-
Teneur en afla-
Numéros 1 sion de Flavobacte-
stérile
tion d'aflatoxine
toxine après in-
des
: rium aurantiacum
(ml)
à 60 pg/ml
cubation.
fioles.
1 (2. -10 8 cellules / ml)
(ml)
1
(ml).
1
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1
1
1
1
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1
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/::.,: :~~~'~~:':t;ouv/~~c'~~'e 'modification dans les tau.."C de toxique après une incuba-
'tis>~ 'dé 3 jours.
' ... '
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Un autre essai de détoxification s'est déroulé comme suit: à
4'70 ml de ~ilieu tryptone - glucose - extrait de levure, contenus dans trois
fioles de Fernbach dont Pun servait de témoin, nous avons additionné 28 ml
..
d'une solution aqueuse dt aflatoxine à 130 !Jg par ml. A la fiole témoin,
nous avons ajouté 2 ml d'eau physiologique et aux deux autres, cleux ml de
suspension de Flavobaeterium aurantiacum sem.blable à celle utilisées dans
les essais précédents, la concentration finale d'aflatoxine étap.t.7,3~g/ml.
Les fioles enrobées dans des sacs plastiques noirs sont soumises à I1agita-
tion mécanique à raison de 90 tours/ minute. Les analyses chromatogra-
phiques d'aflatoxine l-éalisées sur des prélèvements après 48 heures et 3
jours nlont décelé aucune influence du Flavobacterium aurantiacum. snr le
toxique initiale ment pré sent dans le milieu par rapport au térnoin. C epen-
dant, après 12 jours ti'agita.t:iùn, la diminution du taux d t af1atoxine était
sensible, malgré la faible quanÙté de celle-ci
au départ. Mais cette dégra-
dation n'était guère totale car une faible fluorescence à la lumière UV per-
mettait de retrouver des traces de toxique de Pordre de 4 à 5
yg/ml, ce
qui corre spondrait sens iblement au résultat obtenu avec les tourteaux c on-
taminés, après 12 jours d'incuba fion.
Dans un dernier essai réalisé avec le Fla vobacterium aurantia-
cum, nous avons tenté de déterminer la fraction de toxique susceptible de
se fixer sur les parois des cellules mortes du germe. A cet effet, nous
avons mis 150 ml de milieu tryptone - glucose - extrait de l~vure dans 6
fioles coniques de 250 ml. Ces dernières ont reçu en outre, 20 ml d'un~
~.
.'.
'~~iutionaqueuse dtafl?-toxine à 425 p,g/nll. 'Ap~ès stérilisation, nous avons
,réparti les fioles en' 3 séries dont chacùne co~port~it un té~oin et une fiole
.:- .. ' dtexpérie~ce ..~N~uS avons ajouté .dans les ,îioles d'expérience 10 .ml d'une
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cellules par ml, et 10 ml dteau physiologique
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lie~: L~s fiol;son~ été s~umises àllagit~tion mécanique (90 tours /minute)
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et des analys~~ e"fiect~ée's a~rès 24, 48 heures e't 3 jours re spectivement
sur les p~~n~ièr:e":;,s'econ~e "et troisième s~ries, aûssi bien sur les culots
"que" sur les" surnageants, après une "centrifugation dou~e" de' '3 000 tours / mi-
nute.
TABLEAU
N°
XXII
Mise en évidence de la fixation d'aflatoxine par les cellules
morte de Fla vobC'.cterium aurantiacum.
1
1
1
Séries de
1
Temps dragita-
1 Aflatoxine du culot
1
Aflatoxine du sur-
1
1
1
fiole s
(~)
1
tion
1
de c entrifuga tio n
nageant
( pg/ml).
1
1
1
1
1
1
1
1
1
t
E
1
1
0
1
40
l
1
1
1"
1
24 heures
1
1
45
Tl
1
1
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1
1
t
1
1
1
1
1
E
1
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1
1
48 heures
1
1
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1
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1
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1
1
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aflatoxines ).
1
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1
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3
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1
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1
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1
1
A partir de ces résultats," nous avons émis l'hypothèse sui-
vante
Selon CIEGLER et coll. (1966), la fixation du toxique s'effectuerait
"
.
au niveau des parois des cellules mortes.
L'absence d'aflatoxine dans nos
.
.
. -
culots de centrif~gation va à l'encont"re de cette as'sertion et ne pourrait s'ex- .
pliquer que.par,l'inefficacit,é d'absorpti<:>n àe la paroi des cellules jeunes ou
p~r 'une f~ation tr~p faible, non décelabl~ parce"qu"'en deça des limites de
sensIbilité de la méthode. "Un dénombrement de 5 germes revivifia bles aurait
pu élucider c~ p~oblèine'.,'"
.'
' ! .
(:If) La teÏl.eûrinitial~ d'ana'toxine dans les fioies est 47. ~g/~ et:~e';'fioles"
E
ont reçu en outre, la sus pens~on ,dp- Fla vobacternl!TI 2.Ur2.nt~3,cum.

---

1
~b .
III
CONCLUSION
of
Cette première série dlessais n'est pas très probante
ia lecture
de s publications anglosaxone s nous laissant es pér el', quant aux résultats con-
cernant Flavobacterium aurantiacum notam.ment.
lv1ais, malgré lIefficacité
de certains composés chimiques sur la structure des aflatoxines, la décon-
tamination biologique offrirait de meilleure s pas sibilité s de trai tement en
ce qu1elle
ne risque en rien de dégrader l'aliment. pans certaines tentatives,
on a constaté plutôt une augmentation de la digestibilité des protéines.
La
résistance, l'abondante. et facile prolifération de 11 Aspergillus flavus rende pt
les recherches longues et fastidieuses) n_ais nous pensons que le.s données
déjà acquises, bien que fragmentaires,
conduisent
vers une solution pos-
sible du pl' obI ème des aflatoxines.
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TROISIEME
PARTIE
ACTION DU THIABEl'-lTIAZOLE ET DU FLAVOBACTERIUM AURANTIACU~vl
SUR LA CONSERVATION DES ARACHIDES EN TAS ET SUR LA MYCOFLORE
DU SOL.
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- i 08
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En industries alimentaires, il est généralement de règle d'utili-
ser des moyens physiques (réfrigération, co~gélation) ou chimique (emploi des
conservateurs ou d'additifs) pour protéger les denrées périssables, au cours
de leur conservation contre les détériorations biologiques.
L'arachide n'échap-:
pe pas à cette règle surtout depuis l'avènement des aflatoxines.
Les recherches prophylactiques visent à 'prévenir l'installation
du germe s~créteur, par utili sation d'un c ompo sé chimique (antifongique) ou
d'un microorganisme antagoniste, susceptible d 1enlpêche'r, soit la germination
de la spore,
soit l'extention de l'appareil végétatif.
Dans cette étude, nous avons tenté ùe r(~ali ser de s conditions de
stockage des arachides en tas, telles qu'elles sont exposées généralement
dans les champs au moment de la récolte de ees graines. Les conditions de
température .. et d'hur.-:..: -'.;té n:; 30Tlt certainenlcnt pas rigoureusement les mê-
D'leS, mais l'expérience nous a permis de mettre en pratique, dans une mesu-
re très réduite, les résultats que nous avons obtenus précédemment avec:: le
thiabendazole et le Flavobacterium aurantiacum.
CHAPITRE
l
CONSERVATION DES ARACHIDES EN TAS PAR LE TIDABENDAZOLE ET
ETUDE DE LA MYCOFLORE D'UN SOL TRAITE AVEC CE FONGICIDE.
'~ . .
Dans la gamme de fongicides testés au cours de la première par-
tic de ce travail, nous avons rete'nu le thiabendazole pour ses propriét€s
anti-
fongiques certaines vis à vis des souches'toxicogèn.es. En outre, ç'est un com-
posé couranfne présentant aucune tm~icité pour 1.esanim"a,\\.L'C s~périeurspuis'­
qu'il a été employé avec succès et sans contr'e -indication en. médecine vétéri-
naire, notamment comme anthelmintique.
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ETUDÈ DE LA CONS'ERVATION DES ARACHIDÈS PAR LE THIABENDAZOLE.
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1 - Matériel. :,': :~"
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Ter.rines plates garnies de trous dans le fond (fig. 6)
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- Terre du jardin des plantes de Caen, mélangée au sable de
rivière prélevé à la Faculté'des Sciences (Service technique), à raison d'une
partie de terre pour deu.x de sable.
Le mélange ainsi constitué pour imiter
les sols sablonneux des pays arachidiers est arrosé d'une suspension de
7
spores d'Aspergillus flavus (
8.10
spores/ml) (souche N° 185) et l'en-
.
.
"1
'" (1)
semb le IntImement m.e ange
.
- Al'achides crues (2) sans s pores d'Aspergillus fla vus • ni afla-
toxine. et contenant 6 10 d'eau.
(3 )
Thiabendazole sous fornl.e de pOl_~dre blanche
2 - Expérimentation.
Les arachides sont réparties dans cinq terrines plates à raison de
2 kg par te rrine. Les graine s de chaque ter rine sont additionnée s de 500 g.
de mélange de terre ensemencé de spores d'Aspergillus flavus et de 500 ml
d'eau de robinet. L1enseluble est intimement m.élangé de manière à ce que
la te rre enrobe bien le s arachides.
Les cin<i récipi~nts, dont l'un s.ert de témoin, sont disposés sous,l
:i
une hotte munie d1un appnriel de chauffage électrique à ventilation.
Un therr-rwrnètre placé dans' la hotte a permis d'enregistrer
la
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variation de température 'représeJ!tée par. lafigure 7.. '
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Sa~s compter les'auti~s moisissures diverses, le mélange renfermait, ,·1
erivir'élu'3:10 6 spa'ies :'pa~Cgr~mm'e de~t~·l·re."·· '<~:
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(2) - Fournies' par ~~met ,.~ Cognea'u; gr~~netier à Caen.
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- (3) :.. Des Ets 'MERCK SHAR~:et DOMME'''S: A.' ·-'105, route de Beaume à· ... "',:j
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Chenove"(çôte d1qr}.·
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Fig.6 :Te.rrines formes haute et plate
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Variatio~ de 1a}e~pér~ture dans la hoÙe···à~.i.ncubati6n:
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Pendant trente (30) jours, nous avons arrosé le contenu des ter-
rines avec 300 ml d'eau de robinet pour le témoin et de solution de thiaben-
dazole à différentes concentratioI'.spour les terrines dJexpérience. Le tableau
XXIII donne les concentrations de solutions de thiabendazole correspondant
aux terrines.·
TABLEAU
N°
XXIII
Concentration des solutions de thiabendazole utilisées pour
l'arro sage des arachide s des terrines.
Numéros
Liquide d 'ar rosage
Concentration
Quantité par ter rine
des terri-
Ilg jml)
et par jour (ml) .
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T
Eau de robinet
X
300
l
Thiabe·ndazole
5
Il
2
Il
10
Il
3
Il.
20
Il
4
Il
50
Il
3 - Résultats et discussion.
Après 30 jours, nous avons effectué deux types d'analyses
la recherche d'aflatoxine dans les 5 terrines et
l'analyse microbiologique des arachide s.
a) La recherche des aflatoxines.
j
1
"
J
La recherche des aflatoxines dans les arachides traitées a donJ
né une "diminution progressive et nette avec les concentraÜons croissantes.
de thiabenda~ole. Ces résultats_s~nt r.eprésentés par le tableau XXIV et la:
figure 8.
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TABLEAU
N°
XXIV
Régression du taux d'aflatoxine dans les arachides traitées au thiabendazole.
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1
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3 900
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CONtENTRATION
DE THIABENDAZOLE [.ug;MILLILITRE]
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---

- 114 -
,
Au cours de cette expérience, laproduction dl~-natoxine par la
souche N° 185 n 1est pas nulle à 50
f-!g/ml. En effet, en examinant 11 effet
fongistatique et fongicide du thiabendazole sur cette souche, on se rend comp-
te que les doses fongistatique et fongi~ide sont respectivement 5 et 50 f-lg/rnl.
De même, dans l1action de ce fongicide sur la toxicogénèse de
cette souche, le développement et par conséquent la production d1aflatoxine
sont nuls à 20 ~g de thiabendazolepar millilitre;
Nous pouvons donc expliquer la ré sis tance de cette s ouche et
la production de toxique à 50 ~g/ml, par une simple différence de milieu.
Ici le développement et la production d'aflatoxine ont eu lieu sur d~ l'arachi-
de qui est le substrat pélrticuli~rernent indiqué pour Aspergillus flavus, alors
que pour les essais d1inhibition de la pousse et de la toxicogénèse, nous
avons fait usage d'ull milieu minéral et de lait simplement supplémenté av.:;c
4 g de beurre d1arachide pour 100 ml de lait entier.
Par ailleur s, bien que la diminution d'aflatoxine en ionction de
la concentration de thiabendazole soit très apparente dans les deux cas, la
différence entre le fond et la surface peut slexpliquer très aisément. Dans
le fond de s bac s,
le temps d~ contact du fongicide avec les spore s e st plus
élevé car les solutions d'arrosage baignent les spores plus longtemps. En
surface par contre, la solution de fongicide ne fait que laver le8 ,graines qui
,
se déssechent très rapidcr11lnent du fait de la température externe dans la
hotte.
Le fongicide nia donc pas le temps d'atteindre les spores éventuelle-
ment incrustées dins les sillons des coques.
'.
b) Ailalyse microbiologique des' arachides.
Afin de trouver une liaison entre les résultats précédents et
le nombre de spores d'Aspergillus flavus revivifiables, nous avons procédé
à des dénombrements dans les cinq terrines,' aussi bien dans le fond qu'en
surface.
Pour cela, nous avons f'esé 5 g d'arachides entières, grossièrement ~
br?yées, que nous avons mises en suspension dans 50 ml d'eau physiologique
-.

---

- 1 i S -
(à 9 'J'aJ et agitées pendant 10 minutes à llagitateur BTL. A partir de cette
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de la en 10.
Nous reportons ensuite 1 nù de chaque dilution
dans des boites
de Pétri dans lesquelles nouS coulons du C zapek gélos é à 45 oC.
'1
Les résultats illustrés par le tableau XXV montre que la rela-
tion entre le talLx d1aflatoxine et le nombre de spores revivifiables n'est pas
net. Il n'y a pas de correspondance entre ces deux chiffl"es.
Mais, nous ne
devons pas perdre de vue le fait que l'aflatoxine peut persister dans les ali-
ments même après la disparition d2S spores qui l'ont engendrée (JACQUET
et coll. 1971). Par ailleurs, il est intéressant de noter l'abondance de spo-
res sur les arachides de suriace alors que celles du fond des bacs sont en-
vahies par des nlOisissures autres qu,'Aspergillus ilavus.
TABLEAU
N~
XXV
Fréquence des spores d'Aspergi.llus flavus SL..:: '<:s arachides
traitées au thiabendazole.
(Le nombre de colonie.sd!Aspergillus Üavus iTJ.diqué correspond
au g. d1arachide, sans cOlnpter les autres rnoisissures sauf
dans les casoù nous avons noté tout sinlpL~lncnt l'envahissement
des boîtes par des m.ucorales).
1 - - - - - -
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35.10
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1
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1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1 Envahissement 1
1 Boftes enva-
1
4
5
2
FOND
1 des boîte;; p a r :
3.10
20.10
1 hies par des
1
11. 10
1 des mucorales
1
1 ITlucorales.
1
1
1
1
1
1 etpar~ergill
1
1
1 lus niger.
1
1
1
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1
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- 116
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II - ETUDE DE LA MYCOFLORE D'UN SOL TRAITE AVEC LE THL~BENDAZOLE.
l - Ivlatérie1.
- Terrines de forme haute (fig. 6).
- Mélange de ter re du jardin de s plantes de Caen et de sable de
6
ri vièr e.
Le rrlélange contenait approxirnativement 3. la
spores d'Aspergil-
lus fla vus (souche 185) par gramrrle de terre.
2 - Expérimentation.
Le rnélange de terre et de sable est réparti dans cinq terrines
de for me haute à raison de 20 kg par te rrine.
Dans chaque bac, nOll_S avons introduit trois lames de micros-
copIe attachées à Wle ficelle, llune à 3 cm environ de la surface, l'autre
à mi-hauteur et la troisième dans le fond.
Les cinq pots so.nt disposés dans la mêm.e hott'3 que les arachi-
des et al'rosés quotidiennernent avec 700 rnl des solutions de thiabendazole
et d'eau de robinet telles qu1elles ont été utilisées pour l'arrosage des
arachide s.
3 - Résultats et discussion.
Les- analyses ont été effectuées après un ITlOIS d'arrosage.
a) Recherche d'aflatoxine.
Cette recherche effectuée sur 20 g de terre dans les cino~ pots et
à différentes hauteurs a ITlontré l'absence totale de toxique dans tous les
cas, ITlême dans le témoinarrosé uniquement
avec de l'eau de robinet.
Nous pouvons en déduire par conséquent qu lAs pergillus fla vus
.
..
-
-
. . ,..
est incapable de produire de la flavacoUITlarine dan-s là terre,
mêITle si ses
•
"

---

l.J7
b) Examen des lames de microscopie.
Les lames soigneusement retirées, nettoyées et colorées à
l'érythrosine sont examinées au m.icroscope à l'irnrnersion. Sur les 15
lar'nes ainsi observées aucune nIa fourni des renseignemènts appréciables.
Sur toutes les lames)'nous avons observé indif1éremrr.ent des bactéries)
des cellules tuées et des filaments divers.
c) Dénom.brement des spore s dl As per gillus fla 'lUS dans la terre.
C ornme dans l'analyse de s arachides, nous avons tenté de dénom-
brer uniquernent les spores revi'lifiables par culture en boîte de Pétri.
l g. de terre prélevé dans chaque pot et à différente s hauteur s
\\.~
est mi se en suspension dan~d 1eau phys iolcgique et constituait la dilution
-1
10
Le tableau XXVI résume le résultat du dénombrement dans le-
quel nous nlallons tenu cOlnpte que des colonies dlAspergiU;ls flavus.
Ce tableau
n'indique aucune différence, attribuable à llac-
tion du thiabendazole, dans les nombres de spores. Par rapport à la terre
de départ le nom.b!"e de spores par granune e st certes réduit, mais d'une
manière indifférente dans tous les pots et même da.ns le tér!1oin.· Nous pen-
sons que cetterégres sion proviendrait tout s impIe ment d'une aération in-
suffisante du sol par suite du tassement dû à l'arrosage.
D'après ce scons tatations, on pour rait penser à une action nulle
..du thia bendazole sur les spore s d IAspe rgillu s
flavus du sol, contraitement
aux: résultats enregistrés avec les arachides. 1v1ais, nous estimons que d'au-
1
tres essais réalisés dans des conditions différentes sont nécessaires "pour
admettre définitivement" unetë·ll~: thypothèse car) une action plus nette de ce'
fongicide sur les spores contenus dans la terre co~firmerait l'idée de son
emploi éventuel pour le traitement des sols destinés à la culture de l'ara~
chide.
'

---

- 118-
TABLEAU
N°
XXVI
, .
Dénombr ement de s spores revivifiable s d lAs per gillus fla vus
.1
dans un sol traité au thiabendazole -
(Les chiffres
indiquent
le nombre de spores par g. de terre) ..
1
1
1
1
T
1
1
1
2
1
3
1
4
1
1
1
(0)
1
1
(5 pg/ml)
1
(la yg/ ml)
1.
(20 lJ.g/rnl)
(50
1
lJ·g/ml)
1
1
1
1
1
4
1
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1
4
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1
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---

119
CHAPITRE
II
CONSERVATION DES A~'\\CHIDES EN TAS PAR LE FLAVOBACTERIUM
AURANTIACUM - EFFET SYNERGIQUE DU THIABENDAZOLE ET DE
CE GERlvlE
- CONSERVATION DES ARACHIDES PAR LE FLAVOBACTERIUM AURANTIACUM.
l - Expérirnentation.
Dans trois terrines de forme plate dont Pune servait de témoin,
nous avons disposé des arachides ensernencées de spores d'Aspergillus
flavu s à raison de 2 kg de graine s par pot.
LI ens ernencem.ent des arachide s
a été réalisé de la rrrême manière que dans le cas de l'étude sur le thiaben-
dazole. c'est à dire ::"-'~c 500 g de mélange de terre et de sable arrosé d'une
suspension d'Asper::Ôllus flavus et 500 ml d'eau de robinet.
Les pots sont placés sous une hotte au laboratoire et arrosés
quotidiennement avec 300 nù, d'eau de robinet pour le télTIoin et de suspen-
sion de FlavobacteriUlTI aurantiacum pour les deux terrines d'expérience
.
8
dont l'une reçoit 300 ml d 'une s~spension entière à 2. 10
cellule s enVIron
p;:J.r millilitre ~t llautre, la mêm.e suspension diluée au demi.
2 - Analys e et résultats.
Après 30 jours d'incubation, les arachides sont analysées par
chrolnatographie sur couche mince. Les ta lL'C d'aflatoxine retrouvée dans le s
,.trois pots sont consignés dans le tableau XXVII. Dans la figure 9. nous
avons traduit en graphique ce blocage de la synthèse d'aflatoxine en fonction
du nombre .de ce}l~~s de Flavobacterium aurantiacum r.esues par chaque
tas d'arachides et par jour.
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---

- 120 -
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8000
6000
j--------+--------f----------~
4000
o
6
NOMBRE DE CELLULES DE
10
FL.AURANTIACUM (x 10
2
Fig. 9 -
Action du FlavobacteriuITl aurantiacuITl sur la synthèse des flavacouITlarines
par Aspergillus flavus.·
..
, -,
:

---

- 121 -
TABLEAU
N°
XXVII
,.
Action du Flavobactcl"ium. aurantiacum sur la conservation
de s arachides en tas.
1
1
1
1
Nombre de cel-
1
Taux d 1aflatoxi-
Aflato-l
Te rrines
1
1
Iules / ter rine /
ne des arachides
1
Xlne
1
1
1
%
1
jour·
1
( ~g/kg)"
inhi1:Xe 1
1
1
1
1
1
T
1
0
1
12 400
-
1
-
1
1
1
10
1
1
3.10
1
9 100
3300
1
1 26,6
1
1
1
10
1
1
2
1
6.10
500
1
6
5900
148,0
1
1
1
1
1
1
La diminution du talL'{ d1ailatoxine observée ici ne correspond
pas aux ré sultats obtenus 101' s des es sai s de détoxifica.tion sur tourteau
ou sur milieu liquide de CIEGL.ER ct coll.
.ivIais, nous pensons que la
nature du substrat a c~é un facteur dominant clans cette différence de
sensibilité d 1Aspergillus flavus vis-à-vis du Flavobacterium aurantiacum.
II - EFFET SYNERGIQUE DU THIABENDAZOLE ET DU FLAVOBACTERIUM AURAN-
TIACUM SUR LA CONSERVATION DES ARACHIDES.
- - - - -
Deux terrines préparées cornn'le précédemment et contenant éga-
lement 2 kg d'arachides ensemencées de spores d 1Aspergillus flavus sont
arrosées avec 300 ml de mélanges de suspension de Flavobacterium auran-
tiacum et de thiab~ndazole/préparés.commel'indique le tableau XXVIII.
Les arachides sont analysées après
30 jours
d 1 incubation sous
la hotte au laboratoil-e.
Les résultats relatifs au.'I: delL'I: tas d1arachides et à un témoin
arrosé d1eau de robinet sont donnés par le tableau XXVIII et la figure 10.
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---

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122
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TABLEAU
N°
XXVIII
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'. ,
..
Effet synergique du thi.J.bendazole et du F1avobacterium aurantiacum
Terrines
Concentration finale en cellules de Flavobaeterium
l Aflatoxine Io.:~'. d
aurantiacum et en,thia bendazo1e (l).
1
(
~g/kg). 7 r(
1
i
T
o
12 400
9
1
15.10
cellules + 300 ml de solution de thia bendazole
5 200
à 25 }Jg/ml.
2
3, 1010 c ell ule s + 300 ml de solution de thia be:ldazole
3 900
à 50 ~g/ml.
Dans la figure 10, nous avons porté le tau.'C
décroissant d1afla-
toxine en fonction du nom,bre de cellules de Flavobacteriurn atü:antiacu!TI.
En examin.J.nt le tableau XXVIII et la figure 10, on constate
une diminution très nette du t3.UX d !af1atoxine due à l'as sociation du Flavo-
(
bacteriunl aurantiacum et du thiabcndazole. NIais pour juger de la valeur
1
de cet effet synergique, comparons, en nous référant au tableau XXIX établi;i
à partir de s tableaux XXI V " ' XXVlI
et XXVIII, les interférences respec-
l~
tives du thiabendazole seul, du Flavobacterium aurantiacum seul et
de
l'as s ociation du thiabendazole et du Flavobacte rium aurantiacum, sur la
synthèse de la flavacoumarine par As~illus flavus.
Le tableau XXIX montre à quel point l'action du thiabendazole
sur la synthèse de la flavacoumarine est netteiTIent supérieure, aussi bien
1
1
à celle du Flavohacterium aurantiacum seul qu'à celle de ce germe associé
au thiabendazole. Dans des conditions de traitement identiques, le thiaben-
Il
dazole engendre à lui seul, une dégradation de 79 10 par rapport au témoin
non traité; alors qu1avec la même concentration de fongicide additionnée
1
',
d~ 3. 1010 cellules, on n'enregistre qu'lune baisse de 68 10. Po',ntant, il ne l,i
(l)
Le ITlélang'e initial est préparé:.; en additionnant 150 m.l d'une suspension
de Fla vobacterium aurantiacum (2. 108 cellules Iml) à15ü ml de thia-
bendazole (l 00 ~g/rr,J.).
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---

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123 -
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4000
'3000
o
. NOf'-18RE DE CELLULES D.E. FL.AURANTI,I\\CUM(I)
Fig.
la
- Action ·syner giq ue du Fla vo1Jacterium aurantiacum et du t?ia bendazole
9
( 15. la
+ 300 ~l de solution de thiab~:ndazole à 25 I-Jg/ml)
10
. ( .3,10
+ 300 ml de soiution de thiabendazole à 50 f.{g/rnl) .
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---

TABLEAU
N°
XXIX
Cornparaison ·des effets respectifs, du thiabendaz01e, du Flavobacterium aura.ntiacum.
et de l'association du thiabendazole et du Flavoba.cterium aurantiacurn sur la synthèse
de la f1avacournarine par Aspergillus flavus.
1
1
1
1
1
1
.1
Aflatoxine
1 Aflatoxine dans
1
Aflatoxine dé-
Pourc entage de
1
Traiten1.ent subi par les arachides
1
l
l
h' Il
~.
1
1
(ans
es arac 1-1
es ten1.0lnS
1
gradée ou inhi-
dégradation ',,)1.1-
1
(par tas et par jour).
1
:
des traitées
:
(\\_Lg/kg)
: bée
(
f-ig/kg)
d'inhibition.
1
...
'/-
~.
l '
. 1
\\
f-lg/kg).
1
1
1
1
.
,
1
1
,
1
1
1
i
---.
1
1
1
1
1
1
,
1
l
"
: . '300 ml de solution de thiabendazole à 50 !Jg/ml
1
2 600
1
12 350
1
9 750
79
!
1
1
1
1
1
1
1
l '
1
1
1
1
2
300 ml de solution de thiabenclazole à 50 pg/ml +
3 900
12 400
8 500
68
1
1 0 "
-
1
3.10
cellules de Flavobacteriun1. al.lran-
1
1
tiacum.
1
1
1
1
3
300 ml d 1 une suspension de Flavobacterium auran-
9 100
12 400
3 300
26,6
1
1
10
1
tiacum renfermant 3.10
cellules environ.
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
",A.
'Jo'
~,.>.,\\
1-'
N
/
.
>+>-
- _....'

---

11.5 :..
~ .,
peut être question dlune inhibition éventuelle du ge rme par/le fongicide car
un essai préalable (voir tableau XVII) nous avait permis de n?us rendre
J
cornpte que le Flavobacterium aurantiacul1l. pouvait résister à une conce·ntra-
tian de thiabendazole de l'ordre de 50 000 }-tg/ml. Commel1;t peut-on alors
expliquer une telle différence?
Les cellules de Flavobacterium aurantia-
cum a uraien t-eÎle s adso rbé, absorbé ou même dégradé une p~_rtie du fongi-
cide ? Sans pouvoir répondre 2. ces questions, nous reconnaissons la supé-
riorité de llaction du thiabendazole que nous schémô.tisons, pour résumer
notre étude, par lIéquation :
Thiabendazole seul) association thiabendazole
Flavobacterium
aur3.ntiacurn)
Flzé"vob.J.cteriuIT'. aUl"é'.ntiacurn seul.
CONCLUSION.
Ces résultats que nous venons d'obtenir Inette~ évidence une
fois de plus, la rongitoxici~é du thia l:icndazole et son pouvoir de blocage de
la synthèse d l;:dl3.toxine. Des conclusions semblar..,le.:i avaient déjà été obte-
YV
y
nueS par KRIZ et KLE'/fES (1969) et par ROBINSON et coll.
1964 sur ce fon-
gicide.
Nous pensons par conséquent qu~ des essais Inen~s dans des concli-
tiens plus na turelles sur une plus grande échelle devraient perm.ettre cl 'a-
boutir à l'adoption de ce composé pour le traitement des al' achide s. En er-
fet, il serait plus avantageux de faire usage d'un tel produit assez courant
que de mettre en oeuvre des moyens considél-ables pour produire le Flavo-
bacteriurn aurantiacum dont les propriétés de détoxification paraissent bien
médiocres.
. .
. .. ,'
- _.:.".
. :-
. T' ~ ".. '. ,~.- .•

---

-126-
CONCLUSIONS
GENERALES
Les aflatoxines ccnstituent une question du plus haut intérêt
hygiénique et économique en ce qui concerne certaines productions agricoles
comme les arachides.
Il est donc es sentie1 de tr ouver de s moy<-,ns de lutte- contre
les AspergiEus toxicogènes, inl1érents au métabolisme de ces toxiques.
l - Nou:> avons étudié dans un premier temps, l 70 produits susceptibles de
slopposer aux développements n1ycéliens de ces champigüons microscopiques.
La méthode par diffusion en gélose donne des résultats qui
sont essentielleluent liés à la solubilité et à la vitesse de diffusion du produit.
Cependant, toutes les substances reconnues actives par cette n1éthode se sont
également révélées efficaces en milieu liquide de Czapek-Dox, mais llordre
de puissance dl activité n'était pas le même.
Parmi les substances sans ;c.ction
en milieu solide, nous en avons retenu 10 seulement qui se sont toutes révé-
lées impuissantes en milieu liquide.
49 produits se sont montrés efficaces par la ITléthode de diffu-
sion, sur les 170 composés testés.
Ces 49 fongicides se sont révélés également
actifs sur la pousse d'Aspergillus flavus, en ITlilieu liquide de Czapek-Dox et
l~s ITleil1eurs d'entre eux ont été: le thiabendazole, le solusanigran, le rhodia-
nèbe, le ch:r;on1ate de potassiu-rn, le nabasan (nabaITle), le sulfate-neutre d'hydro-
xy-8 -quinoléi~e, le mer coran bouillie, la chlorhydroxyquinoléine, ,le bichromate
de potassium, l'anhydride chromique et l' c{ naphtol.
En rev-anche, les foiJ.gicid~'s lar g.::rnent diffu sé s dans le COITlmer-
ce nlont donné que :des résultats médiocres:
.
,
. . ..~

---

- 127 -
inducteur de la toxicogénèse, inhibitrices de la production de)oxique, mais à
des doses généralement plus élevées que celles néces saires pour inhiber le dé-
veloppement.
II - Le s caractère s de Flavobacterium aurantiacum ont été pr.écis és.
III - Des essaIS en milieu liquide et sur tourteau..'C pollués ont reconnu au [lavo-
bacterium aurantiacum des facultés de détoxification certaines. Cependant,
nous n'avons obse rvé un ré sliltat significatif que dans un seul cas, a vec une des-
truction de 60 '10 de la flavacou"marine initi.alement présente et après 12 jours de
contact avec le ge nne.
IV - Sur échantillons de sol maintenus aLL'C environs d~ 2 roc, le thiabendazole
n'a aucun eHet inhibiteur sur le nombre de spores revivifiables dtAspergillus
flavus.
Sur de petits tas d'arachides de 2 kg(2. 6 % d'humidité interne)
maintenus à 27°C, le thiabendazole (à 50 ~g/ml) a d:'~~;.nué et:. 30 jcurs pén ra2-
port au témoin, la production d1aflatoxine de 79 19.
Dans les mêmes conditions, llarrosage à l'aide de 300 ml (par
jour) de suspe:lsi.on de Flavobacterium. aurantiacunl. renferDlant approximative-
10
ment 3.10
cellules, a provo51J,lé.une,diminution de 26,610 d1aflatoxine.
/. :. r- ;(1 c,; / i:>
::.....~\\'... '
~ ~l~:~ .
~~r.
La combi~'fi:s6'n()dlactio\\d'~~'himiqUedu thiabendazolc et d1action
-
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biologique du Flavobactel'iufn aur;:-n'tiac:urn.' produit une chute de toxine de l'ordre
de 68 10.
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, ..' t :-"':>\\.~~./.
Ces recherches préliminaires en labo!:atoire doivent être sui-
vies d'essais sur leterrain, ce qui permettrait de résoudre en partie la ques-
tion de la pl'éventicn de la contamination par les flavacouDlarines, des arachi-
des et d'autres produits alimentaires ..
-,

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