UNIVERSITE
DE
DAKAR
FACULTE
DE
MEDECINE
ET
DE
PHARMACIE
ANNEE
1979
N·
46
·INTERET DE L'ELECTROIMMUNODIFFUSION
DANS LE DIAGNOSTIC ET L'EPID.EMIOLOGIE
DES MENINGITES A PNEUMOCOOUf~A"Vt~
EN AFRIOUE DE L'OUEST ({ ~\\....
(A propos de 3D7 cas)· ~'m.n,,"ç/
. -tCONSEILAFRICAIN ETMALGACHE
•
• POUR L'ENSElGNEME;NT SUPERIEUR
: C. A. M. E. S. -
OUAGADOUGOU
T H ÈS E \\"' Arrivée ·2·9' M·Al-19.95
!
"
'. Enregistr~=~~-=--~_tf~~~"S~6' .
pr~Rn. et soutenue publiquement Je 3 Jumet 1919 •
. - -
pour obtenir Je grade de Docteur en Pharmacie
( DIPLOME
D'UNIVERSITE)
par
Souleymane MBOUP
né Je 2 JUIn 1951 à Dakar
Pré.ldent de Th'.. :
M. 1. Pro.....ur GIONO BA.aU
Directeur d. Th'.. :
M.I. Proleueur Agr6g' FNlIIpI. DENIS
UNIVERSITË DE DAKAR
FACULT~ DE M~DECIHÈ ET DE PHARMACIE
DOYEfi
M.
Ibrahima DIOP MAR
PREMIER ASSESSEUR ••••••••••••••••••••• M.
Oumar SYLLA
OEUXIEME ASSESSEUR..................... M.
Samba DIALLO
CHEF DES SERVICES ADMINISTRATIFS •••••• M.
André BAILLEUL
MEDECINE
PROFESSEURS TITULAIRES
M.Paul CORREA........................
Gynécologie-O.~stêtrique
M.
Hervé DE LAUTURE •••••••••••••••••••
Médecine Prêventive
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M.
JOseph DIALlO •••••••••.••••••••••••
Ophtalmologie
M.
F'Hlnço'ls DI ENG •••••••••••••••••••• ~
Médecine Lêga1e
M.
Biram DIOP •••••••••••••••••••.•••••
Mêdecine Interne
M. 'Lamine DIOP........................
O. R. L.
M.
lbrahima DIOP MAR ••••••••.•••••••••
Maladies Infectieuses
M.
Papa ~ATE. ••:.~ ••••••••••.•••..••••
Cardiologie
M. .Abdou. SANOIOtO. • • • • • • • • • . • • . • • • • • • • .
Pêdi atrie
M.
Gabri el' SENGHOR. • • • • • • • • • • . .. . • • • ••
Pêd iatrie
M.
AhntêdOJlM,oustapha SOW..............
Mêdecine Interne
M.
Henri TOSSOU.......................
Urologie
PROFESSEURS SANS CHAIRE
M.
Samba DIALlO •••••••••••••••••••••••
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Adrien ~lOP
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Idrissa POUYE. •••••••••••••••••••.• ' Orthopêdie-Traumatologie
PROFESSEUR ASSOCIE
M.' André CARAVON •••••••••••••.••••••••
L~prologie
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,l'
.,
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
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Bernard ALLIEZ......................
Neuro-Chirugie
M.
Oumar BAû •••••.••.•••.....•......•••
Thérapeutique
M.
François DENIS ••..••. ,..............
Bactériologie-Virologie
M.
Fadei DIADHIOU......................
Gynécologie-Obstétrique
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Babacar DIOP ••••.........••.......••
Psychiatrie
M.
Samba DIOP •.•••....•......•....•....
Médecine Préventive
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Mouhamadou FALL.....................
Pédiatrie
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Abdourahmane KANE
Pneumophtisiologie
M.
Jean Pierre MARCHAND .•...••.....•...
Dermatologie
M.
Aristide MENSAH ...•••...........•..•
Urologie
M.
Papa Demba NDIAYE .........•.........
Anatomie Patholgique
M.
René NDûYE..........................
Bi oph.}'$ i que
M.
Oscar NUSSAUME •••.••.••...••.......•
Chirugie Générale
M.
Raymond PAULI N• • • . .. .. . . .. . . . .. • .. ..
Bi ophys i que
M.
Ibrahima SECK.......................
Biochimie Médicale
M.
Abdourahmane SOW .•...•.•.••.....•...
Maladies Infectieuses
M." Sadio SyLLA •••.•...............••...
Anatomie
M.
Papa TOURE ••.••••......•...•.••.....
Chirugie Générale
M.
Ibrahima WONE •..•..•.......•...•.•..
Médecine Préventive
CHARGES D'ENSEIGNEMENT
M.
Jacques ARNOLD ••.•...............•..
Histologie-Embryologie
~1.
Mi che1 CADOZ........................
Mal ad i es 1nfecti euses
H.
Lamine DIAKHATE.....................
Hématologie
M.
Dominique DOUVIN .........•..........
Anatomie Pathologique
Mme Paule HAZEMANN ••....................
Physiologie
M.
Gabriel JOUFFE •.••.•••..•...........
Psychiatrie
Mlle Monique MANICACCI ....•...•....•....
Médecine Interne
M.
Ibrahima Pierre NOIAYE ............•.
Neurologie
CHEFS DE TRAVAUX
M.
Bernard BASTERIS....................
Histologie-Embryologie
M.
Jean Paul CHIRON....................
Bactériologie-Virologie
M.
Abi bou SAMB.........................
Bactér; 01 ogi e-Vi ralog; e
M.
Lami ne Mou ssa sm"...................
Ana tomi e
ASSISTANTS DE FACULTE - ASSISTANTS DES
SERVICES UNIVERSITAIRES DES HOPITAUX
M.
Alain LECONTE ..••••..••.•.......•...
Biophysique
Mme Marianne PERIER.....................
r-r1édecine Préventive
CHEFS DE CLINIQUE - ASSISTANTS DES
SERVICES UNIVERSITAIRES DES HOPITAUX
M.
René AHYI............................
Psychiatrie
f.he Awa Marie BA.........................
Médecine Léoale
M.
Mohamed Diawo BAH ••••..•.......•.•.•.
Gynéco1oqie-Obstérique
M.
Gilles CHERBONNEL •...•.......•.•.....
Chirugie Générale
M.
Sémou DIOUF..........................
Cardiologie·
M.
Mamadou GUEYE........................
Neuro-Chirugie
M.
Nicol as KUAKUVI......................
Pédiatrie
M.
Salvy Léandre MARTIN .•.•..•.........•
Pédiatrie
M.
Bassirou NDIAYE......................
Dennato1ogie
M.
Michel STROBEL.......................
Dennato1ogie
M.
Yacouba Js:hag~ TOURE. .. :... .. ...•...•
Médecine Interne
M.
A1assane WADE........................
Ophtalmologie
ATTACHES - ASSISTANTS DES SCIENCES FONDAMENTALES
r.tne France ARNOLD ••••••••••......•.......
Histo1ogie-Embryo\\ogie
Mlle Issa Bella BAH
..
Parasito1ohie
-
totne Gi se11 e BLAVY •.•••••.••...••.•.•••..•
Hématologie
M.
Aynina CISSE. ••.••....•...•.....••..•
Biochimie Médicale
M.
Fallou CISSE.
.
Physiologie
~e Mireille DAVID
.
Bactériologie-Virologie
M.
yémou DI ENG .••......•..•.............
Parasitologie
M.
Fodè OIOUF .... ~ ....•.................
Parasitologie
fthe Mari anne DUFETEL.
.
Biochimie Médicale
M.
Pierre DUFETEL.
.
Physiologie
M.
Moussa FAOJARA
..
Biophysique
M.
Babacar FAyE
.
Biochimie Médicale
M.
Edouard Alfred JOHSON
..
Anatomie
M.
Mawuko Mathias KOOJOVI •.......•.•....
Histologie
M.
Victorino MENDES ••••..••.....•.•.....
Anatomie Pathologique
M.
Momar Anta MBACKE
..
Anatomie Pathologique
M.
Omar NDIR
.
Parasitologie
M.
Mamadou NDOYE
.
Anatomie
r.tne Jacqueline PIQUET
.
Biophysique
M.
Lionel ROBINEAU
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Médecine Préventive
Mme Oumou1khayiri SAMB •..•.•........•....
Biochimie Médicale
M.
Al oys SARR •.•••...•..••.•...........•
Biophysique
M.
Gara SECK
..
Physiologie
Mll e Maimouna SECK ......•..••........•...
Biophysique
M.
Nabi1 TARRAF-KOUJOK •.••.....•........
Hématologie
t4ne Fa tou TaURE ..•..•••...•..•.•.••......
Physiologie
ATTACHES - CHEFS DE CLINIQUE
M.
François ADANLETE •...................
Gynécologie-Obstétrique
M.
Mohamed AYAD.........................
Pneumophtisiologie
M.
Salif BADIANE........................
Maladies Infectieuses
M.
Nicolas BASSENE .•••..................
OrthoDédie
M.
Djibril DIOP
Cancérologie
M.
Bernard Marcel DIOP
Maladies Infectieuses
M.
Bernard DOSSEH.......................
Anesthésiologie
Mme Soukeyna FAY~ ..•.....................
Médecine Interne
Mme Laurence FELLER .•..•.................
Psychiatrie
M.
Koutoubo GASSAMA.....................
O. R. L.
Mme Brigitte GUGLIELMINA ....•............
Médecine Interne
M.
Sa1if GUINDO ....•....................
Gynécologie-Obstétrique
M.
Abdel Moumine MOULAYE
Médecine Interne
M.
Ismaila SV ......••...................
Pédiatrie
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Mady Oury SyLLA......................
Cardiologie
Mme Marie-Thérèse SOW-GOERGER .....•......
Médecine Interne
M.
Katime TOURE.........................
Urologie
CHIRURGIE DENTAIRE
CHARGES D'ENSEIGNEMENT
M.
Michel DUPIOT
Odonto-Stomatologie
M.
André SCHVARTZ.......................
Dentisterie Opératoire
ASSISTANTS DE FACULTE
M.
Ibrahima BA .....•....................
Pédodontie'
M.
Jacques FOWLER •......................
Pathologie et
Thérapeutique Dentaire
M.
Eric LE COUSTOUR ...........•.........
Pédodontie
Mme Marie Hélène NDIAYE
.
Prothèse Dentaire
r.tne Renée NDIAYE.
.
Parodontologie
Mme Ndioro NDIAYE
. Odontologie Préventive et Sociale
M.
Sard Nourou TauRE
. Orthopédie dento-faciale
ATTACHES DE FACULTE
Mme Maimouna BADIANE
Dentisterie Opératoire
M.
Patrick BEYLIE ..•....................
Biologie et Matières Fondamentales
M.
Boubacar DIALLO •.....................
Dentisterie Opératoire
Mme Marne Yandé GNING .. ~ ...............•..
Parodontologie
M.
Jean loup MOREAU
~
Parodontologie
M.
Jean Paul TERRISSE
Prothèse Dentaire
PHARMACIE
PROFESSEURS TITULAIRES
M.
Humbert GIONO-BARBER
Pharmacologie &Phanmacodynamie
M.
Georges GRAS........................
Toxicologie
M.
Oumar SyLLA............. .. . . .• . . .. . .
Pharmacie Chimique et
Chimie Organique
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
M.
Jean Claude BRUNET
Chimie Générale et Minéral
Mlle Dominique DUCHENE
Pharmacie Galénique
M.
Issa LO.............................
Phannacie Galénique
M.
Jean Louis POUSSET
Pharmacognosie
CHARGES D'ENSEIGNEMENT
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Charles DIAINE......................
Physique
Mme Elisabeth DUTRUGE
Biochimie Pharmaceutique
M.
Claude HASSELMANN
Chimie Analytique
M.
Alain LAURENS.......................
Chimie Organique
MAIT~S ASSISTANTS
Mme Paulette GIONO-BARBER
Pharmacodynamie
M.
Guy MAYNART.........................
Botanique
Mme Janine MONDAIN ..............•.......
Toxicologie
Mlle Catherine PELLISSIER
Chimie Analytique
CHEF DE TRAVAUX
Mme Urbane TANGUY-SAVREUX
Chimie Organique et Pharmacie Chimique
ASSISTANTS
Mme Geneviève BARON
Biochimie Pharmaceutique
M.
Mounirou CISS.......................
Toxicologie
M.
Aly CISSE...........................
Phannacie Chimique
M.
Boubacar CISSE •.•..••..........•....
Chimie Générale et Minérale
Mme Thérèse FARES .....•.................
Pharmacodynamie
Mlle Christine LACHAISE .......•.........
Pharmacie Galénique
M.
Bernard LANDRIEU .....•..............
Biochimie Pharmaceutique
M.
Souleymane MBOUP
Bactériologie-Virologie
Mme Arlette VICTORIUS
Zoologie
ATTACHES
M.
Amadou DIENG ...•....................
Pharmacodynamie
M.
Iba Der GUEYE.......................
Botanique
Mme Monique HASSELMANN •...........•.....
Physique
M.
Cheikh Momar MBOW ..............•....
Physique
Mlle Eléonore PRINCE .•...........•......
Pharmacie Galénique
-----~--, -~ --
-- -- ---- - -----~-~ ~--- -----
A Marie Louise~
PouJt :tOUA !u -6a.cJU..6ic.u dont je .6tU..6 bien. cOMuent.
Ta patience. et :ta c.al.l.a.boJta.tion noU.6 .6ont -tJr.è-6 p.1téUeu6e.6.
Avec tout n.o-tJr.e amoUJt.
A l i·basse,
Que la. poJLte de la. Jtéu.Mae et du bonheWt
:te. MU ouveJt:te:..
A ma mère~
IIIn
Mémoriam"
Ve vo-tJr.e viva.nt, VOlU ne ménagiez aucun eUoJt.:t
poWt nOM vobt ltêU.6.6bt. TJtouvez dan.6 c.e t!l.a.va.U.. fA.
c.oflC'Jléwmon de vO-6 e66ow, l'e.x.plLu.6,,[on de Y1otlte.
é:teJtneUe e:t plto6omie. gJLa:tUu.de.
A mon père,
PouJt votAe plto6ond amoUJc., VO-6 pltièltu, vO-6
encoWLagemen.t6 et .tOlU !u -6a.c.Jti..6icu cOMe~.
Pu..L6.6.wM-nOu..6 VOu..6 pJt.OCWLeJt lu p.f.u.6 9Jt.andu -6aW6act.i..o~.
A mon frère Issa,
Ami de :toujoWL6 et coUabolta.:teuJr. 6-WUe.
A tous mes parents,
A mes beaux parents,
En témoignage de ma ~o6onde a66ection.
A tous mes amis d'enfance,
.."
Au Général de Division Idrissa FAll,
Chef d'Etat Major Général des forces armées.
A toute la promotion des 100 de l'Ecole Militaire de Santé,
particulièrement au ~édecin Lieutenant Cheikh FALL et
au M~decin Aspirant Soule~ane NDOYE
A tous les pharmaciens l
A tous nos anciens et cadets de l'Ecole Militaire de Santé,
A tous les Internes et Anciens Internes des hôpitaux de Dakar,
particulièrement à mes amis Doudou SARR et Amira ABOUD.
Au Médecin Lieutenant Colonel Jean E. SOCANDE,
Directeur du Service de Santé.
NOM avon-!l appJtêue.J!. vo.:tJte c.oVtWbu.Uon matéJr..-leile
à lréla.bokŒtLo~ de. ce. ~tavait.
A tous mes promotionnaires de l'Université de Dakar.
en particulier à Marème Fall à qui je suis
liè par une amitié indéfectible.
A mes amis V.S.N.
Gilles BUISSON et Francis BARIN.
~
-.Le. pek-!lonnet du fAbo~O~ie. de bact~olog~e de l'hôp~
i..e Vantec. et de. t' hôpltal de Fann ;
- Le. peJL,~oYlYleL du. Se.r'tv-lc.e de..,!> Mai.a.cLte.-!! In6e.e:t<..eJ.L6e6 de
l'hôpital de Fann ;
- MIt S-i.ny SENE, BoubaC1Vt AMAR et MUe AtMatou GAYE, poU/t
le~ c.oita6okŒtLon tec.hnique ;
- MUe. MaJUe. Madûwle KOUAKOU. poWt ta. ptLÜ.e.nce et la. gel'tÜl-tu4e
que. vO(L,~ avez b~en vou1u. me.ttJte. à yw:tJr.e. c1.-<Apa-!lilion ;
- Mme le VOe.te.M fMAUUe. PRINCE, qui nOM a a:t:ti.Jté VeJ!.,6 la.
mÙ)l.Ob~olog~e. Se.-!! c.onoe.ili eX -!Ion exempte noM ont toujOU/t.6
encoU/tagê ;
- MonJ."ieuk te. VocteLVt Ab.<.bau SAMB, poUJt VO~Jle. c.olliboJta"t(on
b-i.en a.ppJtéuée, VD-!I c.oYL6UL~ et vo:tJr.e ge.n;t{1lu-6e. ;
- PR..uh.ie.uJL6 aJ..du maté·tie.te.u ont p~ de menVl à b-i.eYL cette
étude. It fia.u-t c)Â.eJt notamnent .ta c.o~bu.t.lon :
de Wt V' ouLtltemont (Labokato-Vtu Rogek BELLON};
du Dr.. TRIAU (LaboJtato1Jte-6 MéJt-<'eux) ;
de la V.G.R.S. T. e.t de. MIt. le Plw6u.6eUJt Mou.6.ta.pha. Sow
qtû a b-i.en voulu étUVlte n0.6 :tJr.a.vaux avec. Vt:t.êJr.U.
,A
NOS
J U G E S
Monsieur le Professeur Humbert GIONO-BARBER,
Professeur de Pharmacologie et Phal1macodynamie
Docteur ès - Sciences.
LOM de. no.6 é.:qLde..6 de. phcwnaci.e, nO(L6 aVOn6 pu. a.dmiJteJr. vo.o
qu.a.LUé.o cl 1 en.,Û,{,gnaYLt, VO:0te di..hpon.i.bili;té e:t .e.' étendue. de.
VO.6
conna)./.i.oanc.e/.J. NolL.) VO(L6 JtemVtUon6 pouJt. .e.' honne.uJt que
volL6 nOM 6C'vtte-e, d' ac.ce.pteJt la. p1Lu..tde.nce de. c.e JuJtlf.
'1
~lonsieul" 13 Professeur Iba DIOr V,,\\R
Professeur de Pathologie infHct'leuse
Doyen de la Faculté d~ ~&d~cine et Pharmacie de Dakar.
VCJ.,
c.onnWf.,an.c.e.6, vo:IJLe. /'Ugue.uJt .6uenti.o,,[que. et l' WéJtU
que. VOLM )JOuez à ta !r,echvrche, .6ont poWt nOM un exwrple..
NOM VOU-6 /r..e.JlleJtC-<.On6 de. vo:IJLe. b,,[e.rtveil!a.nce à no:tJte égaJtd
et de. l' -<,rt...téAê7 qu.e. vou...& POJL..te.z à. no-6 :lJLava.ux.
Vo-tne pi'té..6el1ce. pcM'tm-i n0.6 juge.!.> c.oY'.I.>.t.U:u.e pOUlt noUf., un gltaJ1d
honnwJr., noM VOLU! e,nMmme/.J :t!tè.6 nec.orma..U.6a.nt.
Monsieur le Professeur Oumar'SYLLA,
Professeur de Pharmacie Chimique et Chimie Organique.
Qu.e ce btavaii !.JoU .t 1 Oc.c.M--ton de. VOM M.6Wr.e./L :toute nobte
gl'La.;ti;t.ü..de e.t /1ot/I..e. pltO 6and l'Leb pec;t.
Monsieur le Professeur Agrégé François DENIS,
Professeur Agrégé de Microbiologie
Docteur ès-Sciences.
VOU..6 YlOM avez aUV(,At .ta po/Lte. de vabLe. ,~e'l.v.[c.e.. Vo.vr.e
cLi..6pcm'[bili-t.é, vo.tJte. ge.l1:tU...tU.6e., vo.vr.e mo~utie, vo..t'te
pa,Uenc.e., voue. dYI1a.nU.J.Jme e...t vobte. C.UUll/l.e. noM ~ VlV)/Wt'lt
d'exempte. é:tVtnrfleme.n-t.
Soyez ltb.!lWr.ê. de. Yl.o.tte. 9·'Lande. acf.m.Utat..ton e;t de no.vr.e. plto6onde.
et v.[ve. ltec.onrr.aM!.lal1c.e..
Monsieur le Professeur Agrégé Issa Lü,
Professeur Agrégé de Pharmacie Galénique.
VO.6 COn..6UÙ, votlte dyna.m.-Ume. nOM ont p~ de .!lWtmon.:teJl.
bl.en du pltob.tè..mu.
Soyez M.6u}l..é de notAe .ôlnc.èlLe. et plto60nde. anU;Ué.
Monsieur le Professeur Agrégé Jean Paul CHIRON,
Professeur Agrégé de Microbiologie.
VOM noM ave.z c.OYL6eil1.é et .6u--tvi tout o..u. long de c.e tltavo.-i1.
a.vec. u.ne. b.[e..nve...U..la..n-te. .6ympa;tlUe. et u.ne.. d.t.6pon.i.bUUé à
tou.tu éplteu.vu.
No/.t.6 -te.noY!.é a. vou...~ expMme.Jt 110.6 ptu..6 -ô-é..I1C.èJr.U lteme!tuemeJ'lû.
- 1 -
1 N T R 0 DUC T ION
- 2 -
Le. cUa.gno.6ac bac.:téJUolôg~que du bt6ec.üott& cuguu en g~néJr.o.l et de4
mén.i.ngUu en patr..t(.ClJ1.i.<VL Jr.epo.6aÂ.t j!J.6qu f ac~ deJLYLLèlr..u a.nné~ :6Wl R. f ex~en CÜJlec.:t
et .ta c.u.U:wr.e, te llVLoCÜP.gnoll:ti..c n' appolt.tàYtt un cUa.gno.6ac Wot6g-Lqué que
tJtop ,tcvuLivement.
Si .f. f examen d1.Jr.ec.:t peut: ê..tJr.e pJLatiqué, l i n' appotv'te .6ouven.t qu'un Mgument'
pltê..6ompti6, .ta. c.u..UuJte 'l~ pvune.-t un diagnol>ac étio.f.ogJ..que. de. ceJt.tU.ude donne
une. lt~pon6e cU66éJtée de 24 a 48 he.u.Jte.!>.
It n'ut pM pol>llJ..ble de cU.mUw.e.Jt le temp.6 de génétta.ti..on l~ badmu
e.-t de ce 6a..U on ne peut upéJr.e.Jt de .ta. c..u..Uu.!te. u.n CÜP.gno.6Uc Itapi.de.
U.. ê.ttU.:t nécu.6a.Ut.e pOUll poJt:teJt un cUagnol>Uc p1Léc.J..!> et JUtp.{.de. d' aboltde.Jt
.te pltoblème au.tJteme.1tt ; .f.~ p1LogJtè~ de t' ..<.mmunologJ..e ont Jte.ndu p0.6l>ibte. R..a. Jte.cheJtche
CÜ!tede.ment daM lel> pltodu.i..t6 pa.:thotoglquu du ant.i.gène!> bac.:tvuen.6, vi.Jw.u.x vt
paJlaJ.l.u.a..iJtu et otU: peJiJrUô de poJt:te/1. un cUagno.6:tl.c ëtiologlque non ptu.6 l>WL
bac.:têJUe v-i..a.ble m~ .6UIL antigène déte.c..ta.bte.
1
L'un du, pJLe.nU.VlA champ.6 d' J..nve.6:ti..ga.:t.i..on en ba.ctéJUolog.i.e. 6ut ce..e.M
du, mén.i.ngUu puJtl.ttentu, c.a.Jt le LCR Mt W1 pJtod~ monom.tc!tobien "plLop!te" où.
eu bac.:téJUe.6 .6oltt abonda.n:tu.
Cette techn.i.que a. .6UJt:tout été a.ppli.quée au cU.agn0.6.tic du, mé~gUu, à
Mén.i.ngocoque, à Pneumocoque et Haemoph.Uu..6.
Le..6 Pneumocoque!> 6-i.gWr.ant à Da.kaJt au. ptl.e.mieJt /tlti1.g de!> a4 ent6
du ménl.ngUu pwud.en-tu:ta.n.t pOUll .ta. oltéque.nce. que pOUll la. moJt1aLuë lta pJté-
vaf.e.nce de. ce.:tte méMngUe. u,t au. Sénégal patun-i.. .tu pl.M éte.vée!> .6ignal.éu d0.n6
le monde), c' ut tout n.a-t.uJte..U.emen:t que nOM -6ommU pe.nché.6 .6Wt. te cUagno.6.t.i.c
du ménbtgUe..6 à Pneumocoque. ~ électno~unodi66!J.6J..on.
GJuice. à cette tec.hn.i.que éga1.emeltt, on peut. déteJtm.i.ne.Jt te .6 éJtotype de..6
Pne.u.mocoquu, ce qlLi.. a. un .,[n-tVc,êt ép~démtatog~que .indénl.a.b.te CM cette. .& éltotypie.
ut le p1Léai..a.ble. .i.ncL<..6~ab.e.e à. la. con6ecUon d'un vacc.bt.
,
L' a..6pect cU..a.gno.6üc et .ta. lJ éJ'I.otJjp-ie ont é.t~ lu deux Ugne.6 cU-tec.:tJvi..cu
de ce tfta.va-a.
- 3 -
Cette é:tu.de 0. pu. me menée 0. b.<.en gJLâc.e li une. c.otetc.boJt.itÜ.on U1wi;te
enble le ~Vt.v'<'c.e dt6 Mal.acUu 1n6ed-i.eu..6u de Fann (Plt06e.Mewt VI OP MAR- 1.} et
le ~eJt\\Ï'<'c.e de Ba.c.téJUoR.og.<.e-Vbto!og.<.e (Plto6u~e.uJl Agltégé Vettio F.).
.
~
Ce.:tte :th~~e. e.ntJte d~ te c.a.dJr..e. d'une enquète. ép.i..démio!ogi.que v~te, qu.<.
do.u: me poWL6l.Uv-<.e
~Wt p.tu..6-iWJL6 anneu et étendue cl d' autlt.u ltégiGtt6 du
Sénégo..l, vobte d'A6~que.
Le 6huutc.eme.nt de c.e .tJta.va.Lt 0. été vl.Ouvé dctrL6 lu c.Jtée:U..t6 "de c.h.cUJte",
do.n6 un c.on:tll.o..t de .la OORST ~énégcttcUAe e:t da.n6 du a.idu rna.tWe.Uu plUvéu ;
i l 6aut -6ouhaLtell. que d' aatlr.u a1.du v-i.end!tont pltendJr.e le. 1tela..L, notantnent, ,
l' OILga.tUActtion Mon.cU..ale de .ea Santé don:t l'un du objec..ti6~ poWl tu o.nnéu a'
vetUll. ut ta. p1Léven:ti..on du ht6ec..tioM pne.umoc.oc.dqu.u en !l.aÂÂon de leuJt 6Itéqtie.nc..e
et leuJt gJta.vUé.
- 4 -
CHAPITRE
l
LE PNEUMOCOQUE
- 5 -
le Pneumocoque longtemps considéré comme un genre et une espèce uniques
(V~pioeoc~ p~eumoruae), est maintenant rattaché à juste titre au genre Strepto-
coccus : S~eptoeoc~ pneumo~ae. Toute question ayant trait au Pneumocoque, doit
être dominée par quelques faits fondamentaux :
- La morphologie du Pneumocoque est liée au milieu de culture;
- La virulence du Pneumocoque dépourvu d'enzymes est .liée à la présence
d'une capsule;
- La très grande richesse en fibrine des foyers pneumococciques entraine
notamment dans les méningites l'apparition de cloisonnements d'autant plus diffi-
ciles à combattre que le traitement est institué avec plus de retard ;
- Enfin le Pneumocoque grâce aux études qu'il a suscitées à propos de
sa capsule a été à la base de la découverte d'un phénomène fondamental en micro-
biologie générale: Za transfo~ation.
1.- HISTORIQUE
Les principales dates concernant l'évolution des connaissances sur le
Pneumocoque sont les suivantes :
1881, Pasteur injectant au lapin la salive d'un enfant'rabique déter-
mine une infection mortelle. Il décrit un germe ressemblant au chiffre 8 ;
1882, Ta1amon découvre le germe dans les crachats rouillés d'un pneu-
monique ;
1884-1885, Fraenkel et Weichselbaum précisent les caractéristiques de
ce germe et notamment le différencient avec le pneumobacil1e de Fried1ander ou
Kieb~~etla pneumoniae ;
1900, Neufe1d découvre un phénomène très particulier au Pneumocoque et
plus précisément aux Pneumocoques capsulés : la lyse de ce germe par la bile.
A partir de cette date de nombreux travaux ont été réalisés pour étu-
dier la constitution antigènique. Ces études ont permis de démontrer l'existence
de types pneumococciques différents et ont permis à Griffith en 1928, de découvrir
le phénomène de la transformation. l'ADN est identifié comme le facteur transfor-
mant en 1944 par Avery, Mac Léod et Mac Carty avec le Pneumocoque.
2.- HABITAT
Le Pneumocoque est un commensal nonnal de la bouche. des fosses nasales
et du pharynx chez 50 pour 100 de la population. Ce pourcentage est particuliè-
rement élevé (85 %) chez les moins de 20 ans. Il peut aussi être présent au ni-
veau du vagin.
Le Pneumocoque devient pathogène sous l'influence de divers facteurs
encore mal définis. Certains types (1- 2- 3- 8) ne semblent pas être des commen-
saux habituels, ils sont plus virulents que les autres types et sont responsables
- 6 -
de syndromes graves d'origine exogène. Il existerait des porteurs sains de ces
types virulents.
Ce n'est pas habituellement une bactérie commensale des· animaux sauf
des espèces familières de l'homme comme les petits rongeurs d'élevage ou de la-
boratoire chez lesquels
elle peut entrainer des épizooties.
3.- CARACTERES BACTERIOLOGIQUES DU PNEUMOCOQUE
Dans cette étude, il faut distinguer d'emblée, deux états très diffé,
rents du Pneumocoque :
.
,
.
~
- A la-sortie de l'organisme, dans les produits pathologiques, ou en-
core dans les cultures jeunes en milieux tamponnés et enrichis, le germe est
capsulé en diplocoques. Il donne des colonies S, petites et transparentes, il est
virulent pour la souris; enfin son identification grâce aux tests biochimiques
est aisée ;
- En revanche, parfois dès le premier repiquage et à plus forte raison
en cultures vieillies de plusieurs jours, le germe pousse (s li1 nlest pas lysé
spontanément) mais il a perdu sa capsule et son groupement caract~ristique, sa
culture est plus abondante mais les colonies sont de type R; ce gèrme a perdu sa
virulence pour la souris et la majorité des différentes propriétés biochimiques
qui permettent de l'identifier avec certitude. Le Pneumocoque devient alors sou-
vent indistinguable des Streptocoques non groupab1es et plus précisément des
S~eptocoeCUh ~ (étant donné l labsence de production de mucilages en milieux
hypersaccharosés).
Nous allons étudier maintenant:
- Les deux états du Pneumocoque en phase S et en phase R ;
- Les modalités de variations phénotypiques, mutation. ou transforma-
tion :
S~R spontané, correspondant à une mutation ou variation phénoty-
pique que le bactériologiste doit éviter s'il veut faire le diagnostic du germe;
R~S, possible, grâce à des artifices expérimentaux, correspondant.
à un phénomène fondamental en microbiologie générale : la transformation.
3.1. PNEUMOCOQUE EN PHASE S
Il existe sous cette forme dans les produits pathologiques, en cultu-
res jeunes et en milieux enrichis ~u albumineux.
- 7 -
:; . :: ' 1. CARACTERES MORPHO LOGIQtES
Le Pneumocoque se présente typiquement en diplocoque. Ce type de diploco-
que a un aspect particulier: les deux cocci qui mesurent 0,5 ~ lu, sont lancéolés,
en flammes de 'Jougie, opposés par la pointe, ce qui donne à l'ensemble, comme l'avait
dit Pasteur, une forme ressemblant au chiffre 8. Les diplocoques sont: soit isolés,
soit disposés en courtes chaînettes de 4 à 6 éléments. Ces chainettes se distin-
guent de celles de Streptocoque par leur aspect rigide.
Certaines souches et notamment le Pneumocoque du type 3 ont des chainet-
tes plus longues mais leur rigidité est théoriquement évocatrice.
'\\~
3.1.1.1. Etat 6k~
Ces diplocoques sont toujours immobiles et entourés d'une capsule bien
visible.
..
La capsule est une couche gélatino-muqueuse faite de polysaccharide.
Hershey en 1940 a montré qu'il s'agissait d'un gel fibreux assez lâche, dont la
surface est faite de reliefs et d'interstices et offre donc une grande possibilité
d'adsorption. Le gel de faible densité entoure donc toute la bactérie, sa taille
est souvent notable puisque cette capsule double en moyenne les dimensions du germe.
La mise en évidence de la capsule s'effectue soit:
- Par examen à l'état frais simple d'une goutte de culture en bouillon
ou suspension d'une colonie. La capsule apparait alors comme un halo clair, bril-
lant entourant la bactérie ;
- Par la méthode de Burri à l'encre de chine;on observe alors un halo
brillant et refringent sur lequel viennent butter les particules d'encre de chine;
- Par la méthode de Burri modifiée par Borin, par adjonction d'une goutte
de sérum ;
- Par la méthode de Dondero : suspension des germes dans du lait écrémé;
- La visualisation par coloration : demande des techniques assez brutales
telles que coloration regressive avec colorants concentrés ou le mordançage. Ces
techniques sont rarement employées en pratique.
Les dimensions de cette capsule sont en fait variables ; sa production
est favorisée en milieux albumineux ou additionnés de sérosité, elle est souvent
particuliêrement importante chez le Pneumocoque de type 3.
Enfin, elle disparait assez rapidement dês que les cultures vieillissent.
Cependant si la culture n'est pas trop âgée et que le germe n'est pas passé en pha-
se,R irréversible, il peut retrouver sa c~psule par passage sur souris.
- 8 -
3.1.1. 2. Co-!oJta:Uon de Gltam [F'<'gUlle 1)
Les cocci apparaissent à Gram positif. Cependant ils risquent de ne PJs
garder le Gram si l'on prolonge un tant soit peu le temps de décoloration.
FlguJtel: MoJtpho.tag-l-e du Pne.umoc..oqu.e. da.M un LeR de me!1.<.ngUe.
Il faut mentionner que dans les produits pathologiques, spontanément ou
sous l'influence d'un traitement antibiotique des formes pseudo-bacillaires trom-
peuses et à Gram douteux voire négatif peuvent être observées ; dans les crachats
lors de la crise pneumonique, ou au niveau des localisations secondaires métasta-
siques (articulaires notamment) des genmes en phase R, non capsulés sont retrouvés
souvent dès la sortie de l'organisme.
3.1.2. CARACTERES CULTURAUX
3.1.2.1. Génêltatité~
Le Pneumocoque en phase S est un germe 6Jta.g~te et exigea.nt.
- 9 -
c'est un germe fragile
Il craint tout particulièrement la chaleur, tué en 10 minutes â 55° C,
il résiste davantage au froid et àla dessication. La température optimale est
37° C (il tolère 20 et 40° C).
Il est très sensible aux variations de pH et meurt rapidement dés que le
pH devient acide. Il faut donc, comme pour les Streptocoques utiliser des milieux
tamponnés d'autant qu'il acidifie précocement les milieux par fermentation, et que
son pH optimal est alcalin: 7,8 .
. Il est en effet sensible à l ·oxydation. Comme les Streptocoques, il est
4émuni en enzymes respiratoires. Dépourvu de catalase, il possède une peroxydase
très active qui dégage donc une grande quantité d'eau oxygénée. Celle-ci s'accpmu1e,
du fait de l'absence de cata1ase. Cette accumulation d'eau oxygénée est très nbcive
pour ce germe. Pour pallier à cette hyperproduction d'eau oxygénée certains auteurs
ont préconisé d'ajouter au~ milieux de la cystéine.
Tout comme les Streptocoques, le Pneumocoque est aéro-anaerobie faculatif,
mais n'utilise ~ l~oxygène. Il préfère ~me une anaerobiose relative et certaines
~hes poussent mieux, ou ne peuvent pousser qu'en présence de 10 pour 100 de CO2
surtout au sortir de l'organisme. '
C'est donc un germe particulièrement fragile qui dépend étroitement de
nombreuses conditions extérieures : température, pH, oxygénation, Cette fragilité
explique qu'il ne soit jamais retrouvé à l'état libre dans la nature. D'ailleurs il
est détruit en quelques secondes par l'exposition au soleil.
C'est au8si un gep,r~ exigeant
Comme les autres Streptocoques, il exige de nombreux substrats:peptone
à 1 pour 100 de deux sortes (pepsiques, pancréatique8), acides aminés, vitamine BI;
un sucre est un élément fondamental pour sa croissance : le glucose à 1 pour 100
(les sucres fermentés étant surtout des mono et disaccharides).
3.1.2.2. Milieux de ~~e
Milieux liquides
Bouillon tamponné glucosé (pH 7,6 - 7,8) qui comporte deux peptones,
glucose, tampon phosphate.
Bouillon T (TkU~he) qui comporte albumine, glucose (pH 7,5 - 7 6). les
peptones
t
à 4 pour 100 remplacent le tampon. La culture est vite abondante mais la
tendance à l'autolyse est assez forte.
- 10 -
Bouillon additionné de sérum ou d'ascite à 10 pour 100. Le sérum sert
de tampon. La culture est abondante et la tendance à l'autolyse est plus faible.
/llriUeu:c soUdes
Gélose Truche : gélose glucosée avec ascite ou sêrum à 10 pour 100.
La gélose au sang de mouton ou au sang cuit constitue un excellent milieu,
meilleur que les géloses sérum ou ascite. Certains utilisent la gélose au sang ·de
mouton additionnée d'un antibiotique tel que l'acide nalidixique à la dose de
40 ~g/ml pour isoler le Pneumocoque à partir de produits polymicrobiens.
Il faut ensemencer largem~nt le Pneumocoque en phase S, car la culture
est souvent difficile.
un très lèger dépôt.
Il ne
l'autolyse est rapide
et se
lisses, fines, plus
Sur géZose au sang ou au sang cult
Un verdissement du milieu autour de la colonie est souvent constaté tra-
duisant une hémolyse a type viridans : cet aspect verdâtre étant en rapport avec la
transformation de l'hémoglobine en méthémoglobine. Cette hémolyse verdâtre expli-
querait l'aspect du pus pneumococcique.
En géLose profonde viande-foie
Le germe cultive sur toute la hauteur du tube.
3.1.3. CARACTERES METABOLIQUES
L'activité en.zymatique du PneW71ocoque est faibte
- 11 -
3.1.3.1. Enzymu Jr..e6p.iAato-Ûte-o
Le Pneumocoque ne possède pas de cata!ase ni de oytochrome·oxydase mais
une péroxydase. Il ne réduit pas les nitrates en nitrites.
3.1.3.2. MUaboLwme gfucùüqu.e.
De nombreux sucres sont fermentés sans production de gaz mais avec une
acidification importante. Ces fermentations seront étudiées en eau hyperpeptonée
4 pour 100 ou en milieu de Hiss (milieu au sérum qui joue le rôle de tampon). En
cas de fermentation.le pH devient acide, le tournesol vire au rouge et il se pro-
duit une coagulation de sérum.
Sucres fe~enté8 :
.,.
monosaccharides : glucose, lévulose.
disaccharides
: saccharose,.maltose.
trisaccharides
: . raffi nose.
Suores non fe'l"l11entés
poly-al cool s
glycérol, mannitol, sorbitol
dul citol .
pentoses
xylose, arabinose, rhamnose.
glucosides
esculine, salicine.
les glucides polymérisés -amidon, dextrine- ne sont pas attaqués. Cepen-
dant l'inuline est fermenté par 40 à 60 pour 100 des souches en milieu de Hiss.
Ceci distingue le Pneumocoque des Streptocoques inactifs sur l'inuline.
le lait tournesolé est acidifié (fermentation lactique) coagulé,
l'étude de ces fermentations sucrées n'a pas d'intérêt pour le diagnostic.
3.1.3.3. MétabotJ~me ~otéique
le métabolisme protéique est très restreint. Le Pneumocoque n'est pas
protéolytique: la gélatine nlest pas liquéfiée, le sérum coagulé et le blanc
d'oeuf ne sont pas attaqués.
- 12 -
Le germe ne produit ni d'indole ni de Ht~. On a pu mettre en évidence en
culture en bouillon, des enzymes libérées dans le milieu, dotéesr,d'une certaine action
d'hydrol~se sur les grosses molécules protéiques du bouillon.
3.1.3.4. Pouvo~ hémolytique
.
Le Pneumocoque provoque le plus souvent une hémolyse de type a (avec
verdissement) et certaines souches pourvues d'une hémolysine (pneumolysine) produi-
sent une hémolyse franche de type ~. Cette pneumolysine présente une certaine pa-
renté avec la Streptolysine, car elle est inactivée partiellement par
l'antistreptolysine.
3.1. 3.5. LIJ.H. pM .ta bile ... phé.nomène de. Neu6eJÂ
Le test décrit en 1900 correspond à la lyse du Pneumocoque par la bile
de boeuf au de lapin ou par les sels biliaires a 10 pour 100 (taurocho1ate, glyco-
cho1ate). Cette lyse intéresse la capsule mais aussi les structures pariétales
et cytoplasmiques, Seul le noyau est respecté (113).
~
A 1 ml de bouillon de culture de 18 heures, on ajoute 4 gouttes de bile
ou de sels biliaires. Il apparait alors presque immédiatement un éclaircissement
d~ milieu, qui est comparé à un bouillon de culture. Selon l'intensité du phénomène,
on observe soit un net éclaircissement du milieu, soit simplement une disposition
des ondes.
Mais un certain nombre de précaution doivent être soulignées: Il ne faut
pas employer une culture dans un milieu liquide contenant trop d'albumine ou de
glucose. Il faut contrôler le pH avant de faire le test, en effet, le pH doit être
neutre, un pH acide risquerait d'entraîner la précipitation des sels biliaires qui
masqu~rait la lyse du Pneumocoque.
La signification de ce test est très importante, le test n'est positif
qu'avec le Pneumocoque virulent c!est à dire capsulé.
3.1. 3.6. Se.M.{bilUé à i. 1 op;éoc./Wl(!.
En 1911, Levy et Morgenroth montrent que T'optochine ou chlorhydrate
d'éthyl hydro-cupréine permettait de protéger des souris inoculées avec un Pneu-
mococ,ue virulent.
En 1925 Wright utilise ce produit in vitro pour le diagnostic différentiel
avec les autres Streptocoques. Deux méthodes ont été décrites
En bouillon: Les Pneumocoques sont sensibles à des concentrations in-
féricûres à 0,08 ~g/ml. Alors que les Streptocoques ne sont sensibles qu'à des
concentrations supérieures à 20 ~g/ml.
- 13 -
En milieu ~otide : C'est le test réalisé actuellement. Un disque de 6 mm
imprégné d'une solution d'optochine à 0,05 pour 100 inhibe une culture de Pneu-.
mocoque. Le diamètre de l'inhibition est supérieur à 20 mm. Pour les autres Strep-
tocoques ce diamètre est inférieur à 13 mm et souvent il n1existe aucune inhibition.
Bien qu'il existe quelques exceptions : 3 à 4 pour 100 de souches de
Pneumocoques résistent à 1'optochine, ce test est très intéressant pour le diagnos-
tic de Pneumocoque puisqu'il est positif non seulement pour les Pneumocoques en
phase S, mais aussi pour les Pneumocoques en phase R.
En résum~ les aaraatères biochimiques prinG~paux pour l'identification
du Pneumocoque qu.-l ·dêt~'1.»tin.e.n-t Le. diagl1o!.>.t.i.c ~on-t :
- absence de catalase
- phénom~ne de Neufeld positif
- sensibilité à l'optoahine.
3.1.4. CARACTERES ANTIGENIQUES
<,
"
Pour le Pneumocoque de la superficie vers la profondeur un certain ~
bre de structures en couches concentriques peut être décrit IF~9UÂ.e 2) :
Capsule
En périphérie, très épaisse : élément fondamental du Pneumocoque en
phase S, de nature po1yosidique,elle pennet de classer le Pneumocoque en types
sérologiques ou sérotypes.
Paroi
Elle vient ensuite et présente. une certaine analogie avec celle du
Streptocoque. En effet, cette paroi serait constituée à l'extérieur d'une protéine
M, voisine de la protéine Mdu Streptocoque, puis d'une substance po1yosidique C,
èommune à tous les Pneumocoques. Comme toute paroi bactérienne, elle comporte
également le mucopeptique qui lui donne sa rigidité.
Membrane bactérienne
En dessous de la paroi, la membrane bactérienne enclOt le cytoplasme
cellulaire et la masse nucléaire. Cette membrane chez le Pneumocoque ne présente
pas de caractères spéciaux. Enfin on peut extraire du corps bactérien un antigène
nucléoprotéinique interne spécifique de l'espèce pneumococcique, donc commun à
tous les Pneumocoques.
- 14 -
1
_11--1~~~I----- PAROI
•
•
MEMBRANE CYTOPLASMIQUE
I~~~-
r
F.i.guJte. Z : Sc.héma du, enve.ioppu, bac.:tWe.yt/l.e.c~ du "Fne.umoc.oquC'.•
- 15 -
la structure du Pneumocoque est donc voisine de celle du Streptocoque,
mais ici la capsule a une importance toute particuliêre.
3.1.4.2. COn4~ a.nt.lgén.i.qu.u
En 1900, Besançon et Griffon ont montré que le Pneumocoque isolé A par-
tir d'un malade est agglutiné par le sérum de celui-ci. Ceci n'a lieu qu'en pré-
sence du Pneumocoque, agent causal de la maladie.
En 1913, Dochez et Gil1epsie, en confrontant les résu1tat~ obtenus
avec des nombreuses souches de Pneumocoque et des sérums correspondants décriv.nt
quatre types différents de Pneumocoque.
t.
En 1933, Cooper retrouve les trois premiers typesdécr1ts mais subdivise
le dernier en 29 types différents.
En 1948, Eddy dénombre 74 sérotypes capsulaires.
Actuellement 84 sérotypeS\\de Pneumocoque sont connus mais il existe
différentes nomenclatures dont les corrélations sont mentionnés dans l'annexe 1.
.~paraticm de la Substanae SolubZe Sp4aifique (12~)
Au cours d'une infection, avec. un type de Pneumocoque, des antigènes
spécifiques peuvent être détectés chez le patient (sérum, LCR, urines). Les souches
virulentes de Pneumocoque sont enveloppées par un polysaccharide capsulaire spé-
cifique de type (2~. le caractère soluble de ces polysaccharides a été révélé
en 1917 par Dochez et Avery (48).
Cette substance po1yosidique est appelée ~u.b~tance hotubte ~péci6~qu.e
(S~S.S.) du fait qu'elle se trouve dans les milieux de culture du Pneumocoque, a un
moment où la croissance est maximale. Elle est retrouvée également dans le sang,
les urines ou le LCR des malades atteints de ,neumococcies. Cette 5.5.5. peut
être obtenue A.partir de Pneumocoquesincubêspendant 18 heures a 370 C dans un
bouillOn enrichi par 5 pour 100 de sérum,additionné de 5 â 10 ml de bile. la
culture s'autolyse après un séjour de 2 heures à 370 C.On ajoute 1 ml dIacide
acétique a 50 pour 100 et le mélange est chauffé jusqu'a ébullition. Après refroi-
dissement, il est procédé a une neutralisation par addition de soude et a une
centrifugation a 4.500 RPM pendant vingt minutes.Le surnageant clair contenant la
5.5.5. est mélangê avec deux fois son volume, d'alcool absolu. Le tout est agité
puis laissé au refrigérateur à SoC pendant une nuit. Le lendemain le polysaccha-
ride prëc'j pité est séparé par centrifugation a 3000 RPM pendant dix minutes·. le
culot est additionné de 10 a 20 ml dIalcool abso)u~ On centrifuge a nouveau ; le
culot est laissé dans un dessicateur pendant dix a douze heures. Pour tenminer,
il est agité a nouveau avec de 11éther et remis dans le dessicateur.
Les polysaccharides peuvent également être isolés de l'urine par pré-
cipitation dans cinq voJumes.d'a1cool à 96 pour 100. La précipitation est com-
plête après 30 minutes a + 5~ C. Le précipité est sêparê par centrifugation puis
desséché par l'éth~r comme précédemment.
- 16 -
Caraetère physi()o-()himiques et irrmunoZogiques des poZysa()()haPides
Ces substances sont stables A l'ébullition et ne sont pas détruites
par les ferments protêo1ytiques. Le caractère é1ectronégatif de ces polysacc~a
rides a été mis à profit pour effectuer leur recherche dans les liquides biolo-
giques.
En 1974, Coonrod (26) s'est 1ivre à une étude três préci se des caractères
physicochimiques des polysaccharides capsulaires spécifiques purifiés, tant sur la base
des caract~res physicochimiq~s (Table~ 1) que des caractères imrnunologiq~es (Tableau
Z'et 3). Ainsi sont nettement différenciés les polysaccharides purifiés, les poly-
saccharides isolés ~e tous les liquides biologiques autres que les urines, avec
les polysaccharides isolés des urines de malades. Des hypothèses tendant à expli-
quer ces différences par dégradation enzymatique par les urines ou par des liaisons
protéiques n'ont pas résisté à la vérification expérimentale (Tabte.au 4).
~
Sur le plan de leur charge électrique, les exopolysaccharides de Pneu- ~
macaque sont très, é1ectronégatifs à l'exception des sérotypes 7 et 14 (
). Leur
poids moléculaire est de l'ordre de 100.000 daltons.
,.•
Structure des antigènes capsulaire8
Un pas fut franchi dans l'étude de la structure antigênique du Pneumo-
coque et des bactéries en général quand Avery et Heide1berger attaquent le problème
sur le plan chimique. Actuellement, la composition des polyosides solubles de dif-
férents types est connue.
Par hydrolyse ménagée, on a pu montrer que la structure résulte de la
polymérisation de l'assemblage élémentaire (d'une ou de plusieurs) molécules d'ose
ou d'osamine (glucose, gwactose) avec un acide uronique (glycuronique, ga1acturo-
nique). Pour le Pneumocoque 2 par exemple, le polysaccharide est un polymère dIacide
a1dobiuronique qui est lui même formé dlune molécule de glucose et dIacide D gly-
curonique, liés par une liaison ~ 1-4 ; les acides a1dobiuroniques sont réunis par
des liaisons glucosidiques ~ 1-3.
Mais la spécificité dépend parfois d'une simple modification de 1lassem-
blage des mêmes molécules. Clest ainsi que le polyoside 3 est lui aussi constitué
de glucose et d'acide glycuronique, mais son pouvoir rotatoire différent du type Z
témoigne de l,'agencement différent des molécules.
3. 1.4.3. e.t.a..6!J-LMC4t1..on du Pneumoc.oquu -6lUvant la hVuLctwc.e du
polYhac.duvudu C.aphuJ.AÛtU
En 1944, Eddy décrit quelques nouveaux types de Pneumocoque trouvés aux
USA, en utilisant les chiffres de 1 à 75. Ces types sont ensuite examinés par Lund
(1957) et sont introduits dans la nomenclature danoise. Une comparaison des nomen-
clature danoise et américaine est faite en 1960 par Kauffman, Lund et Eddy (An-
nexe 1).
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Ta.bleau 1
C~amatog~a.phie Sephadex G 200 de poly~acc~de ca.p~ul~e pneumocaccique.
(dra.pJr.è~ Coowwd, ~eptL-iA pM Le.gJu1i1d] (26, 921.
P.C.P.
Polysaccharide capsulaire pneumococcique
P.P.P.
Polysaccharide capsulaire pneumococcique purifié
P.M.
Poids molêculaire
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P.P.P dilué Qans urines ou sérum )---~
R. Identité complète
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( P.P.P dilué dans eau physiologique
P.C.P Urines
') _..
R. Identité partielle
.. ( - ~.c.P ~ Ut'Ïnes
- P.P.P
. autres malades
même type
P.C.P Urines
) ..
R. Identité complête
..
( P.C.P Urines
. autres prélèvements
mêmes malades
~;.
)--
(- P.P.P
P.C.P. -; Urines
..
R. Identité complète
- Filtrat culture
I~
- P.C.P ~ Urines
P.C.P Tout liq. biologiques
) .
R. Identité complète
(pour un même malade
..
(P.C.P même liq. biologique
tout au long de l'évolution)
..
Tab.leau 3 : CMactèltu lmmu.n.olog-iquu du P. C. P eX. du P. P . P
en douhte d1..66U6..[OYl avec. le même type.
(d'a~è~ Coonnod, ~e~ pM. Legftandl (26, 92).
P.C.P. : Polysaccharide capsulaire pneumococcique
P.P.P. : Polysaccharide capsulaire pneumococcique purifié
- 21 -
Ainsi les lettres majuscules et les chiffres arabes sont utilisés pour
définir les types. Les chiffres arabes et les lettres minwscu1es indiquent la
fonmu1e antigênique, et les chiffres romains utilisés à l'origine disparaissent.
Exemple : Sérotype capsulaire 6 : il existe 2 types 6A et 68.
6A a pour formule antigènique 6a, 6b ;
68 a pour formule antigènique 6a, 6c.
Sérotype capsulaire 7
il existe 4 types 7A, 7B, 7e, et 7.
Sérotype capsulaire 9
Il
Il
9A, 9L, 9N, .et 9V.
D'après la formule, on peut imaginer s'i1 peut exister des COPréCiPi~a
tions entre les différents types.
Les capsules de Pneumocoque sont composées de polymèreSll qu i fonment un
gel hydrophile à la surface des cellules. Deux principales étapes dans cette bio-
synthèse sont retrouvées :
- Synthèse d'un nucléotide, l'uridine phosphate 0
IN
6} ;
cp..
-1t"1/
- Liaison des sucres les uns aux autres par de \\tr
S~
""
(\\.
Pendant la croissance du Pneumocoque, l~s pol ~ charid ~) i
sent
dans les milieux de culture, et chez les malades, dans /tè ~iq
.
o~ giques,
où leur présence peut être mise en évidence par prêcipiî~'
avec u ~. unsérum
correspondant. Les capsules s'agrandissent pendant la phase exponen ~ e de crois-
sance au moment où la synthèse de polysaccharide atteint son
'i11t"'~..":l~nsuite,
dans les dernières phases, les capsules diminuent de tai11e,J.ib~ le polysac-
charide qui diffuse dans le mil ieu environnant (F..i.gUlte 31.
._-- .
3.1.5. COMMUNAUTES ANTIGENIQ.UES-REACTI0NS CROISEES
Des réactions croisées ont été décrites entre :
- Les po1 vsaccharides pneumococciques de types 6, 15, 29, 35 et H. in-
6fue.nz4e type b (2) ;
- Entre les Streptocoques viridans et de nombreux sérotypes de S. pneu-
morr.1.a.e (9) ;
- Entre les polysaccharides pneumococciques de types 1, 2, 4, 5, 6, 7,
8, 9, 18, 19, 23, 25, et Kleb.6-i.ee.ta. pne.umon.<.ae (65);
- Entre S. pneumoniae et P.6eudomonaô aekUg-i.n0.64 (110).
- 22 -
eOOH
k - - - - O
6
o
3
o
H
OH
H
OH
TYPE
CONSTITUANTS
1
Acide galacturonique, N-acetylglucosamine, Acide acétique
2
Acide cel1obiuronique, D-glucose, L-rhamnose
3
Acide cel1obiuronique
6
D-glucose, D-galactose, L-rhamnose phosphate
8
Acide cellobiuronique, O-glucose, D-galactose
14
D-glucose, D-galactose, N-acetyl glucosamine
18
D-glucose, L-rhamnose phosphate
19
D-glucose, L-rhamnose, N-acetyl, D-mannosamine phosphate
34
D-glucose, D-galactose, ribitol phosphate
Ta.bie.a.u. 5
Comp0.6UJ..GI'l c.hA.m.i-que. du polY0l.>ide.6 c.ap.6u1cUJte.l.> de.
cü6 6éJte.W ,~étwtypu de. Pne1.UTloc.oque..
- 23 -
U T P
pp;
____~L
_____+,. UDPG
+
glucosel phosphate
. l
UDPGA
l
t3)-acide·0-g1ycuroniqu~-(1~)-p.glucose-tl]
pp~
= Py~ophohphate ~r~~ganique
UTP
:' UtUcUne buphohpha.:te
UVPG
= UtU.cUne (Upho.~ phogfuc.o.ô e.
UVPGA = Wr.{.cüne. aude d.4.phe.6pkoglYc.Moni..que
Tableau 6
8-i..o.oynthùe du poiY0-6-i..de du. Pne.umoc.oque .oVtotype. ',.
- 25 -
Les réactions croisées le plus fréquentes mettent
en cause un anti-
gène K d'E. coti
K 7 et s. pneumoniae 3
(128)
K 30 et
»
2 et 5 (83)
K 42 et
»
25
(83)
K 85 et
"
2 et 5 (83)
Bacillus et
»
3
{83}
L'existence de ces réactions croisées est d'un grand intérêt, celles-ci
doivent être parfaitement connues. Elles peuvent être la source de difficultés
dans l'interprétation des résultats concernant la recherche d'exo-antigênes chez
Tes malades.
l
Aussi, insisterons nous à nouveau sur la nécessité de pratiquer la re-~
cherche d'exo-antigênes chez les malades, en connaissant parfaitement la clinique,
en examinant plusieurs liquides biologiques en parallèle (sang et LCR par exemple),
et en recueillant et en conservant ceux-ci, les urines particulièrement, dans de
bonnes conditions, à l'abri de souillures.
Signalons que ces réaction~croisées peuvent être mises à profit, no-
tamment pour préparer un immunsérum dirigé contre un germe très labile,
celui
qui a l'antigène le plus stable étant utilisé pour immuniser l'animal.
~
3.1.6. SUBSTANCES SECRETEES PAR LE PNEUMOCOQUE
Elles sont très peu nombreuses
PneumoZysine
Cette enzyme est active à l'état réduit sur les hématies humaines. Elle
détermine une hémolyse viridans par formation
de méthernog10bine produite en quanti-
té variable; elle n'est pas présente chez toutes lessouches. La pneumolysine est
en partie inhibée par 1'antistreptolysine, de même que la strepto1ysine 0 serait
\\
inhibée en partie par les antipneumo1ysines.
Hyaluronidase
Elle est immuno1ogiquement distincte de la hya1uronidase streptococcique.
Fibrinolysine ou Kinase
Elle est secrétée en très faible quantité, vu le caractère hautement fi-
brineux des lésions pneumococciques.
3.1.7. POUVOIR PATHOGENE EXPERIMENTAL
Seul le Pneumocoque en phase S est virulent.
-
--.
- -
,-0.----
- 26 -
La 80UriS est l'animal de choix pour l'étude du pouvoir pathogène expé-
rimental. Plusieurs voies d'administration peuvent être ut'i1isées :
- L'injection sous-cutanée d'une culture de Pneumocoque entraine en mQlos
de 24 heures la mort de la souris par septicémie (les doses varient de 1 ml à 10
ml). A l'autopsie les organes apparaissent tuméfiés, la rate est grosse, le sang
noir. On constate une pullulation énorme de germes capsulés dans le sang, sur les
frottis de la rate et du foie.;
- Par voie intra-péritonia1e, on obtient une maladie plus rapide. Oes
prélèvements successifs de sérosités, permettent de suivre d'heure en heure la
multiplication des germes dans le péritoine. Jusqu'à la cihquième, sixième heure,
de nombreux polynucléaires paraissent retarder la pullulation, puis surviennent la
septicémie et la mort;
- Par voie respiratoire, il faut anesthésier la souris à l'éther pour
obtenir une maladie qui prend la forme d'une pneumopathie ~n foyers. L'adjonctibn
de mucine à l'inocu1um favorise le développement des foyers.
~
Le lapin est moins réceptif que la souris. Le cobaye est moins sensible;
le rat, le chien, le mouton, le singe sont peu sensibles. leur sensibilité est aug-
mentée par l'injection simultanée de mucine intratrachéa1e.
'.,.
D'une façon générale, l'expérimentation animale montre bien le rôle con-
sidérable joué par le terrain puisque le pouvoir pathogène expérimental dépend de
l'espèce animale (la souris étant particulièrement sensib1e},des ~odifications lo-
cales et extérieures: . refroidissement apporté par l'anesthésie à l'éther,
injection de mucine 1oca1e.
3.1.8. POUVOIR PATHOGENE NATUREL
Chez l'homme, le Pneumocoque est avant tout un germe dont la virulence
se manifeste dans les voies respiratoires. Une autre localisation préférentielle
de ce germe est représentée par les séreuses.
Tout foyer infectieux pneumococcique est caractérisé par une r~action, fibri-
neuse dàns
la pneumonie et se trouve en fait au niveau de toutes les localisations
muqueuses, séreuses, ou même endocardiques.
En raison de cette réaction fibrineuse, les suppurations a Pneumocoque
ont tendance â l'enkystement. Enfin ces suppurations détruisent peu les tissus du
fait de la carence enzymatique du Pneumocoque.
.
On peut distinguer parmi les infections pneumococciques, les infections
primitives dues à ce germe et les surinfections généralemènt respiratoires qui
placeraient un Pneumocoque endogène dans des conditions favorables pour acquérir
un~ soudaine virulence.
~
3.1.8.1. In6ectionh pneumoeoccique6.
Nous nous limiterons à une brève énumération, 1'objectif de ce travail.
n'étant pas clinique.
-- --.!
- 27 -
Les affeations des voies respiratoires sont Zes pLus fréquentes.
Il peut s' ag i r :
- De pneumonie franche lobaire aigUe et de compHcations pneumococciques
pleurales et otitiques ;
- D'infections des voies respiratoires supérieures; rhinopharyngites,
angines (volontiers pseudo-membraneuses). A partir des voies respiratoires supé-
rieures. ou d'un foyer plus ou moins apparent cliniquement, le germe peut diffuser
et entrainer septicémie et ou méningite, ou une atteinte des séreuses.
Les affections du .6éJLe.u.6u c.oYlLtU:u.ent une. tOC.ctU.6CLÜOYL 6"'équ.~e
âu Pneumoaoque.
C'est surtout à leur niveau que le risque de cloisonnement est à craindre.:.
Dans les méningites, le L~R "fourmille" habituellement de Pneumocoques
et le pronostic est dominé par le risque de cloisonnement. La dépanocytose serait
un facteur favorisant les méninqites à Pneumocoques car elle est associée à un
déficit de la phagocytose (t9).
..
.
Oans les pleurésies pneumococciques. l'on retrouve un pus très f~breux,
épais verd~tre.
.
Les périaardites souvent secondaires à un foyer pulmonaire gauche, sont
volontiers récidivantes.
La péritonite pneumococcique, beaucoup plus rare, atteint surtout la petite
fille; elle est mortelle une fois sur deux.
Les arthrites : simple arthralgie, arthrites suppurées avec épanchement
regressent habituellement sans séquelles.
Tout foyer pnewnoaoaaique peut se compliquer de septicémie.
Il faut également citer les endocardites aigUes, ulcérovégétantes à Pneu-
mocoque. ELLes sont rares bien sur, mais elles sont d'une extrême latence souvent
associées a une méningite ; elles se localisent en règle général au foyer aortique.
Disons qu'il n'y a pas d'éruption spécifique ,liée au Pneumocoque mais cha-
cun connait le bouquet d'herpes de la pneumonie et le purpura qui accompagnent les
états septicémiques les plus graves.
Cette étude du pouvoir pathogène naturel serait incomplète si elle ne
mentionnait pas les facteurs de virulence de Pneumocoque.
- 28 -
3.1.8.2. V~ence
la virulence est le pouvoir et la possibilité de multiplications d'un
germe dans un organisme donné. le Pneumocoque n'est pathogène que par sa grande
multiplication (fourmillement des Pneumocoques dans le lCR et les crachats pneumo-
cocciques) on peut distinguer parmi les facteurs de virulence :
- Les facteurs intrinsèques qui font qu'un organisme déterminé se laisse
envahir par le genne, c'est à dire· le terrain;
- les moyens propres au germe qui permettent sa multiplication;
- les facteurs extérieurs. qui viennent perturber un organisme souvent
prédisposé â l'infection.
Moyen.s propres au geme
,
Dans le cas du Pneumocoqu~, qui est pratiquement dépourvu d'enzymes, donc
de moyens d'attaque, la capsule joue un rôle quasi exclusif dans la virulence du
germe. Plus précisément, cette capsule seule protégerait le germe de la phagocytose
en rendant la bactérie glissante, si bien que le phagocyte ne pe~ y adhérer et
l' absorber.
En fait la façon dont la capsule protège la bactérie est encore mal
connue. Certains auteurs pensent que la capsule aurait aussi un rôle actif d'inhi-
bition de la phagocytose; si lion injecte des souches R normalement non pathogènes
et phagocytées, avec de la substance polysaccharidique capsulaire, la phagocytose
est a10rs i très inhibée.
En outre le Pneumocoque interviendrait sur la voie alterne du comp1êment.
Ter>r'ain
C'est une notjon
fondamentale en matière de Pneumocoque. En effet un
grand nombre de facteurs entrent en ligne de compte dans l'éclosion et la gravité
de l' infection.
Age: les pneumococcies atteignent
tous les ages, mais particulièrement
les âges extrêmes de la vie (nourrissons, adultes de 50 ans).
Sexe: l'homme serait plus souvent atteint que le fenme mais la grossesse
favorise l'apparition de la pneumonie qui est alors grave puisque l'avortement se
produit dans deux cas sur trois.
Raae : elle joue un rôle important aussi ; on cannait la gravité de la
pneumonie chez les ang1o~saxons (USA) et les sujets de race noire. La forme septi-
cémique est fréquente chez les asiatiques.
Enfin l'alcoolisme, le diabète, le grand age, sont des facteurs de gra-
vité bien connus.
- 29 -
On peut rattacher à ces facteurs l'existence d'une infection respiratoire
virale ou bactérienne qui favorise bien souvent une surinfection pneumococcique.
Fa~teur8 extérieurs
C'est ainsi que les chutes soudaines de température, l'exposition au froid
favorisent l'éclosion de pneumococcies qui s'observent en ~iver et au printemps.
Bordet notait la fréquence de l'éclipse subite$ur les épidémies et l~r recrudescen
sous l'influence de facteurs météorologiques. Les véritables épidémies sont rares,
elles semblent survenir, avec prédilection dans les cpmmunautês d'enfants. les cas
sporadiques sont plus fréquents et surgissent ça et là sans que la source de l~n-
fection puisse être retrouvée.
~
3.2. PNEUMOCOQUE EN PHASE R
Le Pneumocoque en phase R est trouvé dans les cultures 4gées mais aussi
parfois au sortir de l'organisme, après une crise pneLlOOniqueou~ans.un' 'foyer 1iêta
tasi~uet articulaire par exemple.
3.2.1. CARACTERES MORPHOLOGIQUES
Il ne possède pas de capsule.
Les chainettes sont longues, parfois encore rigides.
3.2.2. CARACTERES CULTURAUX
La culture est facile, même dans les milieux ordinaires.
Le germe est devenu plus résistant, en particulier a la chaleur.
En milieu liquide, la culture est homogène, avec des flocons et un dépOt
au fond du tube. Il n'y a pas d'autolyse.
En milieu solide, les colonies sont rough, rugueuses, non confluentes.
3.2.3. CARACTERES BIOCHIMIQUES
les caractères biochimiques sont peu modifiés par rapport à ceux du Pneu
nocoq~e en piasc S, mais les Pneumocoques en phase R ne sont pas lysés par la bile
- 30 -
Cependant le test à l'optochine persiste parfois.
3.2.4. STRUCTURE ANTIGENIQUE
On ne retrouve pas de polyoside capsulaire.
La protéine Mpersiste : mais sa spécificité est variable. '
Le polyoside C et l'antigène somatique, spécifiques du groupe, sont
présents.
Ainsi la détermination du sérotype capsulaire du Pneumocoque nlest ~us pos-
sible ainsi
que sa différenciation avec les StreptocoQues ingroupables, l'optb-
chine le permet parfois. La sérologie de groupe reposant sur le polyoside C ne peut
être faite qu'en laboratoire spécialisé.
De plus le pouvoir pathogène a disparu pour la souris et le diagnostic
est très difficile avec les StreptQcoques ingroupables.
'"
3.3. CONDITIONS DE PASSAGE
S + R et R + S
3.3.1. VARIATION PHENOTYPIQUE OU MUTATION
Le passage de l a phase S 'à l a phase R peut être provoqué
In vitr>o :
- Par des conditions défavorables de cultures
- Trop ou pas assez d'extrait de viandes ,
- pH trop acide ou trop alcalin;
- Température trop élevée ;
- Répiquages trop fréquents ;
- Conservation trop longtemps à 37° C ;
- Par des mauvaises conditions de conservation
- Ou volontairement par un milieu additionné de bile de boeuf ou d'im-
munsérum.
.~-------s:-~
- 31 -
In. vivo:
- Par la crise pneumonique ;
- Par des localisations secondaires.
3.3.2. TRANSFORMATION
Passage de la phase Râla phase S. Elle ne se fait pas spontanément mais
grâce à des artifices techniques.
.
,
En 1928, Griffith transfornle des Pneumocoques en phase R, en Pneumocoques
en phase S, capsulés et virulents in vivo. Il injecte simultanément â une souris
une petite quantité de P.neumocoque en phase R vivant et une souche de Pneumocoque
en phase S de type 1, mais tués par la chaleur. Il provoquent une septicémie mor-
telle: le gen~e isolé des organes de cet~ souris étant un Pneumocoque en phase S
capsulé de type 1.
En 1941, Avery, Mac Leod et Mac Carthy ont isolé et identifié le prin-
cipe transformant: l'acide desoxyribonucléique.
M
La reversion S ~R, correspond à une mutation, à la perte de l'information
9é~~tique nécessaire à la formation d'une capsule. Quand on met ces germes en
phas~ R, en présence de DNA provenant de germes en phase S, celui-ci va apporter
l'information liée à l'élaboration d1une capsule. Le DNA est,donc l'agent transfor-
m-1nt.
De telles transformations ont pu être obtenues pour des.caractères autres
q~le ceux portant sur l'existence de la capsule. Ainsi a t 6h pu faire porter cette
tr~nsfor.netion sur la résistance aux antibiotiques. Une telle transformation a pu
Ctre tppliquée à d1autres germes que le Pneumocoque.
4.- DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE
4.1. PHASE S
4.~ rI. EXAMEN VIRECT
L'exa~en direct du produit pathologique est d1une grande importance.
Sur le pr0duit pathologique lui'même ou son culot de centrifugation une coloration
di1férenti2lle (~ram) ou simple (bleu de méthylène) est pratiquée.
- 32 -
Il Y a souvent une grande abondance des germes en cas d'infection primi-
tive à Pneumocoque (crachats pneumococciques et LCR). La capsule rend le diagnostic
plus facile.
Un gonflement du Pneumocoque dans le produit pathologique permet parfois
de typer directement le Pneumocoque.
4.1.2. ENSEMENCEMENT
Il se fait sur milieux appropriés, additionés d'acide nalidixique :
bouillon pour Pneumocoque, gélose au sang ou au sang cuit, en atmosphère enrichie
de 5 à 10 pour 100 de CO2 .
,
Devant des cocci à gram positif et dépourvus de catalase, on s'oriente
vers un Pneumocoque ou un Streptocoque. L'étude du phénomène de Neufeld, le test
à "optochine et le typage de.. la souche réalisé. par gonflement, précipitation ou
électroimmunodiffusion conduisent au diagnostic de Pneumocoque et au diagnostic
de type.
4.2. PHASE R
le diagnostic est très difficile avec les Streptocoques non groupables
Le phénomène de Neufeld est négatif
Absence de pouvoir pathogène pour la souris.
Quelquefois, le test à l'optochine demeure positif mais souvent il n'y a
pas de typage. possible.
4.3. TYPAGE DES PNEUMOCOQUES
Il se fait selon plusieurs méthodes.
4.3.1. GONFLEMENT VE LA CAPSULE
C'est le phénomène décrit par Neufeld en 1902. Le phénomène optique que
l'on observe avec les Pneumocoques est provoqué par le contact des immumsérums
avec la capsule. C'est le phénomène de gonflement de la capsule. En fait, cette
appellation semble mal choisie car le phénomène peut être présenté comme une réac-
tion
antigène-anticorps au niveau de la capsule.
- 33 -
Quand la réa~tion s'est effectuée sur toute la surface du Pneumocoque,
celui-ci apparait entouré par un halo clair. Pour que la réaction soit plus visi-
ble on préconise de procéder à un mélange à volume égal d'une solution de bleu de
méthylène et des immum-sérums.
4.3.2. PRECIPITATION EN TUBES ÇAPILLAIRES
Russel (125bis) en 1978, utilise la précipitation en tubes capillaires.
Les Pneumocoques sont cultivés dans du bouillon Todd-Hewitt
pendant 16 heures
sous atmosphère enrichie en CO 2 . Deux ml de la culture sont placés au bain marié,
à 100°C pendant cinq minutes, le surnageant contient l'antigène spécifique de
•
type. Le reste de l,a technique se poursuit exactement conme pour le typage des
.
Streptocoques par la méthode de Lancefield. Les arcs de précipitation sont nette-
ment visibles à l'oeil nu~
"..
4.3.3.
ELECTROIMMUNOVIFFUSION
La technique de l'EIO appliquée au typage des Pneumocoques sera étudiée
au chapitre 3.
5.- SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES
5.1. PENICILLINE ET CEPHALOSPORINE
La plupart des souches de Pneumocoque a une concentration minimale inhi-
bitrice (CMI) à la Pénicilline de 0,01 ~g/ml, c'est à dire 100 à lQOOfois inférieure
au taux sérique moyen, ce qui explique l'excellente activité clinique de cet anti-
biotique.
L'Anlpicilline, deux fois moins active reste encore très efficace in vivo
Il n'en est pas de même de la Céfalotine dont la CMI pour le Pneumocoque est 200
fois plus élevée.
Depuis 1967, des souches de Pneumocoques rësistantaà la Pénicilline G ont
été isolées en nouvelle Guinée, en Australie, aux Etats Iinis,au r.anada, en Thai-
lande et en Grande Bretagne.
En 1977, Appe1baum et coll (5) signalent la présence de telles souches à
Durban sur le continent Africain. Les souches Sud africaines avaient des CMI vis-à-
vis de la Pénicilline G de 4 à 8 ~g/m1.
- 34 -
"
. Récemment, Scragg et coll (130) à Durban signalent que respectivement
17 pour 100 et 6 pour 100 des souches de S. pneumoniae sont résistantes à la Péni-
cilline G et à l'Ampicilline. Au Nigéria, Hansman signale une souche partiellement
rési~tante à la Pénicilline G (82 ).
Le Sénégal nlest pas à l'abri de ces résistances, et cette émergence peut
être expliquée par le large emploi dela pénicilline G dans les dispensaires de
villes ou de brousse.
5.2. TETRACYCLINES
Avec une plus grande fréquence au sein des types 6 et 19, la résistance
à la Tétracycline est répandue parmi les différents sérotypes. A partir de 1963,
on signale l'apparition des premières souches résistantes avec des CMI comprises
entre 8 et 32 ug/ml (sB).
"
Le pourcentage des souches ré~istantes continue à croftre pour atteindre
le chiffre inquiètant de 46,3 pour 100 en 1979 (71),la Doxycycline est la plus ac-
tive et la mieux tolérée des Tétracyclines
(71) et présente des CMI ainsi que la
~ Minocycline plus basse que pour la Tétracycline.
~
5.3. MACROLIDES ET APPARENTES
L'Erythomycine est l'antibiotique le plus actif de ce groupe qui comprend
en ~utre la Spiramycine, 1•01 éandomyci ne et la Lincomycine. Les souches résis-
tantes à l 1 Erythromyci ne restent à ce jour exceptionnelles, bien que de tels spé-
cimens aient été signalés dès 1967.
Cette résistance est restée stable, inférieure
â 2 pour 100 en 1977. En 1978, cette résistance est passée à 6,5 pour 100 avec
extension dans 3 sérotypes différents et apparition de souches multirésistante~
associant
résistance aux Macrolides, à la Tétracycl~ne et Chloramphénicol."
5.4. CHLORAMPHENICOL
C'est en 1972 qu'on isole en France les premi"êr·s Pneumocoques résistants
au Chloramphénicol par production d'un acétylase, codée par un plasmide et inac-
tivant l'antibiotique (71). En 1976, cette résistance touche 6 pour 100 des Pneumo-
coques (71) et en 1978 cette résistance est passée à 9,3 pour 100 des souches. Cette
résistance à été observée chez 15 sérotypes différents. De telles résistances ont été
observées pour des souches de Pneumocoque à Durban, a Johannesburg et à Ibadan.
- 35 -
5.5. AMINOSIDES
. Les résistances aux aminosidestStreptomycine et Gentamicine ne semblent
pas exceptionnelles puisque des CMI de 3ë wg/m1 sont signalées ~72).
A' Durban, Scragg et coll (130) signalent que seulement 22 pour 100 des
souches sont sensibles à la Gentamicine et 33 pour 100 à la Streptomycine.
5.6. SULFAMIDES ET TRIMETHOPRIME
•
Dès l'introduction des Sulfamides, puis de l'association Sulfamides Tri-
méthoprime en clinique, des Pneumocoques résistant à ces deux produits ont été
signalés avec une fréquence non négligeable.
5.7. LES AUTRES ANTIBIOTIQUES
Il est bon de rappeler que le Pneumocoque, comme tous les Streptocoques,
est naturellement résistant à la Co1istine, à la Po1ymyxine, à l'acide nalidixique
et autres Quino1ones, aux Aminosides et à la Fucidine. En dehors des aminosides,
dont la seule indication reste la Synergie obtenue en association avec les Pénicil-
lines dans le traitement des endocardites ou des méningites, aucun de ces produits
ne doit être utilisé pour traiter une infection à Pneumocoque.
En novembre 1978,2 Pneumocoques de sérotype 23 résistants à toutes les
Pénicillines, Céphalosporines età la Kanamycine ont été isolés. L'évolution vers
des souches mu1tirésistantes justifie la surveillance épidémio1ogique des sérotypes
et des marqueurs de résistances aux produits utilisés.
6.- VACCINATION
Le vaccin dorénavent autorisé aux USA, contient le matériel 'capsulaire
purifié extrait séparément de chacun des types de Pneumocoque que 1Ion souhaite
incorporer dans le vaccin. Chaque dose de vaccin contient 50 ~g de chaque polysac-
charide. Les types concernés sont, dans la c1assificati90 américaines, les suivants
1, 2, 3, 4, 6, 12, 14, 19, 23, 25, 51 et 56 (122).
~
Ces types sont responsables d'au moins 80 pour 100 des bactériémies pneu-
mococciques observées aux USA, la plupart des adultes répond à la vaccination par
une forte montée d'anticorps, mesurée par radio-immuno essai
(129).
- 36 -
L'immunité ainsi acquise ne correspond qu'aux seuls types de Pneumocoques
qui sont inclus dans le vaccin. Cependant, il pourrait se produire
théoriquement
quelques phénomènes d'immunité croisée parmi les types de Pneumocoques assez proches
du point de vue immunologique.
Si l'on administre une nouvelle dose de vaccin, il n'y a pas effet de
rappel ; des études sont en cours pour élucider cette dernière observation. Parfois
même si le sujet possède des anticorps induits par la première injection, on observe
lors du rappel, un phénomène du type Arthus. On ne connait pas encore la durée de
la protection conférée par le vaccin, mais les niveaux
élevés d'anticorps semblent
persister au moins deux ans après l'immunisation.
De nombreux essais sont en cours. Ils portent sur des sujets d'âges très
divers et notamment chez les vieillards, qui, d'orès et déjà, semblent bénéficer
de cette vaccination. Toutefois on n'a que peu d'informations sur la vaccination des
enfants; les premiers résultats indiquent que la réponse immunitaire, avant 1 '.ge
de deux ans, serait assez faible.
t
La tolérance est excellente et avec les vaccins.' . dont on dispose ac-
tuellement, on n'observe chezla moitié des vaccinés un erythème et une légère dou-
leur au point d'injection. Cette réaction locale ne dure que 24 heures environ;
on n'a pas encore enregistré une seule réaction importante.
L'espoir renait de nos jours avec la découverte d'une protéine ribosomale,
isolée d'un Pneumocoque de type 3, qui ~ntraine chez la souris, une protection contre
les Pneumocoques de sérotypes différents (138);si cette découvert~ se confirme, une
grande étape dans la mise au point d'un vaccin efficace sera franchie.
Les différents vaccins utilisés, ou en cours de commercialisation sont
mentionnés dans l'annexe 2.
Connaissant les différents sérotypes contenus dans chaque vaccin et les
sérotypes isolés rencontrés,on pourra calculer le pourcentage des infections pneu-
mococciques que chaque vaccin est susceptible de prévenir.
- 37 -
Etats-Unis
Danemark
Etats-Unis
Danemark
l
1
43
llA
2
2
44
18 A
3
3
45
40
4
4
46
23 A
5
5
47
35 A
6
6 A
48
7 B
7
7 A
49
9 L
8
8
50
7 C
9
9 N
51
7 F
10
lOF
52
47 E
11
11 F
53
11 C
12
12 F
54
15 B \\
13
13
55
18 B
14
14
56
18 C
15
15 F
57
19 A
16
16
58
19 B
17
17
59
19 C
18
18 F
.,,.
60
24 B?
19
19 F
61
35 C
20
20
62
35 A
21
21
63
22 A
22
l
22 F
64
23 B
23
23 F
65
24 A
24
24 F
66
35 B
25
25
67
32 A
26
6 B
68
9 V
27
27
69
39
28
28
70
33 F
29
29
71
38
30
15 A
72
45
31
31
73
46
32
31 F
74
41 A
33
9 A
75
43
34
10 A
76
11 B
35
35 F
77
15 C
36
36
78
. 17 A
37
37
79
28 A
38
41 F
80
42
39
33 C
81
44
40
33 A
82
48
41
34
83
12 A
42
33 B
84
47 A
- 39 -
CHAPITRE
II
L'ELECTROIMMUNODIFFUSION
- 40 -
1.- HISTORIQUE
Il faut remonter à 1909 pour trouver "1 a premi ère techn i que décri vant 1a
détection des antigènes bactériens dans les liquides biologiques par méthode immu-
nologique.
A cette date en effet, Vincent et Bellot (147) sont les premiers a porter
un diagnostic de méningite cérébrospina1e à Méningocoque par la 'précipito-réaction'~
mettant aussi en évidence ce qu 1 ils appell ent des ''prinaipes précipitabZes".
1
Déjà par cette méthode, ils pensent pouvoir faire le diagnostic étiol~
gique de méningite méningococcique dans certains cas où la bactériologie échoue,
il s concl uent ai nsi de façon promonitoi re : "la recherche de la réaction précipi-
tante paratt mériter d'être recol1U7landée cOl1U7le méthode pratique de diagnostic de la
méningite cépébrospinaZ~
à méningocoques de Wei8chselbau~3
surtout en l'absence
de cuZtla"e.
'~
EUe ne nécessite qu'un outiZlage simple. EUe est spécifiqUe et donne
un:e !'éponse rapide. El le permet de faiT'e Ze diagnostio en uti lisant le liquide
oéphaloraohidien anoien3 et dans ZequeZ le diplocoque3 toujours si fragiZe 3 est mort.
Enfin Z~ Méningoo~cr~e pourrait être déMlé par la précipito-réaction même dans un li'"
qu~de oephaloraah~d~en polymicrobien. Il en est de même s'il a été-recueilli dans des
conditions défectueuses3 et s'il .l'enferme des impuretés. Il suffira de mettJ>ë Ze
mélange de sérum agglutinant et de liquide suspeot dans l'étuve à 50-55 0 C3 tempé-
ratUT'e à laquelle Zes baotéries ordinaires ne poussent pas3 et qui permet parfai-
tement à la réacUon de se produire.
Cette méthode de recherche rendrait3 peut être, des ser'Vioes pour le dia-
gnostic étiologique- d'autres infections méningées et même de oertaines maladies
microbiennes dans lesquelles le sang et le liquide oéphalorachidien renferment des
principes précipitab les par le sérwn homo logue. Nous pensons avoir l'oooasion d' é tu-
die~ n~oohainement les résuZtats que donne 3 dans diverses affeotions3
.
la réaction basée su~ le principe que nous venons d'exvoser.
Ces résultats sont confirmés la même année par Lemoine, Gaeh1inger et
Tilmant, Louis et Letulle, qui remarquent cependant par cette méthode la formation
de précipités non spécifiques {92).
Ainsi en 1917, Dochez et Avery l'utilisent les premiers pour la mise en
évidence d'antigène pneumococcique dans le sang et les urines concentrées de malades
atteints de pneumonie à Pneumocoque (48). Cette méthode peut être alors appliquée
à la détermination, du type de Pneumocoque en cause; ceci permet de guider l'admi-
nistration, dans une optique thérapeutique, d'inrnum-·sérum spécifique de type, in-
térêt déjà soulevé par Vincent et Bellot pour les méningites.
Dopter en 1921 note, outre ce manque de spécificité, la possibilité de
rencontrer des résultats négatifs dans des cas de méningite à Méningocoques con-
firmés, (50).
- 41 -
Rake en 1933 et Maegraith en 1935 améliorent cette technique de preclpl-
tation en tube grace au ring test pour révéler la présence de "précipitogènes"
méningococciques dans le liquide céphalorachidien de malades suspects de méningites
(104~121).
En 1937, Alexander relance l'intérêt de cette technique en l'utilisant
non seulement à des fins diagnostiques mais aussi pronostiques. Il fait un paral-
lèle entre l'évolution clinique, l'examen direct du LCR et la mise en évidence de
précipitogènes dans ce même LCR. Il montre déjà que la gravité de la maladie est
liée à l'intensité de la réaction de précipitation (1).
Comme le prévoyaient Vincent et Bellot, cette méthode connut dès ce;te
époque d'autres domaines d'application.
Ainsi Pepper en 1934, Cruickshank en 1938 poursuivent les études sur la
présence de cet antigène dans les urines 02,11S et sa détection dans le liquide
pleural est effectuée par Degara, ~ullowa, Bukantz en 1942.
'
,
A cette époque, Tripp, Frisch et coll. évaluent la quantité de polysac-
charide spécifique dans les poumons après autopsie {64,11~. P1~ieurs études
abordent l'aspect évolutif et pronostique et constatent que la présence d'antigène
dans le sérum est le plus souvent associée à des infections
particulièrement sévères
et que l'antigènémie semble plus fréquemment observée lorsque ces bactéries sont
retrouvées dans le sang des malades {ln. Mais ni 1a_f.réquence, ni la persistance
de cette antigènémie ne sont clairement établies.
Cependant ces techniques de précipitation en tube, sans doute en raison
de leur manque de rapidité (12 heures d'étuve) et de leur manque de sensibilité
ne furent jamais longuement appliquées au diagnostic bactériologique en association
aux techniques classiques (microscopie et culture). Elles tombèrent en dessuétude
jusqu'en 1971.
C'est à cette date qu'Edwards aux Etats Unis (53) puis Greenwood, Wihttle
et Rajkovic au Nigéria (75) ont utilisé la technique de la contre;mmunoélectro-
phorèse (CIE) pour révê1er la présence d'exo-antigènes po1ysaccharidiques spéci-
fiques méningococciques dans les liquides biologiques tels que le LCR et le sang.
Ces auteurs adaptent donc la technique décrite pour la première fois
par Bussard en 1959 sous le nom d'électrosynérèse (lB).
Cette technique avait été utilisée en microbiologie médicale par Dodin et
Brygoo pour la détection des toxines bactériennes en 1969 (49) et par Gocke et
Howe (70) et Prince et Burke (120)pour la recherche de l'antigène Austra1ia en
1970. Elle trouve son application dans la recherche des antigènes bactériens, lors··
que Robinson et Apicell~ montrent la même année que les polysaccharides spécifi-
ques de groupe méningococciques ont une charge négative et se déplacent ainsi vers
l'anode dans un gel d'agar soumis à une différence de potentiel (124).
- 42 -
Cette méthode apparait rapide (30 minutes pour ces auteurs) simple et
bien plus sensible que la double diffusion radiale d'abord essayée par Tuneva11 en
1953 (146) ; elle est alors rapidement utilisée pour la mise en évidence d'antigènes
d'autres bactéries.
En 1971, l'antigène soluble pneumoccique est mis en évidence de cette
manière par Dorff et Ryte1 (51) dans le sérum de malades ayant une septicémie à
Pneumocoque et par O'too1e· et coll. dans le LCR de méningites (1l6).
En 1972, Edwards, Mueh1 et Peckinpaugh (54) recherchent ainsi l'antigène
polysaccharidique d'Haemop~ ~n6luenzae sérotype b, dans le LCR.
•
Ainsi les 3 bactéries les plus fréquemment en cause dans les méningites
pouvaient être identifiées par [ID et la recherche de l'antigène pneumococcique
annonçait les intéressantes applications que cette méthode aurait en pneumologie.
Les premières furent faites par Tugwell et Greenwood, dans les pneumopathies en
1974 (145).
L'intérêt de cette méthode simple, rapide, sensible, spécifique comme
ont conclu ces premiers auteurs est tel que depuis 1974, de nombr~uses publications,
essentiellement anglo-saxonnes lui trouvent sans cesse de nouvelles applications.
Les premiers travaux en langue française appliquant cette technique aux méningites
sont publiés en 1977 par deux équipes Geslin et coll. (66) d'une part Denis et coll.
(42, 43) d'autre part.
D'autres techniques ont été employées cotltemporai-nement à V ~IO,.repo
sant sur le même principe de détection spécifique des antigènes :
L'agglutination de particules de latex sensibilisé par des anticorps
d'abord utilisée pour mettre en évidence des antigènes de CJr..yptoC!oC!c.u1l ne.o6oJu1la.nJ
dans le LCR par Bloomfield et coll. en 1963 (15), fut adaptée à la recherche
d'antigène d'Haemop~ in6luenzae par Newman et coll. en 1970 (112)et celle des
antigènes méningococciques par Séverin en 1972 (132).
En 1975, Olcen et coll. (11~) pratiquent cette réaction d'agglutination
à l~ide du staphylocoque protéine A sensibilisé par des anticorps méningococciques.
Mais ces méthodes bien que sensibles et donnant des résultats quasi-
îl1ll1édiats, n'évincèrent pas l' EID en raison soit de leur manque de spécifiCité et
des problèmes techniques qu'élles' posent,
pour y rémédier, soit du fait qu'elles
ne se prêtent pas à la routine ou sont trop onéreuses.
D'autres ont récemment fait leur apparition. Elles recherchent les anti-
gènes bactériens par des techniques nouvelles mais pas encore dans la routine. Il
s'agit:
- De la technique ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbant Assay) ;
- Des techniques radioimmunologiques.
- 43 -
Depuis quelques années, les auteurs ont cherché à élargir le spectre des
antigènes solubles détectables dans les produits pathologiques par 1'EID, ce qui
, permet de penser que ces investigations n'ont pas encore trouvé leurs limites.
2.- LES EXO-ANTIGENES BACTERIENS PRESENTS DANS LES LIQUIDES BIOLOGIQUES
2.1. DEFINITION
L'hypothèse émise par Vincent (147) et qu'il vérifia avec son élève Bet10t
en 1909 permet de ~onner une première définition, c'est en ces termes qu'il expo~ait
son hypothèse de travai l : "•.. je me suis demandé si te Uquide aéphaZo1'aahidien
des sujets atteints de méningites à diplocoques de WeischseZbaum ne renfe'l'l11erait pas
des produits solubZes searétés par le méningocoque autolysé et susceptibles d'être
mis en évidence par Z'act"Îon du sérum agglutinant ••• "
,r
la mise en évidence adns Ze LeR de sujets atteints de méningites à
Méningoaoques, de "principes préaipitabtes" par un immum-sé1'U1Tl vérifiant aette
hypothèse .•. "
Ce remarquable travail permet d'esquisser une première définition, tou-
jours vraie: "un gVLme S. pne.umon-Ute, pltê.J.Je.nt dan6 un Uquide. biologique (LeR) peu:t
y llb~e.!t une J.JubJ.Jtance ~~véiable. p~ une techttlque immuYlologique a l'aide d'un
-Umwt-J.Jéltum J.Jpéci6ique. Il J.J'aga donc d'un antigène dont la p!té6e.nce e&t ~ée
a de& 6iYlJ.J cLi.a.gnOJ.Jtique&."
Au fil des années, cette définition s'est appliquée à d'autres germes
libérant des antigènes dans les liquides biologiques. En outre, la nature physico-
chimique de ces antigènes -polysaccharides é1éctronégatifs de haut poids molécu1aire-
était définie. ainsi que leur localisation ultrastructurale dans la bactérie:
capsule, couche externe de la paroi. D1autre part, les liquides biologiques renfer-
mant ces antigènes sont apparus de plus en plus nombreux.
De plus, les antigènes éta'ient non seulement détectés au niveau du foyer
initial, mais aussi dans d'autres compartiments en raison de leursolubi1ité.
Pour tenir compte de ces acquisitions, nous pensons être autorisés à pro-
poser avec Legrand (92) une définition plus complète:
"Une. bac.:tvue. /OoJ.,J.Jéda.nt un an.t.<.,gène., te. p(1.w J.Jouvent de natulte POlYM.C--
cJuvU.cü.que en pOhilion J.,u/OeJt6-i.cieUe 1c-apJ.Ju1.e., c-ouc.he. e.ue.!tne
de ta pattai} pou.JL!ta
Ubélte.!t c.e..tui-ci, hi du bactWe& J.te. J.Jont déve.loppêu dClM un 6oye!t in6e.cUi?llX ;
t'aJttigène J.,eJta non -6e.utemè.Ylt Ubélté au. niveau. de c.ehU.-ci., ma.i6 pou.ltlta M6ol.L6elt
danh d' cttJ.t'f.u compall-Üme.nt.6 de t' o!tga.ni..6me. où. i l J.JeJta !tévétabi.e al' tUde d'un Â.mmun-
J.Jbwm J.Jpéci.6i.que pa1t techniqu.e immu.nolagique."
- 44 -
En outre, pour certains auteurs le taux de l'antigène et sa persistance
dans les liquides biologiques semblent avoir une signification quant au pronostic
et à l'évolution de la maladi~ (43).
2.2. DENOMINATION
Les dénominations successivement utilisées au cours des années réf1ètent
l'évolution des connaissances. Par prudence, ignorant la nature des antigènes, les
premiers auteurs parlent de :
- Substance agglutinée: Nicolle 1898 (147) ,
- Principes précipitab1es : Vincent 1909 (147) ;
- Substance soluble spécifique: Dochez 1917 (48)
- Précipitogènes : Rake 1933 (121).
"
Puis les acquisitions, quant à la nature physico-chinl;que et à la loca-
lisation des antigènes font que les dénominations se précisent:
- Polysaccharide Pneumococcique : Cruickshank 1938 (32) ;"
- Polysaccharide libre: Bukantz 1942 (17) ;
- Polysaccharide capsulaire pneumococcique : Degara 1942 (34).
Enfin, les dernières appè1atiomsont de plus en plus caractèristiques de
chaque antigène :
- Antigènes spécifiques de groupe de N~~~~a menin9iti~ :
Edwards 1971 (53) ;
- Antigènes pneumococciques spécifiques de type: Coonrod 1974 (44).
Ces dénominations ont certes l'avantage de la précision, mais sont de
ce fait très spécifiques; aussi préférons,nous,uti1iser le terme d'~XO~9ène4
bac.têlUe.n6 ou pl utôt d' aJtÜgènu bo.ctWe.Jt6 .6ofublu.
2.3. INVENTAIRE DES BACTERIES RECHERCHEES
Une revue de la littérature permet de préciser les bactéries ayant l'ap-
titude à libérer sans les liquides biologiques des exo-antigènes décelables par une
méthode immunologique :
- Nw.6eJt.-ÜJ. mening~
(53, 75)
- Stneptococ~ pneumoni~
(63.86, 139).
.. 45 -
- Haemop~ in6luenzae b,c
{54, 85, 133}
- S:tltep:to C.OCCLUJ. gltou.pe..6 B, V
(68, 103)
- E6 chvr),c.hia. coU KI'
(102, 123)
- Kle~~~a. pn~o~e
(119, 126)
- P.6wdomonao aeJtu.g~0.6a
('13)
- S:taphyloc..Oc.CLUJ. aUlLeu..6
(90)
- LiAtvUa mOnOc.ytogenu
On peut rapprOcher de ces germes, une levure telle que ~yptOc.oc.c.u..6
neo6o~a.n6 (15,7~ qui grâce à son épaisse capsule, possède la même propriété.
Le plté-6ent :tAa.va..U. e-!>t U1Iu:.tê à S. pnewnortiA.e lte..6poMable de 39,2 poWt 100
du mê.n-ingUe-6 badWenne-6 à é:Uolog~e. c.on6~ée ob~eJtvée.6 au. Sénégal depu...<A 1965
..,
3.- L'ELECTRO-IMMUNODIFFUSION (EID)
3.1. LES PRELEVEMENTS
3.1.1. NATURE DES PRELEVEMENTS
Les prélèvements intéressant le diagnostic de méningite sont : les lCR,
les sérums et les urines.
Le prélèvement de sang doit s'effectuer surtube seo; l'hémolyse rendant
difficile la lecture des résultats.
les urines sont centrifugées et filtrées. Oans l'absolu, 1 'EIO'ne néces-
siterait pas, pour le recueil des différents liquides biologiques, de strictes
conditions d'aseptie contrairement aux exigences de la bactériologie, mais cette
affinmation doit être nuancée.
3.1. 2. TRANSPORT VES PRELEVEMENTS
En pratique, l'envoi des prélèvements
peut s'effectuer (si la durée ne
dépasse pas quelques heures) sans précaution particulière. Il est toutefois prê-
férable de les placer dans la glace.
----
---''..
.. - - - -.c--------"--,--.. -------.,.----,----- ...
---
,. . .
c - , . . - . . - - _
-,-..~_"'"""'··;~·~'·_r~-' :,,~_ .._~~..-,,'~< ,.' "'.t.·,',·;.,·~Al"/"",- "> """"~ ,A",;,,;;;.;.,,·,/",,-"'-~'-~'._ -... --e,-;<,:"'"_C _: -",," '. """..-......
~ 46 -
leur résistance à la chaleur et à la dessication penmet à Whittle et à
Greenwood (151)
d'expédier par la poste du lCR sur papier buvard.
De différentes régions du Sénégal et particulièrement de Saint-louis des
lCR sont envoyés au laboratoire ,de Bactériologie du CHU de Dakar. Les délais entre
la date du prélèvement et la réception des LCR sont de deux, trois à quatre jours.
Malgré ces délais assez longs et Te fait que ces pré1èvemen'tlsont envoyés sans con-
dition&particulièreSpar la poste, l'examen en EID de ces LeR donne des résultats
satisfaisants.
3.1. 3. CONSERVATION VES PRELEVEMENTS
Dans les LCR, les polysaccharides
bactériens ne semblent pas se dég\\'àder
à température ambiante.
En revanche ces substances semblent subir dans le sérum une dégradation,
sans doute enzymatique, entrainant leur disparition au bout de quelques jours, ce
qui nécessite la congélation.
~
La conservation de ces antigènes dans l'urine si celle-ci est stérile,
semble être bonne.
Ainsi lors des manipulations (pour moins de 24 heures), les prélèvements
seront placés à + 40 C. Par contre, leur conservation se fera par congélation
à-20° C, pour les utilisations plus tardives.
3.1.4. CONCENTRATION VES PRELEMENTS
Dix microlitres d'un prélèvement suffisent pour être étudiés vis-à-vis
d'un immunsérum. On voit donc que de très petites quantités (moins d'un demi ml)
pour une méningite, suffisent pour faire cet examen. Cependant certains de ces
liquides biologiques (urines) oaonent à être concentrés et nécessitent de plus
grands volumes (un ml pour le LCR ; dix ml pour les urines).
le LCR est souvent analysé pur, mais sa concentration dix à vingt fois
sur cellule Miniconr A25 apparait souhaitable à quelques auteurs, elle n'est pas
en fait indispensable.
Quand aux urines, elles ne sont utilisées, que concentrées (environ cin-
quante fois) sur cellule Miniconr B15.
Ce type de matériel Arnicon offre la possibilité de traiter huit prélève-
ments de 0,75 ml pour la cellule A25, de 5 ml pour la cellule B15. Chaque cellule
peut être rechargée deux à trois fois avec le même échantillon, ce qui permet de le
concentrer à nouveau pour une étude ultérieure éventuelle.
,
"
,:"," ",,"'" ",e",'" '.~:;-
- 47 -
La membrane A25 a une perméabilité sélective de PM 25.000 et la B15
de 15.000 ce qui est très inférieur au poids moléculaire des exo-antigènes re-
cherchés.
On peut ainsi obtenir des réductions de volume jusqu'à 100 fois pour
B15 et 20 fois pour A25, dans un temps variant de 1 à 2 heures selon la nature
de prélèvement.
Michaels (106)et Feigin (59) aux USA ont confirmé que ces techniques
de concentration augmentaient la sensibilité de 10 à 50 fois. Toutefois le coat de
ce matériel ne permet plus de parler de technique de routine.
Les autres prélèvements (liquide pleural, liquide articulaire, pus ~
particulièrement sérum), en raison de leur teneur enprotéines, ne peuvent être~
concentrés efficacement et sont donc analysés purs.
Les autres méthodes de concentrations, soit par 1yphogel qui semble
avoi r donné de bons résul tats chez.. ' es auteurs l'ayant uti 1i sé (132, 145), soi t
par précipitation par l'éthanol, préconisé jusqu'ici par la plupart des auteurs
pour la recherche d'antigènes pneumococciques dans les urines ~9,48} semblent
d'un maniement moins aisé.
4.- IMMUNSERUMS
Les immunsérums utilisés comme source d'anticorps pour la recherche des
antigènes pneumococciques, retrouvés dans la littérature, sont commercialisés par
différents fabricants.
4.1. STATENS SERUM INSTITUT
COPENHAGEN
4.1.1. OMNISERUM
L'Omnisérum omnivalent élaboré par Lund (101)parait faire l'unanimité
dans la littérature pour la recherche des antigènes pneumococciques. Il couvre
les 84 sérotypes de Pneumocoque identifiés, mais semble cependant défaillant pour
détecter certains types :
- 1, 3, 5 pour Kenny {86} qui note des prélèvements positifs avec les
immunsérums spécifiques pour ces types, alors qu'ils étaient négatifs avec l'omn1-
sérum ;
- 3 pour Lund qui conseille elle-même d'utiliser 1'immunsérum spécifique
de type en plus de l'omnisérum (101) ;
- 48 -
Le titre agglutinant de "omnisérum est ~ 1/4
4.1.2. IMMUNSfRUMS POOLS
Neuf pools d'immunsérums couvrent les 46 sérotypes les plus fréquents.
Ils sont désignés par les lettres A à l et chacun contient de 4 à 6 immunsérums
monovalents selon la nomenclature danoise. La composition est la suivante:
A l , 2, 4, 18
B
3,6, 8, 19
C
7, 20, 24, 31, 40
o 9, Il, 16, 36, 37
E 10, 12, 21, 33, 39
F 17, 22, 27, 32, 41
G 29, 34, 35, 42, 47
H 13, 14, 15, 23, 28
1 25, 38, 43, 44, 45, 46, 48
Les titres
agglutinants des immunsérums pools sont ~ 1/8
4.1. 3. ' . 1MMUNSERUMS MONOVA LENTS
46 immunsérums de sérotypes ou de groupe
réagissent avec les types
numérotés 1 à 48 (les N° 26 et 30 n'étant pas utilisés, car ils ont été reconnus
comme appartenant sérologiquement aux types 6 et 15 respectivement).
.
Quelques sérums ont des réactions croisées particuliêrement forte avec
d'autres sérotypes, mais seraient trop faibles si on les absorbait avec ces derniers.
Les trois immunsérums suivants ne sont pas spécifiques de type :
Le 29 réagit avec le sérotype 35 b ;
Le 35 réagit avec le sérotype 47 ;
Le 42 réagit avec les sérotypes 20, 31, 33, 35
(renseignement fournis par Lund)
Les titres agglutinants des immunsérums monovalents sont ~ 1/16 â
l'exception du type 3 ~ 1/8.
- 49 -
4.2. DIFCO
Oes immunsérums pools et monovalents sont également disponibles chez
DIFCO.
La compos iti on des pool s est 1a sui vante, 1es numéros respectent lanomen-
clature américaine :
A
1, 2, 7
B
3, 4, 5, 6, 8
C
9, 12, 14, 15, 17, 33
0
la, 11, 13, 20, 22, 24
E 16, 18, 19, 21, 28
F 23, 25, 27, 29, 31, 32
-~
5.- TECHNIQUE DE L'ELECTROIMMUNODIFFUSION
Cette technique aussi appelée contre-immunoélectrophorèse ou électrosy-
nêrèse est due à Bussard (18).
5.1. PRINCIPE
En règle générale, les polysaccharides bactériens possèdant une charge
électrique fortement électronégative (124) migrent vers l'anode dans un gel sous
l'action d'une différence de potentiel. Les anticorps moins électronégatifs, sont
emportés par le courant d'endosmose vers la cathode.
S'il y a complémentarité entre antigène et anticorps, un arc de précipi-
tation apparait au niveau de la zone d'équivalence.(Fig~e 4)
Les polysaccharides capsulaires de certains sérotypes de S. pneumonlae
semblent cependant faire exception à cette règle, tels les sérotypes 7 et 14
5.2. TECHNIQUES HABITUELLEMENT UTILISEES
Cette technique après quelques améliorations -écartement des trous, tampon,
différence de potentiel appliquée, etc .•. - apportées ces dernières années, fait la
quasi unanimité des auteurs ayant travaillé sur ce sujet. La plupart des chercheurs
ANODE
Flux des ions +
CATHODE
_lI1'
Cf)
-.....
e
............
U1
o
Il
_ ,
IJ
-- ... Force électro-endosmotique
-< Anticorps
Force électrostatique
o
Antigène
Résultante des forces mises en jeu
;1
~ Arc de précipitation
F..igWLe. 4
ETV :-. PhêMmè-nu phy~iqueJ.) mW en jeu
1d '. apJLù Rytel, JLepW pM Le.gJtal1d et coU. (92 , 1261.
"fil"
. . , .
1.
l,
<
.....
- 51 -
ont adopté des données techniques analogues à celles décrites en 1975 par Rytel.
La technique utilisée par Rytel en 1975 est la suivante. Il emploie
des plaques de verre (7 x la cm) recouverte~ par 13 ml d'agarose à 1 pour 100, en
tampon véronal pH 8,2, force ionique 0,05 à 25° C.
Les plaques ainsi préparées peuvent être conservées trois à quatre jours
avant emploi, à + 4° C en atmosphère humide.
Deux rangées de trous de 3 mm de diamètre espacées de 3 mm bord à bord,
sont disposées perpendiculairement à l'axe du courant (Fig~e S).
A l'aide de micropipettes, on dépose 20 ~l d'immunsérum du côté de
l'anode et 20 ~l de liquide biologique ou de préparation antigènique du côté de
la cathode. La plaque est disposée sur une cuve à électrophorèse et reliée pan
du,papier filtr~ (Whatman N° 3) aux réservoirs qui contiennent 200 ml de tampon
1
00 00 0000 00
A
PA
N
M
00 0(9 0000 00
T
,
U
-
+
0'0 00 00 00 00
G
N
S
00 00
El
00 00 00
E
N
R
00 00 00 00 00
E
U
M
00 00 00 00 00
00 00 00 00 00
00 00 00 00 00
00 00 00 00 00
00 00 00 00 00
Fi..guJte 5 : Plaque d' aga/w.ôe pauli. EIV
La cuve est reliée à un générateur qui délivre à la plaque de gélose
une différence de potentiel constante de 400 V (soit une différence de potentiel
de 2,5 V par cm au niveau de la plaque), pendant 30 à 60 minutes à température
ambiante. Les plaques sont lues sans coloration à l'aide d'une loupe (x4) et d'un
éclairage indirect (Immunoilluminator Hyland).
Les plaques une fois lavées et séchées sont colorées au bleu de Coumassie
ce qui permet de les conserver comme document.
La position de l'arc est variable par rapport aux deux trous, selon que
l'on se trouve ou non en excès d' anti gènes (Ftgwe.e. 6), d' où 1 "importance en
- 52 ...
raison des grandes variations de concentration d'antigène dans les prélèvements,
de tester ceux-ci purs, concentrés et même parfois dilués (LCR, liquide pleural).
En effet en excès d'antigène, l lare serait rejeté dans le trou anticorps et pas-
serait inaperçu.
Les arcs de précipitation doivent bien apparaitre sous la forme d'un
. front de précipitation, net et vertical dans la gélose et sont donc à distinguer
des précipitations protéiques diffuses que l 'on observe parfois avec certains
prélèvements (notamment sérums, liquides pleuraux).
Les délais d'apparition des arcs sont notés: 30 minutes, 1. 2, 24 et
48 heures.
La technique utilisée dans ce travail est rapportée dans le chapitre).
"
Equivalence antigène - anticorps
':
Oc 0
Excès d'anticorps
Excès d'antigène
o 0
Grand excès d'antigène
FigWle. 6
LOc..aJ:J.lJa-ti.cm de.6 CUre.,!! de. p!i.ê.upLta.;U..an e.n 6onc.ü.on del.
c.onc.e.nj:1ta.tÂ..oM d' aH,Ugène. U
d 1 anüc..oJtp~.
._~_._.
---OJ
"""...,-,; c., _.._",.~
- 53 -
5.3. CRITIQUE ET ASPECTS TECHNIQUES PARTICULIERS (Tableau 1)
5.3. 1. SUPPORT
Généralement des plaques de verre sont utilisées comme support de la
gélose. Certains auteurs insistent sur la nécessité de les glacer (86) pour em-
pécher une surfusion des solutions entre la gélose et le support et éviter une
perte de sensibilité (13). D'autres utilisent des lames porte objet (63) ou ·en-
core des supports plastiques "Kit Antigen Hy1and" (13, 133, 137) "avec ces plaques
de gélose de fréquents précipités non spécifiques apparaissent; le remp1issag~
des perforations nécessite en outre des volumes importants de l'ordre de 30 à l
40 \\,J1.
5.3.2. GEL
"
Le gel employé par tous les auteurs est un gel d'agarose à 1 pour 100;
l'utilisation de 1 lagar -agar simple augmente le flux d'endosmose, entrainant
une migration plus rapide d~ l'anticorps, faisant ainsi apparaitre les arcs
de
précipitation contre ou même; dans le puits antigène lorsque celUi-ci est en faible
concentration d'un mélange agar purifié et agarose entraine un chauffage et un dés-
sèchement excessif des plaques durant l'électrophorèse (126).
La plupart des auteurs s'accorde pour utiliser une gélose à 1 pour 100.
Une gélose trop molle semble présenter plusieurs inconvénients: difficulté de
pratiquer les perforations (affaissement des berges des trous faussant leur volume,
fragilité notamment lors de la migration, dessèchement rapide).
5.3.3. TAMPON
Dans
la,
littérature. cette gélose est fabriquée en tampon véronal
à pH 8,2 - 8,6 - 8,8 (42, 53, 63, 85)
La force ionique varie de 0,02 à 0,05 suivant la composition du tampon
employé , Rytel note l'importance de ce paramètre Ü26}et accorde une meilleure
sensibilité à une force ionique de 0,05.
Le tampon utilisé dans la cuve à électrophorèse est le même que celui
du gel (même pH, même force ionique) dans le système continu.
Cependant-il existe un système dit discontinu où le tampon est diffèrent
de celui du gel (force ionique 2 à 5 fois plus grande) (25 86
148). C'est celui
utilisé habituellement par Greenwood et Whittle (76) et Edwards (53).
'-
.
J
l
~
1
Temps
Di amètt'e
DistancE::
,
~
!\\ute:Jrs
/J.nn:-2~ .,
Support électroph or6tiq1le
pH
Tampon
Voltage
migr"ation
puits
puits
T€:.:;;érê~ture
\\1
mn
mn
mn
__
i
-_
_.
.
.........
.
..........,
.
-',
-- ..._,-- -_._._~
_
~
"---,,~ ..... ,,....
-"...
- - - - - "
- - '
~l
~i
Barbita1 0,O5~·1
:~enny
1972
0,5% Bausch. Lamb. Agarose
8,6
6V/cm
40
2
4 (8B)
N?
~
Barbi ta1 0, U'1
i'i
~)
';-'
,f.'
l;:'i
â'
Coonrod
1973
1% Marine Collolds Agarose
8,2
Barbi ta1 O. 05~,1
2,5V/cm
60
. 3
3 (BB)
,
NP
,
\\
Whittle
1974
lX Agarose
8,8
8arbital
2,5V/cm
NP
NP
NP
NI'
~i
!
~i
6.6
.,cétate Barbi-
~i
El Refaie
1975
2,5V/cm
30-45
3
2 (88)
~~I
1% Agarose
8,6
tal 0,05 M
"
~':
Coonrod
1976
1% Agaroc:;e
8,2
Barbital
,.2,5V/cm
60
3
3 (BB)
ç:.mbiante
~'.:;
"
t
,
}:
Acétate
gl
Ogumbi
1976
11,; AgarGse
1 8,6
20m A
30'
3
8 (CC)
ambiante
Barbital
U1
~
~
!~" .
Col ding
1977
1
U Agar'ose
8,2
VéronaL +EDTA
2,5V/cm
60
4
3 (BB)
ar.:b: nte
tr
1
>i
f:
,
,~
Véronal
Denis
1977
1 % Indubiose Lab •. P. Biol.
8,6
lOV/cm
30
3
(4) BB)
ambiante
"
Sodique
Acétate
Geslin
1977
1,5% Agarose Behring
8,2
lOV/cm
40
2,5
2,5(B8)
ambiante
Barbital
Dirks-Go
1978
1% Agarose
8 6
Barbital
lOV/cm
30
NP
NP
ambiante
BB = Bord à bord
.JO"
CC = Centre à centre
NP = Non précisê,
Ta.bteau f ; CMa.cA:.éteJAtiql1e.6 de t 1 ~tec.:tJtof.mmwlOcüô ou.6'<'on appUql1ée.
au cüa.gnol>üc. de6 mé..ungilu
it Pneumoc.oque.
., 55 ...
Pour Rytel (126) bien que le système discontinu donne des résultats
plus rapides, il est moins sensible que le système continu.
5.3.4. PUITS
La plupart des publications conseille des perforations de 2 à 3 mm de
diamètre; les puits d'un diamètre supérieur permettent certes d'obtenir une
meilleure sensibilité, mais nécessitent de plus grandes quantités d'échantillons
et diminuent le nombre de prélèvements analysés par plaque, L'écartement des
puits bord à bord varie de 1,5 mm lJ34) à 10 mm (75 ) mai s un espace de 3 l'M1 est
généralement retenu.
5.3.5. DIFFERENCE DE POTEUTIEL
La différence de potentiel appliquée au niveau de la plaque est fonc-
tion de la résistance de la gélose; les valeurs sont de l'ordre, de 2,5 V par cm (29)
à 6 V (86). Ces différences de potentiel ~ermettent d'éviter un chauffage exa-
géré des plaques, sans distorsion; eiles sont suffisantes pour obtenir le complet
développement des arcs.
5.3.6. TEMPS DE MIGRATION
La migration se situe entre 30-GO mn pour tous les auteurs, à tempé-
rature ambiante.
A 5° C un temps de migration plus long est nécessaire. Il suffit en
fait après EID de laisser les plaques à + 4° C de quelques minutes (29) ,à plu-
sieurs heures (26) pour accroitre la définition des arcs.
5.3.7. CAS VES SEROTYPES J ET 14
Certains auteurs ont pu constater la difficulté de mettre en évidence
certains polysaccharides de type, particulièrement le ] et le 14
Ainsi en 1972, Kenny aux Etats Unis, utilisant un système discontinu
à pH 8,6 ne peut pas détecter ces deux types, ceux-ci étant cependant révélés
par double immunodiffusion radia1e. Il suppose qu'ils doivent être, à la diffé-
rence des autres polysaccharides~chargés positivement (86).
- 56 -
Un an plus tard, Coonrod aux Etats Uni s,par UR système continu à
pH 8,2 observe que le sérotype 14 possêâe une bonne mobilité anodique (donc
une charge négative) et que le sérotype 7, a ce pH, a une mobilité é1ectropho-
rétique indifférente; ce qui penmet d'obtenir les arcs de précipitatio~ corres-
pondant près du puits contenant l'antigène par simple diffusion de celui-ci; Il
explique la divergence de ses résultats avec ceux de Kenny par la différence des
techniques utilisées (29).
Refaie et Du1ake en Grande Bretagne en 1975 (55 ) soulignent l'impor-
tance du pH employé pour la recherche des polysaccharides pneumococciques. Ces
auteurs obtiennent les meilleurs résultats en travaillant à pH 6,6 avec un sys-
tème discontinu; le flux d'é1ectroendosmose est diJnlRué' et ainsi", la, migration
anodique de l'antigène équivaut alors presque au déplacement é1ectroendosmotique
de l'anticorps; les arcs sont alors observés presque au milieu des puits. Ai~si
tous les sérotypes apparaissent sauf le sérotype 14.
~
...
'fi"'-
t
Tugwe11 et Greenwood au Nigéria en 1975, travaillant en système dis- "
continu et à pH 8,2 parviennent a détecter de façon satisfaisante, ces sérotypes"
7 et 14 (145), ce que Refaie et DlflIake tentent d'expliquer par la possibilité
.. '
de différence pouvant exister entre les souches britanniques et nigériannes.
, 5.4. SENSIBILITE
L1é1ectroirnmunodiffusion est une technique de précipitation très sen-
sible, Edwards (53) et Greenwood (75) avaient déjA remarqué en cours de leur
première expérience outre l'avantage de la rapidité, une sensibilité nettement
plus grande de cette technique par rapport à la double diffusion radiale (f~~e 1);
pour Kenny l'électroimmunodiffusion est 100 fois plus sensible que la double
diffusion radiale.
ID
p
rID
Fi.gwe.e .,
Compa.Jtwon du ph(!nom~nu phYIli.qU.U m.U en jw da.n.6i ~
l'élect~o~nodi.6ft~on et l'~nodi66Uhion.
:
- 57 -
Fossieck ~3) obtient un seuil de 0,01 ug/m1 pour le polysaccharide
purifié de Pneumocoque sérotype 3 avec "immunsérum spécifique de type.
Denis atteint un seuil de sensibilité de 0,25 wg/m1 ~3).
Coonrod et Rytel situent le seuil de detection entre 25,0 et
0,05 wg/m1 (28).
Ainsi les quantités d'antigènes détectables dans les prélèvements sont
très faibles. Le seuil de détection peut être abaissé par un traitement approprié
des prélèvements (concentration ou dilution).
Seuls Siber et Shaprimsky (134) signalent que 1(addition de 4 pour 100
....
de dextran au gel, pennet une vision plus nette des arcs de précipitation et
augmente la sensibilité de 2 à 4 fois selon les antigènes bactériens.
5.5. AUTRES APPLICATIONS DE L'ELECTROIMMUNOOIFFUSION
L'identification des sérotypes bactériens a l'aide d'immunsérums mono-
spécifiques est possible par cette technique (chapitre 3).
Le dosage des exo-antigènes dans les liquides bio1ogiqu~s et l'étude
de la cinétique de leur disparition sous antibiothérapie, seront étudiés au
chapitre 3.
6.- AUTRES TECHNIQUES RAPIDES CONCURENTES
Of
L/EID
6.1. TECHNIQUES D'AGGLUTINATION
Préconisées par certains auteurs (115,152) en raison de leur gt'ànde
rapidité elles n'ont cependant ~as supplanté 1'EID en raison de leur manque de
spécificité. Elles utilisent principalement comme support le latex (112, 132, 152)
et le Staphylocoque porteur de la protéine A (115).
6.1.1. LATEX
La première application de cette technique est réalisée en 1963 par
Bloomfield et coll. (15}9qui utilisent des particules de latex sensibilisées par des
anticorps anticryptocoque pour détecter des antigènes de C. neo6o~~ dans les
liquides biologiques (sérum et LCR) des malades atteints de méningite à Cryptocoque.
- 58 -
Newman en 1970 applique cette technique à la détection d'antigènes
bactériens de H. bt6fuenza.e type b (112) puis Severin en 1972 à celle des an-
tigènes méningococciques groupes A et C (132).
Enfin Whittle en 1974, reprenant les travaux de ces deux dernières
auteurs applique cette technique à la détection des trois principales bactéries
rencontrées dans les méningites : N. meningit~d~, H. ~6lue~za.e b, S. pneu-
moMite. (152).
Cette méthode a plusieurs inconvénients : d'abord la préparation des
réactifs est longue et relativement délicate pour un laboratoire de diagnostic
médical de routine. La lecture de ce
test est parfois d'interprétation difficile
"quand la réaction est faible,notamment avec le latex sensibilisé par les anticorps
anti-pneumocoque plus granuleux d'aspect (152).
i
Mais l'inconvénient majeur de cette technique est son manque de spé-
cificité : les premiers auteurs l'ayant utilisé (15, 73) avaient déjà noté
l'existence de réactions positivesnon spécifiques avec des sérums contenant le
facteur rh\\C1latoide. Newman et col.l. (112) observent des réactions non spécifiques
pour 2,3 pour 100 des LCR témoins'qu'ils ont étudiés.
Les facteurs responsables peuvent être détruits par un chauffage des
échantillons à 1000 C pendant 15 minutes. Un tel traitement ne sembler
pas
altérer les antigènes de Pneumocoque
~
Ces difficultés techniques et les erreurs diagnostiques qu'elles
peuvent entrainer ont limité l'utilisation de cette méthode. Le nombre de séro-
types pneumococciques gène beaucoup son application au Pneumocoque.
6.1.2. STAPHYLOCOQUE PORTEUR VE LA PROTEINE A
Olcen et coll. (115)ont repris les travaux de Kronvall (89).Ce dernier
typait les Pneumocoques à l'aide de Staphylocoques porteurs de la protéine A
sensibilisés par les anticorps spécifiques.
Cette méthode si elle veut être spécifique, nécessite l'emploi de
protéine A lyophilisée; elle possède la même rapidité que le test au latex, mais
les fausses réactions non spécifiques sont nombreuses.
6.2 INHIBITION DE L'HEMAGGLUTINATION (IHA)
Greenwood et Whittle (77) décrivent ce test, non comme une technique
susceptible de remplacer l'EIO, mais plutôt cormne un complément de celle-ci .
...
- 59 -
Ce test demande une longue manipulation, mais reprp~ente une techniaue
très sensible et peut .donc .être un compléme"t précieux a li EID il est théori-
9
quement appl iqu&f)le'.~au.~Pneumocqqtle.
Au total ces techniques "concurentes" de l'EIO sont assez facilement
appliquables aux Haemophilus ou aux Méningocoques mais leur adaptation à la .
9
recherche des antigènes pneumococciques est plus difficile, car la variété de ces
antigènes complique considèrablement la préparation technique des réactifs et
accroit leur coat considérablement.
'7.- INTERET DE'-'L/ELECTROIMMUNODIFFUSION
7.1. RAPIDITE DE LA TECHNIQUE
..'"
En cas de réponse positive l'EIO permet de rendre un diagnostic étio-
logique dans la demi-heure qui suit la réception des prélèvements.
Les indications sont donc celles d'un diagnostic d'urgence
qui aura
9
de plus le mérite d'être précis. Elle peut permettre ainsi de gagner 24 à 48
heures (délais nécessités par les cultures bactériologiques) pour déterminer
l'étiologie précise d'une infection.
Cette rapidité est très appréciable dans les infections aussi sévères
que les méningites
les pneumopathies aigUes
les septicémies puisqu'elle per-
9
9
met d'emblée de prescrire un antibiothérapie adaptée (19, 150).
7.2.• SIMPLICITE
La description de la technique a déjà mis l'accent sur la simplicité
de celle-ci et sur le peu de matériel nécessaire
chaque laboratoire de micro-
9
biologie médicale peut l'utiliser en routine. Il existe des génératéurs portatifs
qui pennettent .l'il'Pplication de 1. technique sur. le "terrain".
7~3. SENSIBILITE
La sensibilité de cette technique d'immuno-précipitation est très
grande. Elle permet en effet de détecter des taux de polysaccharides de l'ordre
0,0: ~g/ml.
.
- 60 -
Oe si petites quantités détectables en font une méthode de diagnostic
très sensible, permettant de déceler les exo-antigènes de germes détruits éven-
tuellement par antibiothérapie.
Si la sensibilité de cette méthode est un peu inférieure a celle des
techniques d'agglutination, sa meilleure spécificité fait qu'elle a été retenue
par la plupart des auteurs.
7.4. COUT
.
le cqat de la recherche des antigènes pneumococciques est assez faiple
une fois acquis la cuve et le générateur. le gel d'indubiose est peu onéreux
et sert pour UR grand nombre de tests.
p~x de t';ndubiohe : 1 flacon de 250 9 coQte45.000F CFA et le gramme
d'indubiose revient à 180 F CFA. 100 ml de la solution à 1 pour 100 d'indubiose
serviront à préparer 10 plaques ;'~ne plaque de gel revient donc à 18 F CFA.
Reste le coat des immunsérums : 1l omnisérum est cher mais un faible
volume est nécessaire. La quantité d'omnisérum utilisée pour une recherche
revient à un peu plus de 200 F CFA. Il est évident que si, co~ le font certains
auteurs on procède à une concentration préalable pa.r des procédés tels qu'ul-
trafiltration avec le matériel Ami con , la technique perd alors de sa simplicité
et le coat se trouve alors considérablement accru.
7.5. SPECIFICITE DU DIAGNOSTIC
Il existe une grande spécificité de cette technique, notamment par
rapport aux techniques d'agglutination.
En effet, tous les auteurs, ayant étudié des LCR ou des sérums de
témoins non infectés, niant pas noté de précipitation vis-à-vis des immunsérums
habituellement utilisés
Par contre de nombreux auteurs constatent que les sérums antipneumo-·
cocciques réagissent avec des bouillons de culture d'autres espèces bactériennes
(Fig~e !).
.
Le~ concentrations antigèniques obtenue~ dans les liquides biologiques
sont théoriquement suffisantes, pour obtenir de telles fausses réactions. Mais
de telles réactions croisées sont rarement observées avec les liquides biolo-
giques (LeR et sérum), dans le cas du Pneumocoque.
- 61 -
KLEBSIELLA PNEUMONIAE
!
STREPTOCOCCUS
l, 2, lL ~, 6, 7, 8, 9,
PSEUDOMONAS
VIRIDANS
18, 19, 23, 25
AERUGINOSA
HAEMOPH 1LUS +---t 6, 29 ---4 STREPTococcus PNEUMON 1AE 1 - - - 3 4
~ BACILL
INFLUENZAE B
1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 12,
13, 19, 23, 25
l
ESCHERICHIA COLI
Peur limiter ces fausses réactions il est indispensable pour tous
l~s produits pathologiques donnant une réaction positive en EID et dont la
cJlture ne contient pas de Pneuo~coque • de mettre en présence le germe'
obten:J en culture. avec le sérum antir;neumococcique en no pour voir s'il
d')nn~ la r:i~'l1~ réaction que le liquide biologique.
.
La recherche d'une antigèné~ie (le sérum étant moins souvent souillé),
p~ut être utile dans le~ cas délicats.
7.6. I~FECTIONS DECAPITEES
Outt'e les a':antaoes pr§cëdem:r:ent cités. un autre intérêt majeur de
1
c~cte
technique est de pO'Jvoir faire 1e diôgnostic étiologique des infections
décapitées, 1r:! me 1ade aYi".nt reçu une ant i bi othérapi e à l' aveug.l e avant que 1es
pr01~vements bactériologiques aient pu être effectués.
L) ::,;c'"6r;cd0f.!;e est a10r::; .. 10 plus souvent impuissante à isoler le
rer;;:'? "n ca:Jse, c?[)c!::d:'nt, p-;;nrlo.nt pl'lIsieurs jours après la prise d'antibiotique,
lES D~tig~r~s solubilisês dans 185 liqui~~s biologiques sont encore décelables.
Ainsi faire :e diagnostic rétrospectif du germe en cause est donc
p0ss"ibl r"
f~t seule cette technique p~l!t y parvenir rapidement. L'a'tlport de
l 'EID ,.;st c<3::,ital ,'quand on sait la Tr'r:quence des traitements à l'aveugle dans les
~.yrdr'2,nQs m§ningés 2t les dif-i7 icultés diagnost'iques et thérapeutiques qui en
CeC0Ulent.
Ce diagno~;tk rétrosp?ctif sem~)le pouvoir être réalisé encore plus
trrdive:,:ent d:lns les irfections à Pnf:'L'fi'ocoque (42, 43, 66) ce succés de l'EID dans
les infections décGpit~es est confirné par les travaux de nombreux auteurs.
7.7. INTERET nrmr:03TIQUE
En plus des p01ntS d'int6rfts que nous venons de développer, pTu-
:,i-:u:--s vuteurs ont remartwé l'exist~nce d'l!!1(~ relation entr'e le taux et la
p(>,~~is.':çn'::; d~s cm-a.ntigènes bactérirns et l'évolution clinique et pronostique
f:-.':-';'~ ~ cr."nnl icatior1\\ seql1'} l 1es.
63 -
CHAP 1TRE II 1
RESULTATS
- 64 -
Plusieurs travaux récents ont montré l'intérêt de l'é1ectroimmunodif;
fusion dans le diagnostic étiologique des méningites purulentes. Mais ces études
ne portent que sur un petit nombre ,de cas.
Le grand nombrè de méningites hospitalisées à Dakar se prête à une étude
portant sur une grande série continue afin de camparer la bactériologie classique
(examen direct et culture) etl 'électroimmunodiffusion.
Après la description du matériel et des différentes méthodes uti1isés~
les résultats obtenus avec la bactériologie classique et l'E1D vont être exposés
puis comparés â ceux d'autres auteurs.
1.- MATERIEL ET METHODES
1.1. MATERIEL
1.1.1. PATIENTS
Ce travail porte sur une série continue de 307 méningites purulentes
à Pneumocoque, hospitalisées au Centre Hospitalier Universitaire de Dakar, entre
le 1er Janvier 1977 et le 31 Mai 1979.
LCR
L'étude porte sur le LCR qui est prélevé au premier jour de 1'hospita-
lisation. Une partie du LCR prélevé est utilisée pour 1 'étude de sa cytologie et
de sa chimie. L'autre partie est destinée à la bactériologie classique et "EID.
Il peut arriver que seul l'examen du LCR en EID soit demandé.
Le sang est prélevé d'une part en tube sec pour recherche des antigènes
par ErD~ d'autre part sur flacon contenant de 1'héparine pour électrophorèse de
l'hémoglobine.
Le tube de LCR destiné à la culture est soit analysé immédiatement soit
gardé jusqu'à examen à 37°Cdans une étuve, si le malade est reçu pendant la nuit.
- 65 -
Les prélèvements destinés à 1!EID sont étudiés immédiatement ou stockés
à-20° C.
1.1.2. BACTERIOLOGIE CLASSIQUE
Elle utilise des milieux solides (une gélose Muller Hinton et une gélose
au sang cuit) et un milieu liquide au thioglycolate.
Le milieu au sang cuit est placé en atmosphorère enrichie en COz (5 à
la pour 100) .
Pour la cytologie~ on a recours à des cellules hématimétriques de' •
Nageotte.
La protéinorachie est quantifiée par comparaison avec une gamme de
Mestrezat de titre connu.
.."
1.1.3. ELECTROIMMUNOVIFFUSION
Pour pouvoir réaliser l'EID) il faut disposer d'un"certain appareil-
lage et de différents réactifs.
1.1.3.1. App~teittage
Il est constitué :
- D 'w~ généY'ateur de courœ1t type CDS 15 Laboratoi re Sébi a
- D'une cuve 'type S 60 A du même Laboratoi re Sébi a ;
- De lœnes de verre de 10 cm .- ? cm et 2 mm d'épaisseur
- De bandes de papier WhatmcrYl N° ;).
1.1.3.2. Réacti6~
Tampon 'Vél'onal sodique à pH 8,8 de composition suivante
Véronal
47,6 9
Acide chlorhydrique NilO
690 ml
Eau bid;stillée
4,3 l
- 66 -
Gel d'indubiose A 37 Laboratoire Produits Biologiques
En routine il est utilisé à la concentration de l g pour 100 ml de tampon.
Un essai a été réalisé en ajoutant au gel d'indubiose du dextran à la concentra-
tion de 4 9 pour 100 ml pour essayer d'augmenter la sensibilité de la méthode.
Différents immun8é~ums préparés par les laboratoires suivants
Statens Serum Institut de Copenhague
- Immunsérum polyvalent ou omnisérum ;
- Pools d'immunsérum mélange de A à 1 ;
- Immunsérums monospécifiques.
La composition de ces i~unsérums figure au chapitre 2.
V-Z:feo
- Pools immunsérumsmélànge de A à F
- Immunsérums monospécifiques.
Nous avons fabriqué nous même des immunsérums "monospécifiques anti 1,
2, 3, à partir des souches de référence de la collection de l'Institut Pasteur,
et des suspensions antigèniques capsulaires puri fées à partir de ces mêmes souches
Sérotype 1
N° 69 -
2
Sérotype 2
N° 53 - 145
~
Sérotype 3
N° 53 - 146.
1.1.4. ELECTROPHORESE V'HEMOGLOBINE
\\
l'appareillage est classiquement" constitué d'un générateur de courant
et d'une cuve pour électrophorèse.
Les réactifs utilisés sont les suivants:
Plaques d'acétate de cellulose
Bandes de papier Whatman
Tampon véronal sodique à pH 8,6 ;
Solution hêmolysante ;
Colorant (rouge ponceau)
Solution clarifiante.
1.2. METHODES
1.2.1. PRELEVEMENTS
~
Clest la classique ponction lombaire (P.L) sur le malade assis si pos-
sible et penché en avant
sinon en décubitus latéral.
t
- 67 -
La ponction sous occipitale a été plus rarement utilisée.
Dans un certain nombre de cas~ le prélèvement de LCR n'a pas été traité
immédiatement ou n'a pas été placé a 37°C. Bien des échecs de culture sont dus
au simple fait que le liqüide de ponction a attendu quelques heures à la tempé-
rature ordinaire ce qui entraine la mort des germes les plus fragiles.
1.2.2. EXAMEN MACROSCOPIQUE
On a noté l'aspect du lCR :
Légèreme.nt opalescent ou franchement purulent, quelquefois teinté en .
jaune. Parfois une ootoration verdâtre oriente vers le Pneumoooque ;
Hémorragique: le prélèvement est alors renouvelé dans trois tubes
successifs ; le dernier tube sera alors soumis à l'analyse. Les LCR même hémor-
ragiques ont été ensemencés car cette présence d'hématies et de leucocytes peut
masquer une méningite à son début. p~ contre, ces LCR ne peuvent être utilisés
pour l'examen chimique car les résultats n'ont aucune valeur.
Si le LCR ressemble
à celui d'une hémorragie méningée (xanthochromique, trois tubes hémorragiques
etc ... ), il doit être aussi ensemencé car une méningite peut être ~ous jacente.
1.2.3. EXAMENS CHIMIQUES
Ils sont limités pour des raisons techniques au dosage de la protéino-
rachie, grâce à la gamme de Mestrezat après coagulation par l'acide trichlora-
cétique.
1.2.4. EXAMEN CYTOLOGIQUE
L'examen cytologique comporte deux étapes
1.2.4.1. Examen quantitat16
C'est la numération des éléments en cellules quadrillées spéciales
(Nageotte) du type de celles utilisées en hématologie. Les cellules permettent de
compter les éléments contenus dans un volume déterminé de LCR.
- 68 -
Normalement, le LCR ne renferme pratiquement pas de cellules. Certains
LCR purulents contiennent un nombre très élevé de cellules, il peut alors être
nécessaire de les diluer avant.d'effectuer la numération.
1.2.4.2. Examen quaiitŒtt6
C'est l'établissement de la formule. Elle s'effectue après centrifu-
gation pour enrichir la préparation. Le culot servira à faire des frottis;sur
deux lames sur lesquelles les deux colorations suivantes seront pratiquées :
Co1or~tion au bleu de méthylène
Coloration de gram.
La formule est alors établie en parcourant toute la lame à l'objectif 100.
1.2.5. EXAMEN BACTERIOLOGIQUE (F~g~e 9)
L'isolement du germe constitue une étape essentielle car lui seul
permet de porter un diagnostic étiologique et de réaliser l'antibiogramme qui
guidera la thérapeutique.
1.2.5.1. Examen ~ect.
Il est pratiqué sur le culot de centrifugation et peut permettre la
visualisation de l'agent pathogène.
La vision de cocci à gram positif en chainette évoque un Streptocoque.
Devant un aspect de cocci en flamme de bougies, groupés par deux, S~epto~ae~
pneumoni~e sera plutôt évoqué.
Cet examen direct constitue une étape importante, mais il est délicat
et souvent des éléments intra ou extrace11ulaires sont rares ou atypiques. ce
Qui peut donner lieu à des erreurs de diagnostic direct.
Dans les méninoites à Pneumocoque. il n'est Das exceotionne1 d'observer
des germes non capsulés, ayant une morphologie atypique: bactéries de taille
différente,aspects pseudobacillaires, gram douteux etc ...
Sur un certain nombre de LCR" le nombre de bactéries présentes à l'exa-
men direct a été (éterminé en décomptant celles qui sont présentes sur un éta-
lement calibré du LCR.
- 69 -
DËLAI DE
RÉPONSE
/
l''''-~C-Hr-MlE-I
1 CYTOLOG lEI
BACTE~10LOGIE
...
1 H
{ EXAMEN Dr REeT]
IJt>ENTIFICATION
[ JMMUNODIAGNOSTIC 1
DU
CEID, AGGLUTINATION, ,)
GERME
CULTURE
· _ 24 - 48 li
l
ANTIBIOGRAMME
- 48 - 72 H
FiguJle 9 : Tec.hn-ique d'~.tude. du LeR et dé.icti de Jtêpon6e
.. '
- 70 -
1.2.5.2. C~e
Un milieu gé10sé de Muller Hinton, une gélose au sang cuit et un milieu
liquide au thioglyco1ate sont ensemencés avec le LCR. En fonction de l'examen
direct, d'autres milieux peuvent être ensemencés.
Les cultures sont incubées à 37° C, en atmosphère enrichie de 5 a 10
pour 100 de CO 2 .
Tous les milieux sont examinés quotidiennement et conservés à l'étuve
pendant au moins quatre jours. Un lyse verdatre de la g~lose au sang cuit oriente
vers le Pneumocoque et le diagnostic sera confinné par l'examen au Gram des
l
cultures et la s~nsibilité à l'optochine.
Un antibiogramme est mis systèmatiquement en route, à partir du LCR
si l'examen direct est évocateur, sinon à partir de la souche isolée par culture .
..".
1.2.6. ELECTROIMMUNOVIFFUSrON
Il est apparu souhaitable de disposer d'une technique rapide permettant
d'identifier avec certitude l'agent responsable. Elle ne pouvait être trouvée
dans la culture car on ne peut pas diminuer le temps de génération des microbes,
on siest donc adressé à l'[ID.
RECHERCHE V'ANTIGENE PNEUMOCOCCIQUE
1.2.6.1. P~ép~on de la plaque
La plaque est préparée avec du gel d'indubiose A37, qui est fondu à
raison de 1 g pour 100 ml de tampon véronal sodique à pH 8,8, puis coulé sur des
lames de verre décrites ci-dessus. Il est percé de trous de 3 mm (5 rangées de
12 trous), pratiqués à l'emporte-pièce, couplés 2 à 2 et distants de 4 mm bord à
bord.
Le LCR ou le sérum utilisé comme antigène est déposé à l laide de pipettes
capillaires à microhêmatocrites, sous lJn volume de 0,01 ml du côté de l'anode.
Les immunsérums sont pour leur part situés dans les puits du côté de
la cathode.
- 71 -
la cuve est remplie jusqu'à un niveau bien délimité par le même tam-
pon qui a servi à préparer le gel et qui est renouvelé deux fois par semaine.
la liaison tampon gel est réalisée à l'aide d'un pont de papier What-
man N° 3.
1.2.6.2. ~üg~atlon et lectune
le dresseur de courant est réglé pour établir une différence de po-
tentiel de 10 V par cm de gel.
Une première migration de 30 minutes précède une première lecture ; elle
est suivie d'une .deuxième de même durée, d'une
seconde
lecture puis une der-'
nière migration de 30 minutes est effectuée avant examen.
Les plaques sont ensuite laissées en chambre humide pour immunodiffusion
pendant 48 heures et observées toutes les 24 heures.
Une réaction positive se ~sualise sous forme d'un arc de précipitation
entre anode et cathode à un endroit variant avec le rapport antigène anticorps
et le temps de migration. Les arcs sont directement visibles en transillumination
avec une visionneuse.
Il
Afin d'éviter les faux positifs dus à des communautés antigèniques avec
des souillures, la souche, souvent un Bacillus,contaminant le LCR qui a réagi
avec un imrnunsérum est confrontée au même ilTlt1unsérum,. pour savoir si la réaction
positive est due à la souillure. Si tel est le cas, une nouvelle ponction lom-
baire et la recherche d'une antigènémie permettent de trancher.
1.2.6.3. S~otypie
Les lCR ayant donné un arc avec l 'omnisérum sont alors mis systêma-
tiquement en présence des pools A à l du Statens Serum Institut, puis des sérums
monovalents (Fig~e 10) •
.les pools Difco ont été confrontés avec ceux du Statens serum Institut
pour un certain nombre de lCR.
Ca~ particuLiers
Alors que le Pneumocoque responsable est isolé à la culture, il peut
arriver que les antigènes ne soient pas détectables dans le lCR par EID (quantité
d'antigène trop importante, absence de l'antigène capsulaire etc ... ). Dans ce cas,
la souche isolée sera utilisée pour le typage.
- 72 -
Si les pools restent négatifs alors qu'un art ,vait été observé avec
l'omnisérum, la méthode préconisée est "immunodiffusior ~imple qui pennettra de
mettre en évidence éventuellement un Pneumucoque 7 ou 14 ")~)Ur lesquels pour
certains auteurs, "[ID serait tenue 'en échec.
Pour cette recherche en immunodiffusion l 'immunstrum est placé dans un
trou de 3 mm de diamètre à 3 mm du puits central. Le gel ut''1;sé à la même com-
position que celui de l'EID, les plaques placées en atmospht~e humides sont
examinées tous les jours pendant 4 jours.
1
2
~
+
OM NI
LeR
POOL
LCA
MONO
CR
. _ ~
à .... _
AO)O
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10>0
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J
2
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Etape,!> f.,ucee1l!.livu peJtme.-ttant t'ide.nti..M-ca;tloYt e.t le typage
c.ap,6uf.a11te. de. St"ll.e.p.tococ.c.u~ pne,umoMae f.,vc..otype.. 7 paJL
ê.w.de du LeR e,n EIV .
L 2.6 A. r-u,'tage.
La tec:,nique d'électroirnmunodiffusion pennet aussi de quantifier l'anti-
génoracll'ie et: i'antigènémie et de suivre.
l'évolution des antigènes polysac-
charidiques au cours du traitement.
Les dilutions de 2 en 2 des LCR ou sérums et des antigènes polysaccha-
ridiques de référenc~ sont réalisées en eau physiologique.
- 73 -
le leR ou le sérum et ses dilutions sont déposés à l laide dlune pipette
capillaire à microhématocrite, sous un volume de 0,01 ml dans les puits situés
du côté de l.'anode. Il en est de même .pour les antigènes de références ainsi que
leurs dilutions. les immunsérums sont placés sous un même volume du côté de la
cathode.
Le reste de la technique se poursuit comme précédemment.
Le titre des antigènes est déterminé en comparant la plus petite con-
crntration détectable dlantioène dans le l.CR ou le sérum. à la plus petite con-
centration détectable de polysaccharides capsulaires purifiés, en ayant recours
au même immunsérum.
Un exemple de titrage est rapporté sur la F~~une 11.
'0)02
O>OPUR
0)01
,.
0>01:2
0)0°,5
0>01: 4
"
0>00,25
0)01: 8
O)OQ.~ 125
0>01 :16
000,0625
001 :32
o 00~O312
001:64
o OO~O156
001:128
000
001 :256
1 0078
,
Quantité d'antigène dans le lCR : plus petite concentration détectée
de la gamme étalon x plus forte dilution du LCR révélant l'antigène.
Exemple: le LCR contient
0,125 x 32 = 4,0 wg/ml d'antigène.
F.{.Bune. 11 : T..LVtage du antigène.ô pn.e.umOc.occ-i.quu da.n6 te. LCR.
- 74 -
SensibiZité des antigènes à différentes températures
Différentes concentrations d'antigène du Pneumocoque de sérotype 1
(1 ~9, 50 ~9, 500 ~g/ml) sont laissées aux températures suivantes: -200 C,
+ 4° C, + 22° C, + 37° C et + 41° C.
Un titrage des différents échantillons est effectué tous les 2 jours pour
apprécier l'action..
de la température sur diverses concentrations d'antigènes
pneumococciques .
RECHERCHE V'ANTICORPS PNEUMOCOCCIQUES VANS LE LCR ou LE SERUM.
Le protocole utilisé est le même que celui de la recherche des antigènes
mais inversé; le LCR ou le sérum est utilisé comme immunsérum donc placé du
côté de l'anode. Les antigènes po1ysaccharidiquesdu sérotype en cause, à la
concentration de 32 ug/m1, sont placés du côté de la cathode.
Les conditions de migratïon et de lecture restent exactement les
mêmes.
1.2.7. ELECTROPHORESE V'HEMOGLOBINE
Le sang prélevé sur anticoagulant est centrifugé et débarassé du
plasma. On ne garde que le culot globulaire, auquel du réactif hémolysant est
ajouté.
La solution tampon est mise dans les deux compartiments anodique et
cathodique du bac à électrolyse.
Deux papiers buvards Whatman joignent anode et cathode à la plaque
d'acétate de cellulose sur laquelle sont déposés des hémo1ysats à raison de
8 échantillons par plaque.
Pour chaque série, on dispose d'un échantillon tampon constitué d'un
mélange de sang A, F, S, C traité de la même façon que le sang à tester.
Un courant de 350 V est établi pendant une vingtaine de minutes.
La plaque est ensuite traitée par le révélateur (rouge pouceau) puis
rendue transparente par la solution c1arifiante. Elle est ensuite séchée à l'étuve
Les fractions correspondant aux différentes hémoglobines apparaissent
en rouge et il suffit de comparer les migrations avec celles des hémoglobines
témoins pour déterminer la nature de l 1 hémoglobine du malade.
- 75 -
1.3. CRITERES DE MENINGITES PURULENTES
Ont été considérés comme présentant une méningite purulente, les malades
dont les LCR possèdaient les caractèristiques suivantes:
- Examen d.irect et / ou culture positive; si le germe isolé est in-
habituel dans les LCR, il nlest retenu que s'il est retrouvé Tors d'une nouvelle
ponction ;
3
-
Bactériologie négative mais cytologie supérieure à 100 éléments par
mm , formule contenant plus de 90 pour 100 de polynucléaires et 1 ou protéino-
rachie supérieure à 0,75 g/l ;
- Aspect du lCR variable, mais antibiotérapie préalable, histoire et'
tableau clinique. évocateurs;
•
Ces critères peuvent être discutés, mais une revue de la littérature
révèle une grande discordance selon les auteurs .
.."
2.- RËSULTATS
2.1. DONNEES D' ENSEr1BlE
Dans cette étude, 307 méningites hospitalisées au service des Maladies
Infectieuses de Fann du 1er Janvier 1977, au 31 Mai 1979, ont été considérés
comme étant dues
au Pneumocoque au vu de la bactériologie classique et ou de
l' EID.
2.1.1. EVOLUTION VANS LE TEMPS
2.1.1.1. Rêpa/t.t.Uiol1 ~u.,[vant .tu ai'1l1é~Â
les résultats exprimés en valeur relative pour l'ensemble des années
étudiées (1977 - 1978) montrent un léger recul de S~eptocac~ pl1eumania~ par
rapport aux autres agents étiologiques des méningites purulentes.
Afin d'apprécier sur une période pluslongue l'évolution annuelle
des méningites à Pneumocoque, nous rapportons les résultats portant sur une
période de 14 ans (1965 - 1979) (Tab.t~au 81.
- 76 -
Il apparait que dans ce laps de temps, S~eptococ~ pneumoniae est en
progession en valeur absolue.
Ce phénomène pourrait s'expliquer par l'introduction à partir de 1977
de 'IE1D dans le diagnostic de routine des méningites purulentes,mais aussi par
un recrutement plus important du service des Maladies Infectieuses.
Nombre de méningites purulentes
"
..
Années
a étiologie confirmée
à S. pne.u.moniae
1965
72
33
1966
78
27
..
1967
116
,.
37
1968
175
56
1969
201
82
1970
236
83
1971
249
84
1972
256
122
1973
201
78
1974
168
59
1975
173
74
1976
228
100
Total (
)
2153
835
1977
305
135
1978
321
113
, ..,.....
1979'..·..
133
59
Total
759
307
~:
Examen direct et / ou culture
~m
Bactériologie et / ou EID
~;:m Du 01 - 01 - 1977 au 31 - 05 - 1979
Tableau 8 : FILéquence et ltépM:tW.on du mérUngUu pww..teJUu a é.ti..o-
log~e con6~tmée et a S. pneumoniae au CHU de Vakan de~
1965.
'
- 77 -
2.1.1. 2. Rêpal/..:ti.,ti.on en 6onc-üon d~ moUs. Inbi.ue.nce. de -ta -6a.i1Jon
Il a semblé interessant de suivre l'évolution des méningites purulentes
au cours des mois sur la période qui commence en Janvier 1977 et qui se termine
au 31 Mai 1979 (Tabl~au 9) puis de récapituler l'ensemble des deux années 1977
et 1978 sur la 6ig~e 12.
~ 1977
1978
1979
Mois
Méningites
Décés
Méningites
Décés
Méningites
Décés •
Janvier
11
04
10
03
11
02
.
Février
14
03
11
03
09
04
Mars
18
la
09
02
10
OS
"~
Avril
14
07
10
03
14
08
Mai
19
10
12
05
15 ~
10
Juin
06
03
07
04
1
Juillet
11
05
10
06
1
1
Août
04
01
05
03
1
1
l Septembre
10
03
09
05
Octobre
04
04
06
04
1
Novembre
11
05
15
09
1
1 Décembre
13
04
09
5
Total
135
59
113
52
59
29
1
Ta.bleau 9
Répa/r.tJ.,.Uon me.MueUe du mérU.ngU~ à. Pne.umoc.oqu.e. et
d~ déc.è6 de 1911 a 19J9.
Une recrudescence des méningites à Pneumocoque est statistiquement
révélée en fin de saison sèche, les chiffres les plus bas étant enregistrés
lors de l'hivernage IFigune. 12).
- 78 -
Cette observation a déjà été faite par d'autres auteurs.
o vivant
Nb
~ décedé
31
27
26
25
24
~
22
21
21
20-
19
13
9
x
o
J
F
M
A
M
J
J
A
S O N
0
mois
r~g~e 12 RéP~on me~~ueile de6 méningite6 à Pneumoeoque
Obé~tvée6 au CHU de Vakan 01 - 01 - 1911 au 31 - 12 _ 1918.
- '79 -
2. 1. 1. 3. In.nl..ue.nc.e. de. d-iVeJt.4 nactWM Uè.t. au. mttiade.
Inftuenoe du sexe
Une prédominance masculine est observée : 66~5 pour 100 des méningites a
Pneumocoque concernent le sexe masculin (Ta.bleau 10).
les chiffres sont très proches de ceux de Trévoux (142) dont l'étude ré-
vélait un pourcentage de 62~7 du sexe mâle.
~
Total
1979::::
1977
1978
Sexe
.
Nb
%
Masculin
88
72
42
202
66~S
"."
Féminin
47
39
15
103
33~5
~
Total
135
l11:~
59
30S
33 5
t
:~
2 sexes nOn préci sés
:::: du Dl - 01 - 1977 au 31 - OS - 1979
Influenoe de l'âge
le Pneumocoque est retrouvé à tous les ages (fig~eA 13 et 14).
Cependant la majorité des méningites purulentes à S. pne.umoniae. se situe
avant 20 ans : 64 3 pour 100 des cas sont retrouvés dans cette tranche.
t
2.1.2. PROTflNORACHIE ET CVTOLOGIE
les méningites à Pneumocoques s'accompagnent d'une protéinorachie plus êle
que celle observée dans les méningites à autres genmes. Dans tous les cas, la pro-
téinorachie est supérieure à Ot50
g/l (Table.au Il).
Certaines méningites ~urulentes s'accompagnent d'une cytologie faible t
inférieure à 50 éléments par mm
(11,5 %) alors que les germes sont le plus souvent
visibles à l'examen direct et parfois même abondants (Tableau lZ}.
"10
,
f '
,,\\
f\\b ~JS
/;0
30
.:..U
10
o
J
10'
20
________
__
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Vivant 0
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F-igUlle. 13
F~éque.nee. de& ménlng~ a Pneumocoque
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il Pne.u..rnac.oque e.n 6one..-Uon
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Protêinorachie (g~ )
,
Années
.
. .
.a_
"RI _._ _ _ _" _._
...___w
m
fIiII
;JOI,
Total
-étudié
~ 050
O~50 - 0,99
hi P < 2
~2
1977
135
121
-
3,3
44,6
52,1
1978
113
86
-
4,7
43,0
52,3
1979
59
49
-
-
24,5
75 ~7 '
-fI
"'1_ _ _
co
N
ce travail
307
256
-
3,1
40,2
56,6
--
.
iii
Il ' _ A i l ' ' '
1973 - 1976
233
233
3~1
7,8
46,1
43,0
. (22)
.~
TabR.(:'oJl 11 : PJto.téiYl.OIt.ltc.h,Le. dŒM fe.,fJ ménùLg-iJ:.eJ.J il PI1t?.Llmoeoqu.e. (e.xpJtJ.mê.e e.n. %).
~."""~_,,_,,,-."',.w_n:\\Ir'~:~"'''f···'''.lWl:I',~''''-'e-ml-''''Q~'';''''~U''~·._<t+'''
...~ ,.,.-'">;_"-,,,",,..--DIfD$I,_-"
1
Nombre
Cytologie (nombre éléments./mm3)
._...--
_ W . I
II_
1
Années
-'--
-
Total
étudié
< 50
50 - 249
250 - 499
500 - 999
1.000 - 1.499
~ 1.500
a-=-I
-
_'1IlllI'
et
::às
,
1977
135
128
13,3
,4
12,5
7,8
14,1
35,9
1978
113
95
12,6
,7
8,4
5,3
8,4
50,5
1979
59
55
5,5
,0
9,1
3,6
61,8.
•
.._ -...
P .
•
• •
-
--
.,.~
-
•
- ~
ce travail
307
278
11 ,5
16,5
10,4
5,4
10,1
46,0
CP
W
..
.,.,...
...
.
._--_ ....
--~
~
. . . . .
" ' _
1
-
-....-.
1973 - 1976
233
233
8,4
24,6
14,3
8,4
10,8
33,5
( 22)
Tabfeo.u. 1Z
Cytofogi.e dan6 .ee-6 rnérd..l1gUe1.l à Pl1ewnOc.oque.-
l e.x.pJtJmée e.n %).
- 84 ~
2.2. BACTERIOLOGIE CLASSIQUE
Elle porte sur 305 LCR. L'examen direct apporte un diagnostic pré-
somptif rapide dans la demi-heure qui suit la ponction dans 84,6 pour 100 des
cas, ce qui est très appréciable ; mais parfois la vision de cocci non capsulés
même en diplocoques ne permet de conclure.
La culture est couronnée de succès dans 81,3 pour 100 des cas.
Sur 269 bactériologies (examen direct et / ou culture positive) cul-
ture et examen direct sont simultanément positifs 237 fois.
L'examen direct seul est positif 21 fois et la culture seule Il foi~.
La bactériologie est en échec 36 fois (Tableau 13).
Les délais nécessités par la culture sont le plus souvent de 18 à
24 heures, mais dans quelques cas nécessitent 2 à 3 jours pour les méningites
paucimicrobiennes partiellement traitées.
'.'"
~
Total
1977
1978
1979
Nb
': %
+
110
79
48
237
77 ,7
+
-
9
8
4
21
6,9
+
6
3
2
11
3,6
-
-
10
21
5
36
11 ,8
Total
135
111
59
305
100
x du 01 - 01 -,1979 au 31 - 12 - 1979.
Tabte.au 13 : Ru~ annwz.L6 de. ta bactvuolog'<'e. de. 305 méningUelJ
à Pne.wnoc.oque..
2.3. ELECTROIMMUNODIFFUSION
Seulement la prélèvements sur les, 307 n'ont pas été étudiés en EID
_par manque de LCR.
- 85 -
Il apparaît que la séquence omnisérum-pools détecte les antigènes pneu-
mocc~ciques dans 93,9 pour 100 des cas. Le gain des pools par rapport à l'omni-
sérum est peu important (3,4 %et en routine on peut se limiter à l'emploi de
l' omni sérum) •
L'EID 03t en échec dans 6,1 pour 100 des méningites à Pneumocoque dont
le diagnostic a été affirmé par la bactériologie classique, ce qui est remarquable
(Tabte.(lu 14) •
."..,
TOTAL
1E?~
.. Années
f
r-
1977
1978
1979
Nb
~ Omn; 1Pools
%
i lr--+-·-...,;tr:,--B-G----B-S,-,..----S-4-..-...-.--'-2-8B-.---.-7-6-,8--1
!
! -
d'.
17""
l"AO'
45"" .. 15,2
t
1
i
1 +
5
3
2
10
3,4
' B '
..
J
-
1 , - . - - - - t - - - - - - - - - - - - - - j t - - - - - - - - j
i~
~
,
t -
7
5
2
14
4,7
1.
~
•
f.•
T_~,_TA_L
IL..._12_5
11_3
59_ _........_29_7_ _1_0_0_ _
dont 25 pools non passés
........
"" ..-
do~t 4 non passés
pools non passés
....."'
..
.. "11'11"
"
30 pools non passés
Tabteau 14
Ré.6u.lt:a.:t6 annue1..6 de. .e. 1 EIV appUquée
au. cüagn0.6üc. de.
291 mêningUu à Pne.LUrlOc.oque.
DéZai d'appaPition des al'es de pY'éeipitation
L'étude du délai d'apparition des arcs de précipitation s'est faite
~>'lr Il'1 l ()t de 35 LCR.
Après la première migration (30 minutes) le diagnostic est établi dans
31,4 Dour 100 des cas (Tableau 15).
- 86 -
Après une seconde migration de 30 minutes, 91,4 pour 100 des .cas
sont
diagnostiqué$
par l'omnisérum. D'autre part 77,1 pour 100 des pools sont positifs
après 1 heure de migration.
ernps (heure)
0,5
1
1,5
2
24
48
Immunsérums
non
31,4
60,0
2,9
-
2,9
2,9
cumulé
Omni
%
cumulé
31,4
91,4
94,3
94,3
97,2
100
non
..
20,0
';' 57 , 1
14,3
8,6
-
-
cumulé
Poo1s"
%
cumulé
20,0
77 ,1
91,4
91,4
100
-
"
~ Pools utilisés dilués au 1/4
Tablea.u 15 : OUa.<. d' appaJL.U:.<..on du aJLc,.~ de plLêc.i..p.{.:ta.,t..[on e.n Uec.tlto-
..imnunocU66u.ôion en me.fta.n;t en pltuenc.e le LeR et lu
an;tWéJu.u1v., du SWe.n6 SeJlUm In6.tUu:t.
2.4. COMPARAISON [ID ET BACTERIOLOGIE (Tableaux 16 et 17)
Une concordance est obtenue entre EIO et Bactériologie (examen direct
et fou culture) dans 82,4 pour 100 des cas.
La bactériologie (examen direct et culture) compte 12,2 pour 100 d'échec
alors que l~EID n'est en défaut que dalls 6,1 pour Ibo des méninQites à Pneumocoque.
11 peut s'agir pour 1 'EID de méningit~à antigênorachie faible ou dues à des séro-
types pour lesquels cette méthode trouve sa limite.
.
L'EIO est positive et les cultures négatives dans 17,6 pour 100 des
méningites (Fig~e. 15'.
- 87 -
DIRECT +
258/305
=
84,6%
CULTURE +
248/305
=
85 3%
t
BACTERIOLOGIE
Det / ou C +
269/305
;::
88,2%
DIRECT + CULTURE -
21/305
;::
6,9%
DIRECT - CULTURE +
11/305
=
3,6%
DIRECT - CULTURE -
36/305
=
11 ,8%
DMNI +
269/297
--
90,6%
POOLS +
238/275
;::
86 5%
t
OMNI et / ou POOLS
279/297
=
93,9%
E
1
0
DMNI + POOLS -
19/275
=
6,9%
OMNI - POOLS +
10/297
=
3,4%
OMNI - POOLS -
18/297
;::
6,1%
..
EID + DIRECT +
233/295
=
79,0%
EID + CULTURE +
225/295
=
76,3%
EID + CULTURE -
52/295
=
17,6%
COMPARAISON
EID + (0 et 1 ou C) -
36/295
=
12,2%
EID + 0 + C -
16/295
=
5,4%
frD - (D et fou C) +
18/295
=
6,1 %
EID + (0 et / ou C) +
243/295
=
82,4%
EID = OMNI et / ou POOLS +
Tableau 16 : Ré6~ eom~é~ de ta bact~olog~e clah~~que et de
l'EIV appi~quéh au diagnohtie deh méningiteh à Pneumoeoque
- Etude de 295 eah -
.,...,,-
"
""_"!>-···'_'_~~.:.I.-'I_'·'_""":"~""""·""""·"~
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1
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10
2
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21
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1
co
co
12
.
--+
36
1
NF
1
1
2
1
1
1
•
- - l -
1
-
-i·.. ·..
-1
!
Total
228
19
22
10
18
10
307
.
'--_.~"~--,-~._._--------
_
.
.,
.... - . -
""
L.._.
!
.
1
1
l
,
NF : non fait
Tabte.a.u 11 : CompaJta.L~ol1 de. la bac.t:vu.olog-ie. &M.6i.Que. et de. l' EIV a.ppUquée.ô
au cUagI10.6UC. de. 307 mén.ingUu à. Pne.umoc.oque..
'BACTERIOLOGIE
EID
COMPARAISON
....--.
---
"".-....
~
---
~
-.......
-Certitude
Présomption. Echec
Certitude
Echec
.Concordance
Gain
EID
Echec EID
%
100
93,9
88,1
-
--
82,4
~;
50
11 ,8
12,2
~
5,4
-
6,1
0,
IV) A
li
oO+C+ • ~
ogtj ~ni-
o et/ouC+ D+C-
O-C-
o et/ou C+
ou pools +
pool
EID +
EI0+
EI0+
EID -
~
D-C+
Fig~e 15 : Com~~an de id b4ct~otogl~ ~~lque et de l'fIt
•Sêrotypes
4ppUquU au cü.agno~e dei, ml!N-ing1..tu a Pl'teumoc.aqu.e.~
~j
- 90 -
Densi té miarobienne et EID
La densité microbienne dans le LCR a été appréciée comme il a été
dit par' examen di r e c t . '
Il est apparu sur une série de 189 méningites â Pneumocoque qu'il
n'existe aucune relation entre la densité microbienne et la positivité de l'EIO
(Tabtea.u. 18) •
Nb
Densité
Nb
EIO
gennes 1 ml
microbienne
cas
+
%
a
> 10
++++
58
54
93,1
....
7
s
10
- 10
+++
46
44
95,7
6
7
"
10
- 10
++
25
23
92,0
4
6
10
- 10
+
17
15
88,2
4
<10
93 0
-
43
40
,
Tableau. 18
Relation en.t'r.e fu dent>Ué m.tCJtObie.nne da.n6 le LeR et; la.
po~itivUé de l'EIV ~étude de 89 ~-
2.5. SEROTYPIE
La grande mortalité des méningites à Pneumocoque en Afrique est due
2ntre autre à la virulence du genne, au retard à l'institution de l'antibio-
thérapie et au terrain. Des moyens efficaces pour prévenir la morbité et la mor-
talité des pneumococcies peuvent être trouvés dans une immunisation active par
un vaccin polyvalent contenant différents polysaccharides de Pneumocoque. Pour
être efficace. un vaccin doit être préparé avec les types les plus fréquents
retrouvés sur le lieu intéressé.
Aussi, avons-nous essayé de typer 240 Pneumocoques responsables de
méningites à 1'hôpital de Fann.
- 91 -
La nomenclature danoise est utilisée pour désigner les sérotypes.
2.5.1. REPARTITION VES SEROTYPES
Il va de soi que si tous les LCR purulents ont été confrontés à l'om-
nisérum et aux sérums pools, il n'était pas possible pour ceux qui ne réagissent
pas avec les sérums pools de les confronter avec tous les inrnunsérums monovalents
pour des raisons techniques et financières.
L'étude des pools révèle qu'a Dakar les 3/4 des souches sont retrouv~es
dans les pools A et B ; le pool A regroupe plus de 50 pour 100 des Pneumocoque~
(Tableau. 19).
'
---Sé~ +
,.
-
Total
Fréquence %
Pools
.
A
122
4
126
52,5
B
38
10
48
20,0
C
5
-
5
2;1
0
5
1
6
2,5
E
14
2
16
6,7
F
2
-
2
0,8
G
3
2
5
2,1
H
18
6
24
10,0
l
3
-
3,
1,3
Coprécipitations
-
5
5
2,1
Total
210
30
240
100
Tabte.au 19
RéAui..tt:t.t6 de ta -6 vwtlJPJ.e de Z40 P",eumoeoquu
(RêpanrJvtton en~te le6 poolô)
- 92 -
Un certain nombre de LCR réagit avec l 'omnisérum mais pas avec les
pools; on peut donc penser qu'en Afrique de l'Quest t ces Pneumocoques appar-
tiennent à des sêrotypes autres que les 46 sous-types commercialisés par le Statens
Sérum Institut ou ne sont pas révélés par EID (antigènes 7 et 14 notamment}t ce
qui est inexact du moins pour certaines souches comme on le constate sur le
bilan des sérotypes dakarois.
En effet t pour les LCR ne réagissant ni avec l'omnisérum,ni avec les
pools en EIO t les sérotypes 7 et 14 ont été systématiquement recherchés par im-
munodiffusion radiale. De même pour les LCR positifs seulement avec les pools
en EID t la determination du sérotype avec les immunsérums monospécifques corres-
pondants a été réalisé par immunodiffusion radiale. A l'aide de cette technique t
8 sérotypes ont pu être ainsi précisés (Tableau 20.)
Nombre de cas
TOTAL
EID
ID
Nb
%
\\
1
78
-
78
37 t1
S
5
25
1
26
12A
E
'.
6
16
2
18
8 t6
R
"
12
13
-
13
6,2
0
23
12
-
12
5t7
T
3
9
2
11
5,2
Y
2
10
-
10
4t8
p
19
7
-
7
3t3
E
9t18
5
-
5
2t4
S
14
1
3
4
1t9
4
3
-
3
1t4
8 t 24 t 29, 40
2
-
2
1tO
7t 10, 13 t 15
22 t 25 t 32, 35,
1
-
1
Ot 5
.
45 t 46
Total
202
8
210
100
Table.au 20
RépaJL-titl.on du Z10 -6 éJLot!JPu de Pneumoc.oqu.e !(upoVI4able.6
de méYLinglieA pu!l.Utente.6 au CHU de Vak.aA.
- 93 -
Le gain de l'ID n'est pas négligeable pour le sêrotype 14 mais aussi
pour les sérotypes 3, 5, et 6 ; aucun sérotype 7 nia été révélé en immunodif-
fusion.
Dans 4 cas, le sérotype a pu être réalisé à l'aide de la souche, tous
les autres typages ayant été effectués sur le LCR.
Finalement, sur l'ensemble de 297 méningites à Pneumocoque, 240 LCR
ont pu être passés en pool et parmi ceux-ci, 210 sérotypes ont été précisés
(TableLW. 21)
Omni
+
-
E
1 0
Total
Pool.
+
-
NF
+
-
Monovale~
v
..
.
+
202
0
0
4
0
206
".....
..
,~ ... ~"
"......
..
..~
,,""..
26
16
l
6
14
. 63
-
NF
0
!
3
21
0
4
28
Total
228
19
22
10
18
297
~:
Dont 8 sérotypes obtenus en ID : sérotypes 6 (2), 5 (1), 3 (2), 14 (3)
:m 2 sérotypes -19 et 2- précisés sur souche.
~:::~:2 sérotypes -19 et 1- préci sés sur souche.
Tab.teau 21 : Ré..6uUa.:t!J de i' ErO et.. de l'IV app.f.'<.qué-!J Ci la .b êJwttjpie
de 297 mé.nùlgau à Pneumoc.oque.
La répartition des sérotypes est représentée sur le Tableau 20 et la
6-igUlte 16.
Le sérotype 1,
le plus fréquemment retrouvé, neprésente 37,1,
pour 100 des Pneumocoques sérotypables.
Cinq sérotypes les plus fréquents (1~ 5, 6, 12 et 23) recouvrent 70
peur 100 des Pneumocoques typés.
- 94 -
%
Pourcentage
100,0
cllmulatH
00
!')
~
P><
~
91,4
90
P<x
~ ~ ~
85,7 88,1
~
83,3
~
75,2 ~-
~
75
li:
)<
70
:>
.~
~
~
~1'0
64,3 1'0)<...
58,1
~
~
)
)
~
49,5 ~~
50
~
;Il
;>c
;>c
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~
;)C
;)C
37,1 ;)C
~ :llll
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1
-~~
5
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X'
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,
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:»<'
~-
-,
)<.
1
~
~
-'>c
o
~-
J
- 1- 5 6 12 23 3 2 19 9 18 14 4 autres
F-igWte 16 : Répa!l.-tW.cYl du fJ Vto:tYJJe..6 cap~u.la..Vtu pne.umoc.oc.u.qu.u !l.e:tJtau.vé.6
daM 21 0 mê-lu,n9;je~ pU/tu1.e..ntu.
-~
, ' -
.!
- 95 -
~<lm
Séro
NN
1-5m
6-12m
la
2a
3a
4a
5-9a
lO-14a
15-49a ~ 50
NP
Total
types
1
1
3
2
1
1
2
2
9
6
38
11
2
78
5
5
8
6
1
1
-
2
3
-
26
6
-
2
3
4
6
-
-
-
-
1
2
-
18
12
-
4
2
2
- - -
1
1
1
2
-
13
23
-
-
4
5
- 1 -
1
-
-
1
-
12
,
3
-
2
2
2
- - -
-
-
4
1
-
11
2
-
5
2
- - - -
1
-
2
-
-
10
19
-
1
1
1
-
-
-
1
1
2
- -
7
..'"
9
-
-
2
2
- - -
-
-
1
-
-
5
18
-
-
3
1
- - -
-
-
1 ,
- -
5
14
-
1
2
- - - -
1
-
-
-
-
4
4
-
-
2
- - - -
-
-
-
1
-
3
8
1
-
-
- - - -
-
-
1
- -
3
24
-
-
2
-
-
-
-
-
-
-
-
-
2
29
-
-
1
-
- - -
-
-
1
-
-
2
40
-
2
- - - - -
-
-
-
- -
2
7
-
1
-
-
- - -
-
-
-
-
-
1
10
-
-
1
-
-
-
-
-
-
-
-
-
1
13
-
-
-
- - - -
-
-
-
1
-
1
15
-
-
-
- - - -
-
-
-
1
-
1
22
-
-
-
-
- - -
-
-
-
1
-
1
25
-
-
- - - - -
-
-
1
- -
1
32
-
1
-
- - - -
-
-
-
-
-
1
35
-
-
- - - - -
-
-
1
- -
1
45
-
-
-
- - - -
-
-
-
1
-
1
-46
-
-
1
- - - -
-
-
-
- -
1
Total
7
30
36
19
7
3
2
15
8
56
25
2
210
.
.
.
.
m : . )
mois .
a . ans ) NP : non p )
reClse
NN . nouveau ne.
Ta.ble.au 22
'Répa/tt..i...:tion du .6éJratype-o du Pneumoc..QQuu e.n 6onet.<..on. de l'âge..
- 96 -
2.5.2 REPARTITION VES SEROTYPES EN .roNCTION VE L'AGE
L'étude de la répartition des sérotypes en fonction de l'âge des
patients est mentionnée dans le6 tableaux 22. 23 et ta b~9un~ 11.
Enfants
Sérotypes
Adultes
Total
< 2 ans
2-14 ans
Total
1
7
20
27
49
76
5
20
1
21"
5
26
6
9
6
15
3
18
..
12
8
2
".
10
3
13
23
9
2
11
1
12
1
3
6
-
6
5
11
2
7
1
8
2
10
19
3
2
5
2
7
9
4
-
4
1
5
18
4
-
4
1
5
11
3
1
4
-
4
4
2
-
2
1
3
8
1
-
1
1
2
24
2
-
2
-
2
29
1
-
1
1
2
40
2
-
2
-
2
b
autres types
44
-
44
6
10
Total
92
35
127
81
208
a : 7, 10,32, 46 (1 sérotype)
.
-
"b : 13, 15, 22, 25, 35, 45 (1 sérotype)
Tab.iea.u. 23 : Répa/l..t..U.ion du J élto:typu de. Pne..umoc.oque c.he.z l' e.n6a.n:t et
l'a.du.t:te. au Sénégal.
.
) ..
- 97 -
serotypes
1
5
6
12
23
3
2
Nb
enfants
27
21
15
CJ
< 2ans
1
2
3
3
5
5
1().
adultes
1
2()"
Cl
~ 15an8
3G
F-lgWte. 11 : RépaJt.t.,U,[on du .6éAotljpU de. Pneumocoque. lu plu..6
nJtéque.rt-U en 6onction de. l'âge. (étude. de. 210 ca,,~).
5~ U
49
1 -
1Nb
- 98 -
Il apparait que certains sérotypes 5, 6, 23 sont plus fréquents chez
- ;~) enfants +
Le sérotype 5 retrouvé durant la première année de la vie est respon-
sab1e de 5 des 7 méningites néonatales (Tableau 221. Le sérotype 5 n'existe pas
dans les vaccins ant1:pneumococciques actuellement existŒr'ltS.
Il apparait dans ta 6igune 18 que le sérotype 6 est retrouvé chez le
jeune enfant, alors que le sérotype 1 est plus fréquent chez l'adulte.
2.S.3.COMPARAISON VES IM,'vlUNSERUMS VIFCO ET CEUX VU STATENs SERUM INSTITUT
Cette comparaison a été pratiquée sur 69 LCR seulement.
42 immunsérums pools Difco positifs, au cours de ces typages ont donné
des résultats discordants avec- les immunsérums pools et monovalents du Statens
~érum Institut (Tableau 24).
Appartenance
au pool
VraÎ'
Faux
Total
Difco
A
8
2
10
B
17
10
27
C
2
1
3
D
-
-
-
E
-
l
1
..
F
28
-
28
Total
27
42
69
~c 22 direct - culture - EID (S51) -
Ta.bleau 24 : Valeun du œurv.,e.,wmf.. poo.f4 V.i6co appIléuû d'apltèlI
t ''&'e.n.:tL6.ic.a:ti..on du J.JvwtJjpe dé6~6 (S-ta;(e.n6 $eJwm InJ.J.tU:utl
0 - #_. -
# 0
sêrotype 1
Il
.--
5
--- ...
Il
6
•
•
100
.
~~
.-
. .
~.~..
80
_ _ e-
e- _
•
- - v ~ ~ ~-0'"
-
- - e - -
•
'
.
1
.
1
.
60
/,
~~
/
.
40
/
ID
c.o
j
"....
0"....· ...,..
, /
20
/ '
0_0_0_0-'_0_0-#-0_0-. _0_0'"
10
o
NN
1-5m
6-l2m
la
2a
3a
4a
5-9a
10-14a
15-49a
~ SOa
âge
FiaUlte. 18 : FltéQue.n.c.e. du 3 pltinupaux ~0r.otljpe.6 -1, 5, 6- e.n 6on.cüon de. .t'âge.
. {poUltc. e.n.tag e c.umu..e.aü.6 J
- 100 -
D'autre part, pour 22 prélèvements dont l'étude bactériologique
s'est révélée entièrement négative, les immunsérums pools F Difco ont donné
des arcs positifs. Ces résul~ats nontpas été confirmés par les immunsérums pools
du Statens Serum Institut, pas plus que les immunsérums monovalents censés être
contenus dans ce pool F Difco.
Il ne s'agissait pas de méningite à Pneumocoque et dans certains cas-
ne correspondait même pas à des LCR purulents; ces 22 cas n'ont pas été retenus
dans cette série.
2.6. TITRE ET EVOLUTION DES ANTIGENES POLYSACCHARIDIQUES DANS LE LCR
ET LE SERUM AU COURS DES MENINGITES A PNEUMOCOQUE.
2.6.1. TITRES PES A,~rr1GENES POLYSACCHAR1VIQUQUES VANS LE LCR.
Au cours de titrages répétés, il est apparu que les plus petites conc-
~entrations détectables dans les conditions expérimentales déjà décrites sont de
0, 125 IJg /mi poWt S.t/'te.ptoc.oCc.u-~ pne.umoru.a.e..
En utilisant le mode de calcul détaillé au chapitre 2, il ressort que
dans la présente étude (63 LCR), les titres les moins élevés atteignent 0,25 ~g/m1
alors que les titres les plus élevés sont de l'ordre de 512 1J9/ml.
2.6.2. DILUTIONS ULTIMES DU LeR PERMETTANT LA DETECTION DE L'ANTIGENE.
Sur une Série de 63 LCR prélevés à 1 'hospitalisation du malade, la
dilution ultime de liquide permettant encore la détection de l'antigène a été
dëteminée.
Il apparait que dans plus de la moitié des cas, des dilutions du LCR
supérieures ou égales au 1/128 permettent encore la détection. Dans Il cas,
cette dilution était supérieure ou égale à 1/1024 (F.{gwr.fZ- 19).
2.6.3. RECHERCHE D'UNE CORRELATION ENTRE LE TITRE DES ANTIGENES POLY-
SACCHARIVIQUES ET LA DENSITE MICROBIENNE.
Dans le cas des méningites à Pneumocoque, une forte densité microbienne
s'accompagne souvent d'une antigénorachie élevée mais ~paradoxalement~, les
LCR contenant les plus fortes densités microbiennes ne coïncident pas toujours
avec les titres les plus élevés.
- 101 -
Plusieurs hypothèses peuvent être émises :
Il se peut que les germes soient en phase exponentielle~par consé-
quent. avant le stade de la s'ynthëse capsulaire optimale a moins Que la-;solubili-
sation de l'antigène demande un certain délai;
D'autre part~ ceci correspond à des constations faites à l'examen
direct ; certains LCR paucimicrobiens contiennent des germes avec de très grosses
capsules alors que d'autres polymicrobiens ont des capsules à peine visibles;
Ces hypothèses se trouvent appuyées par la constation dans quelques
cas d'une montée transitoire des antigènes capsulaires vingt quatre heures
après instauration du traitement.
Nbca s
15
14
11
11
-
r - - -
10 ..
7
6
"
5 .
5
5
2
1
-
o
1
-',
dil utions
f1P
p
2
4
8
16
32
64
128
256
512 ~l024
Fi.gwr.e. 19
Vil.utioM e.xt.'tèrnu du, LCR peJrmet_tant de Jz.évé.f.eJr.. f' a.n;tigène
paJt EIV -é.lude de. 62 LCR-
2.6.4, RECHERCHE V'UNE ANTIGENEMIE
La recherche d'une antigènorachie par EID a un intérêt indiscutable
_ pour le diagnostic des méningites purulentes. Il est intéressant d'effectuer
- 102 -
parallèlement à cette détection celle de 1'antigènémie en recourant à la même
technique. Dans cette perspective les antigènes ont été recherchés dans le LCR
et le sérum de 94 méningites à. Pneumocoque, sans concentration préalable.
Il apparait globalement qu1une antigènêmie est retrouvée dans 53,1
pour 100 des cas avec antigènorachie décelable. Dans 5,3 pour 100, l'antigène
est présent uniquement dans le sérum (Tableau 25).
LCR
+
-
Nb
'"/0
Nb
%
S
+
50
50,1
5
5,3
E
R
U
-
38
" 40,4
1
1,06
M
Table.au. 25
COlVlé.f.a;t,,[o n. el'l.-t'u'. la pfté-6 e.nc.e d' ant.[g eJle.-6 pneumo c.o c.uQ:UeA
dan6 le. LCR et le .6vLUm da.n6 94 ménJJ1gilu à. Pne.umoc.oQue.. •
(nO)
Comparaison des titpes dr~~tigène retrouvés dans Le LCR et le sérurrl
Les titres antigèniques sont en règle générale plus élevé dans le LCR
que dans le sérum. Le rapport moyen entre titre d'antigène po1ysaccharidique par
ml dans le LCR et titre retrouvé dans le sérum est de l'ordre de 20 avant trai-
tement.
2.7. EVOLUTION DES TITRES ANTIGENIQUES AU COURS DU TRAITEMENT DE
LA MENINGITE
.
L'étude nia pu être poursuiviepour bon nombre de méningit~~à titre
élevé car souvent dans ces cas, le décès est intervenu dans les 24 à 48 heures
suivant 1'hospitalisation. Il est certain que ce fait fausse les résultats, la
persistance des antigènes dans le LCR et le sérum étant semble-t-il d'autant
plus longue que le titre initial est plus élevé.
""'~L;"~"_,"",,,,,-i...' epw l'i'WF ~W #t"'fY'-Z,s,,;ui'g.·w àA'P'ti'" "ji\\it'kPj?'
e*...,-HWi'tfXi& r " ,t?
Mf" 't'trie
"'é'fflyae"YVdnlMftifT.
t
.~
t-"
o
w
o
2
3
5
6
7
S
9
10
Il
12
13
14
Jours après le début du traitement
F-i..gMe. 20 : Evolu.tion. du .t-UJr..e. du antigène6 c.ap61..tWJr.e.6 pneumoc.oc.c.-i..quu
daM le. LeR .60(L.6 :Duute.me.n.t:
"l
• • • • • • • • • • •
-
2
2 ab &
En fonction du matériel exploitable (11 cas) la durée moyenne de
persistance des antigènes décelables est de 3 jours,sans concentration des
antigènes dans le LCR.
Dans un certain nombre de cas, il apparait que les titres des anti-
gènes dans les LCR ont une décroissance plus rapide que celle observée dans
le sérum comme on peut en juger sur la Fig~te ZOo Ce fait peut être utilisé
dans le cadre d'un diagnostic rétrospectif d'une méningite traitée.
Cependant, l'origine de 1 'antigènémie peut être double, on peut raison-
nablement penser que la source d'antigène n'est pas toujours exclusivement mé-
ningée et que des foyers infectieux, simultanés (pulmonaires par exemple)
évoluent parfois en parallèle et libérent eux aussi des antigènes. Cette hypo-
thèse expliquerait la persistance de l'antigène dans le sérum au delà du dix-
neuvième jour dans un cas, et certai~ éliminations massives dans les urines.
2.8. ACTION DE LA TEMPERATURE SUR LES ANTIGENES DU PNEUMOCOQUE
SEROTYPE 1
Pour une période de deux mois et demi, nous n'avons pas observé de
variation notable du tit~edes antigènes quelles que soient les températures
de stockage des LCR (-20°C,
4°C, 22°C, 37°C et 41°C) et les concentrations
d'antigènes (1 ~g, 50 wg, 500 ~g/ml).
Ce fait explique qu'il est très facile de pratiquer une recherche
différée d'antigènes pneumococciques dans le temps ou l'espace, laissant ainsi
prévoir l'utilisation possible de cette technique sur échantillons envoyés même
en pays chauds et en zone tropicale.
Recherche d'anticorps antipneumococciC{ùes
Cette recherche ne nous a permis de déceler que 3 prélèvements con-
teant des anticorps lors de 1'hospitalisation: un sérum et deux LCR.
La technique est vraisemblablement peu sensible pour détecter ces
anticorps.
2.9. MENINGITES A PNEUMOCOQUE ET MORTALITE
Les méningites à Pneumocoque restent en dépit de l'antibiothérapie,
d'une gravité redoutable.
La mortalité est élevée, 45,6 pour 100 (Tableau 26).
- 105
Ces chiffres sont relativement proches de ceux des autres auteurs mais
légèrement inférieurs à ceux de Cadoz et coll. (19) qui signalent un pourcentage
de 52,8.
1977
1978
1979
Total
Nombre
135
113
59
307
Décés
59
52
29
140
%mortalité
43,7
46,0
49,0
45,6
'"
Tableau. 26
MoJtM);té deu m6u.ngUeu a Pneumocoque. à VakaJt
(1917 - 7979)
2.9.1. LETALITE ET SEROTYPE
Pour les 210 Pneumocoques typés, le pronostic de la méningite et une
corrélation létalité-sérotype ont été recherchés (Tableaux 21 e.t 28).
~ Enfants <15ans Adultes ?15ans
Sérotype
%
Nb
01'
/Q ,
Nb
1
37,0
10/27
56,9
29/51
5
47,6
10/21
80,0
4/5
12
25,0
3/12
-
1/1
23
63,6
7/11
-
1/1
Létalité globale
46,5
59/127
57,8
48/83
Table.a.u. 'Z7
Lê.;ta,..t,Uê du, mé.ningUu à Pneumocoque en 6one.t1..on deu 4
pJUn.upaux .6êJtotl:fPU chez l' en6ant e.t l' adu..tte. au. Sénégal.
- 106 -
Les sérotypes 4 et 9 sont particulièrement létaux contrairement aux
sérotypes 14, 19 et 12 qui laissent un grand nombre de survivants.
Mais l'échantillonnage est très faible et nlest pas statistiquement
significatif.
La virulence classique du sérotype l ne nous semble pas globalement
plus grande que
celle de llensemble des Pneumocoques.
~
Total
Vivants
Décédés
Sérotype
Nb
%t
1
39
39
78
50,0
5
12
14
26
53,8
6
9;.
9
18
50,0
i2
9
4
13
30,8
23
4
8
12
66,7
3
4
7
11
63,6
2
3
7
10
70,0
19
6
1
7
14,3
9
1
4
5
80,0
18
3
2
5
40,0
14
4
-
4
0,0
4
-
3
3
100~0
8
1
.1.
1
2
50,0
24
1
1
2
50,0
29
1
1
2
50,0
40
1
1
2
50,0
Autres
5
5
10
50,0
Total
103
107
210
50,0
Ta.bleau 28
Pltono.6Uc. du mên-ingUu à Pneumoc.oque en 6oYLÜon du.
.6 éJtotifpe.
- 107 -
2.9.2.
LETALITE ET ANTIGENEMIE
Cette étude a été réalisée seulement sur 94 malades. ees
sujets décédés précocément (dans les premières 24 heures), n'ont en effet pas
souvent subi un prélèvement de sérum pour recherche d'antig~némie ; il existe
ainsi une distorsion des résultats. Ceux-ci sont consignés dans le Tabteau 29.
En appliquant le X2 , on peut conclure à une différence significative
(P < 0.05) et au mauvais pronostic qui s'attache à l'antigènémie décelable.
~Antigène
'~
,
+
-
Total
Pronos t l C ""'"
Décédé
22
8
30
'.~
Vivant
33
31
64
Total
55
39
94
Tabteau 29
Reeh~ehe d'une co~étatLon entne atttigèném~e et !é~é
-étude de 94 mérUn.gdu à. Pne.wnaeaque -
2.10. MENINGITES A PNEUMOCOQUE ET DREPANOCYTOSE
L'électrophorèse de l 'hémoglobine a été réalisée pour 134 malades at-
teints de méningites à Pneumocoque.
'Les résultats ont révélé dans la population l'existence de 2 drépano-
cytaires homozygotes et 19 drépanocytaires hétérozygotes.
La plus grande sensibilité aux méningites purulentes à S. pneumoniae
chez des drépanocytaires homozygotes se trouve ainsi confirmée. La fréquence
observée pour les méningites à Pneumocoque est de 1,5 pour 100 d'homozygotes
contre 0,12 pour 100 dans la population témoin sénégalaise, le coefficient mul-
tiplicateur est donc 12,5.
- - - -
-
, lOB -
CHAPITRE IV
DISCUSSION
- 109 -
Il est nécessaire de comparer les résultats obtenus par EID à Dakar et
ailleurs dans le monde, afin de connaitre la valeur de la technique utilisée.
Par ailleurs la répartition des sérotypes permet de prévoir en fonction
des vaccins antipneumococciques actuellement disponibles, quelle est la couverture
vaccinale que l'on peut attendre de ceux-ci.
1.- COMPARAISON DE NOS RESULTATS GLOBAUX AVEC CEUX DE LA LITTERATURE
1.1. SUR LE LCR
Si les publications sur l 'EID dans les méni~gttes purulentes sont nom-
breuses, rares sont celles qui font part des résultats obtenus sur des séries
très importantes. Il est apparu intéressant de comparer les résultats obtenus à
Dakar à des données bibliographiquès.
Les excellents résultats obtenus dans la présente série de 297 méningites
à Pneumocoque (antigènes décelés dans 93,9 pour 100 des LCR) sont meilleurs que
ceux signalés par la plupart des auteurs (antigènes révélés dans 76,6 pour 100
des cas.),d'&près les résultats cumulés. Deux faits peuvent être à l'origine de
ce succès ;ils ne sont pas d'ordre technique mais sont imputab1es d'une part:
- Au fait qu'à Dakar, les délais entre le début des symptomes et l'hos-
pitalisation sont souvent beaucoup plus longs qu'en Europe ou aux Etats-Unis où
ont été réalisées la plupart des autres études
- D'autre part à la répartition des sérotypes dakarois bien détectables
en EID ;
- Enfin parce que tous les LCR ont été confrontés systèmatiquement à
la fois aux immunsérums polyvalents et pools.
Le tableau 30 souligne l'importance des résultats dakarois qui portent
sur un nombre de cas comparable à celui de l'ensemble de la littérature.
1.2. SUR LE SERUM
La présente série est la plus importante comme on peut en juger sur le
tableau récapitulatif (Tableau 31). Un nombre comparable de sérums ne se retrouve
que dans la série de Geslin.
Les résultats dakarois sont légérement plus élevés (les antigènes sont
décelés dans 58,5 %des sérums) que ceux signalés par la plupart des auteurs
(antigènes révélées dans 47,3 % des cas d'après les résultats cumulés).
- 110 -
Auteur
Année
Nb cas
Nb no +
%EID +
O'toole
1971
6
5
83,3
Fossiek
1973
6
5
83,3
Myhre
1974
2
1
50,0
Shackel ford
1974
4
2
50,0
Whittle
1974
87
85
97,7
Coonrod
1976
18
14
77,8
<;..
Feigin
1976
14
11
78,6
Ogunbi
1976
17
16
94,1
Colding
1977
35
16
45,7
Dirk-Go
1978
73
47
64,4
Mamoudi
1978
9
8
88,9
Geslin
1979
61
47
77 ,0
Thirumoorthi
1979
5
1
20,0
Cumulés
1973-79
337
258
76,6
<-
Ce travail
1977-79
297
279
93,9
~~ Sont inclus les résultats de Denis, Chiron, Samb et coll.(35, 42, 127).
Ta.b.f.eau. 30 : Re.VUl bibliogJLaph<.que. conc.e.JLnant .f.e.ôItUl1U.a..t6 de. .f.' EIV
appliquée. au. LeR da.n6 tu ménbtgUu à Pneu.mo~oque..
- 111 -
Le titre initial de l'antigènorachie et la répartition des sérotypes
dakarois peuvent également expliquer les meilleurs résultats obtenus.
Auteur
Année
Nb Sérum
Nb EID +
% EID +
Fossie"K
1973
4
3
75,0
Feigin
1976
14
6
42,9
t
•
Hamoudi
1978
2
1
50,0
Geslin
1979
65
33
50,0
<.
~
Thirumoorthi
1979
8
1
12,5
Cumulés
1979-79
93
44
47,3
..
Ce travail
1977-79
94
55
58,5
~~ Sont inclus les résultats dus à Denis, Chiron, Samb et coll. (21, 35, 43).
Table.a.u. 31 : Re.vue b..LbUogltaphique. c.onc.e.ltnant lu ILé.6u.U.a.t6 de. i' EIV
appLiquée. au. .6 é'Lum dan.6 lu métthtg,uu à. Pne.u.moque..
2.- COMPARAISON DES SEROTYPES DE MENINGITES RENCONTRES A DAKAR ET
RETROUVES DANS LA LITTERATURE
2.1. POOLS (Ta.bleau 32)
Il est intéressant de comparer la répartition des sérotypes rencontrés
dans les méningites purulentes à Dakar à celles obtenues dans d'autres pays par
d'autres auteurs.
-
..
:Auteut'
·Ce travail"
Hansman
Lund
Colding
sedaillian
Geslin
Finland
Siegel
Année
1977 - 79
1965-69
1954-59
1976
1968-71
1977-79
1935-74
72-77
Pays
Sénégal
Australie
Danemark
Danemark
France
France
U.S.A.
U.S.A.
&
...-
62:c~:
Nombre de souches
235
67
614
32
. 30
196
:21......,.'''-
S
A (1, 2, 4, 5, 18)
53,6
15,2
20,0
1B,7
13,3
25,8
19,4
19,0
E
B (3, 6, 8, 19)
20,4
25,8
29,3
34,3
36,6
37,1
27,6
38,1
R
C (7, 20, 24, 31, 40)
2,1
-
10,6
18,7
10
3,2
8,7
14,3
0
D (9, Il, 16, 36, 37)
2,6
10,6
7,0
-
-
-
11 ,2
-
of·
T
E (10, 12, 21, 33, 39)
6,8
10,6
7,0
6,2
10
4,B
11,7
9,5
Y
F (17, 22, 27,32,41)
0.9
6.1
2,9
3,1
3,3
-
5,1
-
p
G (29,' 34, 35, 42, 47)
2,1
3,0
3,1
3,1
3,3
4,8
1,0
-
E
H (13, 14, 15, 23, 28)
10,2
28,8
18,7
12,5
23,3
12,9
12,2
19,0
S
1 (25, 38, 43, 44, 45, 46, 48)
1,3
-
1,1
3,1
-
-
3,1
-
~:
Sont inclus les résultats dus à Denis, Chiron, Samb et coll. (35, ~6, 37)
:m
Dont 7 non préci sés
~:~m 4 sérotypes non préei sés
Tabte..a.u 32 : RépaJr/tU.,{.on de..6 Pne..umoc..oQuu 1te...6poMab.te..,.!, de.. méJ'l).ng,uu> en nonc..:t[on du> paoL6 du stateM Se..!tum In.6:tUu:t.
- 113 -
L'étude de la répartition ent~ les pools du Statens Serum Institut révèl
qu'a Dakar 74,0 pour 100 des souches sont retrouvés dans les pools A et B, ce
qui n'est signalé nulle part ~illeurs ; le pool A regroupe A lui seul 53,6 pour
100 des Pneumocoques typables alors que pour les autres auteurs, ce pool ne
regroupe pas plus de 20 pour 100 de l'ensemble.
Cette répartition entre pools a l'intérêt de pouvoir limiter dans un
premier temps le screening aux pools A, B et H en Afrique de l'Ouest.
2.2. SEROTYPES
L'analyse ,des sérotypes révèle la place exceptionnelle des sérotypes
1 et 5 a Dakar. comparée à celles qu'ils occupent dans les autres statistiques
regroupées dans le TaÉleau 33 et dans d'autres revues de la littérature.
Toutefois on est tenté de rapprocher les résultats dakaroisde la si-
tuation signalée par Lund (99) e~tre 1939 et 1947 où les sérotypes les plus
fréquents au Danemark sont les 1 - 3 - 6 - 18 - 2 - 4 - 19, três différente de
celle notée par cet auteur plus tard (99) entre 1954 - 1969 où le type 1 a perdu
la première place et est passé en treizième position.
Finland (6~ révèle lui aussi que le sérotype 1 en première position
de 1935 à 1941 n'est pas classé dans les sérotypes les plus fréquents depuis
1971 ; ceci montre que des variations peuvent être observées dans le temps dans
un même pays.
A noter que des résultats de Girard obtenus à Madagascar entre 1939
et 1949 révèlaient qu'à l'époque un tiers des souches appartenait au sérotype 1 ;
nous avons alors des résultats presque identiques à Dakar avec 37,1 pour 100 des
souches dans le
sérotype
1.
Il est possible que dans les années à venir on constate un changement
sérotypique avec retrait du sérotype 1 comme cela a donc été constaté au Dane-
mark et aux Etats-Unis.
Il reste a savoir par d'autres études menées sur le continent africain
si la grande fréquence du sérotype 5 est une particularité africaine ou seulement
sénégalaise.
3.- COUVERTURES VACCINALES
En fonction des sérotypes contenus dans les vaccins actuels antipneu-
mococciques et la fréquence des sérotypes isolés, nous avons apprécié les cou-
vertures théoriques vaccinales.
** e'
, ire' ")-'4 UW trw
'jth
W1d"l'tn-"'r
temMt:-wy' --R' t"'"
"'"'tRX"C -pene'?%''' NWtt"irt"P'fi'u • .,t W
K If
eto
M'e
N
1
%des différents sérotypes
Sérotypes
Pays
Auteur
Année
Nb cas
1
2
3
5
6
12
23
autres
les plus fréquents
Australie
Hansman
1965-69
67
3,0
0,0
1,5
1,5
11 ,9
4,5
11 ,9
65,7
14, 6, 23, 4, 9, 8, 19
1939-47
-
-
-
-
-
-
-
-
:-
1, 3, 6, 18, 2, 4, 19
Lund
1954-69
614
2,3
3,3
7,5
0,5
8,1
3,4
6,8
68,1
18, 14, 7, 6, 3, 19, 23, 8
Danemark
Col ding
1976
32
-
-
-
-
12,5
-
9,4
78,1
7, 6, 18, 19, 8, 23
Sedail1ian
1968-71
30
-
-
13,6
-
13,6
3,3
3,3
73,3
14, 3, 19, 6, 7
France
Courtieu
1969-78
129
-
-
-
-
-
-
-
-
19F, 7F, 3, 14, 68,' 8, laC, 19A
Geslin
1977-79
62
8,1
1,6
12,9
1,6
14,5
4,8
,: 9,7
46,8
6, 3, 23, 1, 18,4, 19
1
R 0
A
Lund
1970-72
-
-
-
-
-
-
-
-
-
4, 7F, 13, ?, 14
Finland
1935-74
196
1,0
4,1
8,7
2,0
8,2
6,1
3,1
66,8
3, 8, 4, 6, 12, 9, 18
U S A
Siegel
1972-77
25
-
-
4,0
?
16,0
8,0
8,0
64,0
6,7,18,19,12,14,23
~:
Sénégal
ce travail
1977-79
210
37,1
4,8
5,2
12.4
8,6
6,2
5,7
20,0
1, 5, 6, 12, 23, 3, 2
.Jlig~ria
.Tu(!\\-/e11
1975
37
46,0
0,0
5,0
12,0
_ _ _ _ 0,0
_ _ _H"
8,0
O,n
2?,O
1, 5, 12, 3, 4
'~._w.
. .
.-
.. Sont inclus les ré-sultats dus à Denis, Chiron, Samb et coll.
~ Sont inclus les résultats dus à Denis, Chiron, Samb et coll
(35, 36, 37).
Ta.ble.au 33 : FJt~qu.e.nc.e. ,>;t JtépaJLti:UoYi deA !>éJtotype6 Jte..6poiMa.ble..6 de. mérUn.gLtu pl.Vtu.e'~Ylte..6 au SéYl~ga1.
c..ompaltél> aux Jt~..AuUa.t6 obte.Y11L6 daM le. monde..
...
--
----------
- - - - - - - - - -
- - - - - -
~ M S 0
. . Lederle
Merck Sharp &Dohme r:::J Lilly
% 'l'
208
1 21
81
116
1001
T .
1
-1
r 92
1
r
l
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1 r
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8~4
- " -
aO,8
1
1
1
,
7~3
""
~794
1
Ii.d 89,8
74,2 1
69,6
i
1
89,2
64.5_ _
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1
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....
......
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tn
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'il:
'Il"
01
lK)04
Population
< 2ans
~ 14ans
~15ans
;;:2ans
tata le
Fi.gWte 21 : CouveMwteJ.> .théoJti.quu vac.c-<.ncttu e.J1. 6oneti.on de 1.' âge au Sénéga.l.
p',
- 116 -
Il ressort de cette étude, que ces couvertures sont assez correctes
sur l'ensemble de la population étudiée; elles sont meilleures chez l'adulte.
Cependant, ces couvertures' théoriques sont insuffisantes chez le jeune
enfant (F~g~te 21 et Tab!eau 341.
--r- .
---"-T-----r
Age
< 2ans
fi
f
:~ 2ans
1
1
1Popul ation
!
j
Totale
.---.......-;~-----._~..__..."---------J---
MSD
69,6
1 89,8
1
80,9
!
1
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59,8
1
Ph.1
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1
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1
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.....L
•__ t
--'-,_._.
, _ _ _ _ _ _
1
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, _ 1
Table.au 34
CouveJttwLe. t.hêo.Ii.J..qu.e d!Z..~ \\-la.ccin,6 an.:t:.,[pl1elHnOc.uqu.eb en
6on.c.tion de ,Cage. da.M la PC~~)J'.a;t{.on ,~é.f1égafcU,MZ. (exp't,imée e" %).
D'autre part, il parait indispensable d'incorporer dans les vaccins
destinés aux pays de l'Afrique de l'Ouest. te 6~~otype 5 absent, sérotype le plus
fréquemment retrouvé dans les méningites du jeune enfant.
117
CON C L lJ
l o N
- 118 -
Il:.. a. été pO.M.i.ble dan/.) c.e ;t!r.ava)jL d? lteche/tc.hVt fa. ~1a,teUh_ de. ta. te.c.h-
VI....î.que. de i' êled-'to-<'mrru..l.11ocü.6 6u..6.tOrt .6u..-t p!tè.~ de. 300 mê ningiJ.u a Pne.wnoc.oqu.e. t
c. 1 e.~:t à CÜJl.e .6LUr. ta piu..6 gJtOM et> éJU.e me nci-ia1.e..
L' étec:t'toJ.mrnuHodi6 6LLôio n. a. peJuni.!.> .te d.-i.a,g no,~tic. da.iM 93, 9 r:>ou.,'(, Î 00 du c.cu
dOM que l'examen. d1Jl.ec.t et .ta. c.u.t.UVte. é.:tr.t-f_er::t p0.6..{;t.,L6~ da.M JLUP,?c..t.i.ve.me.l'Lt
84.6 et gi ,3 paUli:. 100. Van.ô 12,2 pOUle 100 .f' UeUAoJJYlmtuwd.i.66tû,,[on Q,ô(wle. pe..Jl.nt0~
de. poJr..:teJt UI'!. d,[agH0.6ÛC. é:t.iaiog.tc(w?. Cet.te. te.chl7l..que pV1.mU eV[ e.~ net un diagno.6tic.
daY'<-6 .<~u mén.-ingael; déc.ap-<..tée6 !.lM 9 e.·'L"l1e tJLê e.t LUt exame.n di..6{é/té dal'W te. .:te.mp-6
au -el e.4pac.e.
La JLec..he'1.c.he du a.nü.ge.n.e/) pnelJ..'lwc.oc.c:.i.que;~ ,6,.[mu1.tanêment avec. de.~ iJrt-
tl'!Wué-".mn6 (omrr.JAé'1.WIl.et pooL6) a. pVl.rrU..!.:l d'ob.:ten.-{!L de.6 Jt.é6iLUax.6 6J..gn.i6·t.c.a;t{ve.me.rtt
me...Wv1J'c.6 que. .i 1 e.nb e.mbte du pubuc..auovvS cumufê.e& due!.> aux au;tlte..J OlLte.uJi.1l
(p < ; .10-'8) ; f..a fLa.iMn de ce:tte, HfLéuJ.:,.~.ue.lI peu,t 6etJrouveJr. au,.4.(;{ daM .te. 6a.U
que .R.e.~ mér0tgUeô ont ,!louvent été ho!:>p..f..,tc.L{/"~ê.e1; taJ'~\\i{..ve.meYl.t et peut .:tVUh~ C!LL6~,[
à ta. Jtépa/t.üti,oy/' pM-tic.u..Lt.èfLe du J.:.vw:type-.6.
U. a Ué pM-1ible da.n6 ce.t.te. thèfJe d'é66ec..tue.Jl. le [JiteJrvÎ.eJt biJ:.a.vl du .6e..-
'1.Otypel> de PI1e.wnQc.oque.
-<.mpUquéll dan;.~ -tu mé.n.i.ngUç~J., a6tica.ineÂ. Vu pallieu-
.(,a.~jtê,!J'te.of.Jo}'L:tentde cette. ayr..a1y~e de, .ta i'Lépa.'l..ti;t{on, C0't-iaJ.nô -6VtotyprZi> {.6ê.lW-
type Tl -6eke;C'wuVeJ1X à t.Ol.1.t âge, d' 01.l,.,t'Le6 ont u.ne (JJLécLLtec:tJ..on POUA ta peüte
en6ance (.6 VtotlJpe. 5 pM exemplel ; la mo/ut.aLLté ut éga1.ement Uée. à la v.i,'tuie.nce.
P'tOpJte. à. eVI,:ta..uu ,~é..'wt!H.Je.6 ; e.n.6.{.n eeAta.-iM -ôé.JLO.:typCl..!.J dorr.t: te 5 'La/te da.n6 te.
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1
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Au to.ta1. ..ee..b Pne.umoeoque-s J.Jie.nf...t.6--ié..6 bt? rLê..patr.ti6,5ent paJt.m-.t 26 .6éAotljpe6
dJ&f,é)te.rvC6 pOLtt
tuquÛ.6 on poMé.daJ....t .t(J~ J:.mrnuY'.!.Jê,'1u..'il,) c..oft.J1..e,;,pondar<J"J"
ma...t.b 6,9
pOUit 100 de6 Pi1e.umocoqu.c,~ appaJr;t(erII'le.vtt à. de...6 -6élto!.:atJ(! au:t'<.f:....6 quee..e.,s 46 c.arnm'û't-
ci..ai</.lé...& .6tl/'1 ie;~ 84 e.w.ta.nt6.
.,
Ce..tte.. a.HatY6e. de/.) -6éJr.otype.6 pe/7.J!1e;t d'app.-'riZc.-i.efL ..te ,5pe.c;t;''re [J/w.:tecteuft
de.,~ Vac.UI'!.6 an.üpneumoc.occ..i.QUe..6 déjà exu:tarlU .6 'il6 é..taierd: appf..iqué.6 a.LL Sénégalfc
e..t .ür.d.i..que. que -6i.... .t'on pe.Me fLee.owd.JI.. a ce.tte. pltaphlj,f..a..x.i.e en A{uqu.e., J..!;"tiQJU1
nêC.G6.6a.{,-'te. d' ùtC.MPCltelt de...!> a.r..tig ène..1l potlj.6 aechevr../.d.LqLLu abJ.J ent.6 de...:> vac..('.AY!/~
Q.rrlêJr....{ca.JYLô eit pa.tr.tic.uJ.ie..JL te.. .6Vr..otype. 5 ..
Lit te.ehn.i.qu.e.. de. .i' Ue.c.;t.'tci.....i1unul1ocii Ù6u.-!;io n gJuic.e. à. .6 e...5 appLLci1t.i.o 11,1, à
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g't.âc.e. a.. .t' emp.toJ.. de généJta...te.uJr..6 pOJr...ta.b.e.e.6 et f'..e6 pJtHt1t.e..'tf.. .'té/~tttto;to61V!. place.
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- 119 -
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ftipaJr.-tU[on du l.Jélto.tljpU pnp.uInoc.oc.uQUe.6 danI.J .e.('~ JLég'<'onl. a.tLtJtu que c.e..Ue du
Cap-Ve."u.
- 120 -
B 1 B LlO G R A PHI E
- :21 -
1.
ALEXANDER H.E.
>
Pronostic of the precipitin test in meningococcus meningitis.
J. Clin. Invest. 1937~ 16, 207-211.
2.-
ALEXANDER H.E.
The hemophilus group. in Bacterial and mycotic infections of man.
R. OUBOS Ed. Pitman Medical Publishing Co. London 1965.
3.-
ANDERSON P., JOHNSTON R.B, SMITH D.H.
Human serum activities against H. influenzae tyre /:L
J. Clin. Invest. 1972~ 51, 31-38.
4.-
ANHALT J.P., y~ P.K.W.
Counterimmunoelectrophoresis of pneumococcal antigens. Improved sensitivity
for the detection of type VII and VIII.
J. Clin. Microbiol. 1975,2,510-515.
5.-
APPELBAUM P.C., SCRAGG J.N, BOWEN J.A., BHAMJEE A.~ HALLETT A.F., COOPER R.C.
Streptocaccus pneumoniae resistant to penieillin
and chloramphenicol.
Lancet. 1977, ii. 995-997.
6.-
AUSTRIAN R.
Current status of bacterial pneumonia with especial reference to pneumo-
caecal infection.
J. Clin. Pathol. 1968,21, Suppl n° 2, 93-97.
7.-
AUSTRIAN R.
The current satus of pneumococcal disease and the potential utility of
polyvalent pneumococcal vaccine.
In. Proceedings of the International Conference)dfthe Application Df
vaccines against viral, rickettsial and bacterial diseases of Man.
American Health Organization WHO. Washington. 1972.
8.-
AUSTRIAN R.
Prevention of pneumococcal infection by immunization with capsular poly-
saccharides of Streptococcus pneumoniae : current status of polyvalent
vaccines.
J. infect. Dis, 1977~ 136, 38-42.
9.-
AUSTRIAN R., BUETTER C.~ DOLE M.
Problems in the classification of pathogenic role of alpha non hemolytic
Streptococci of the human respiratory tract.
Streptococci cross-reacting with pneumococcal polysaccharides.
in Streptococci and Streptococcal diseases.
WANNAMAKER L. W, MATSEN J. Ed.
- 122 -
.0.-
AVERY O.T.,CHICKERING H.T.,COLE R. et al.
Acute lobar pneumonia prevention and serum treatment.
Rockefeller Institut for Medical Research. Ed.
Monograph 7. New York. 1917 ..
1.-
AVERY O.T.~GOEBEL W.F.
Chemo-immunological studies on the soluble specifie substance of pneumo-
coccus. 1. The isolation and properties of the acetyl polysaccharide of
pneumococcus type I.
J. Exper. Med. 1933, 58, 731-755.
2.-
BAIRD D.R.,WHITTLE H.C.,GREENWOOD B.M.
Mortality from. pneumococcal meningitis.
Lancet. 1976, ii, 1344-1346.
3.-
BARTRAM C.F.,CROWDER J.C.,WHITE A.
Detection of pseudomonas antigens~ in pseudomonas disease.
WASH. D.C. Amer. Soc. Biol. 1973, 19-21.
4.-
BARTRAM C.E.,CROWDER J.C. BEELER B.,WHITE A.
Diagnosis
of bacterial diseases by detection of serum antigens by
couterimmunoelectrophoresis,sensitivity and specificity of detecting
pseudomonas and pneumococcal antigens.
J. Lab. Clin. Med. 1974,83, 591-598.
5.-
BLOOMFIELD N.• GORDON M.A. ,ELMENOORF D.F.
Detection of Cryptococcus neoformans antigen in body fluids by latex
particle agglutination.
Proc. Soc. Exp. Biol. 1963,114,64-67 .
.6.-
BROUGHTON D.D.,MITCHELL W.G. ,GRASSMAN M HADLEY W.K., COHEN M.S.
Recurrence of groupe B streptococcal infection.
Pediatries, 1976, 89, 183-185.
17.-
BUKANTZ s.e., DEGARA P.~.,BULLOW J.G.
Capsular polysaccharide in the blood of patients with pneumococcic
pneumonia : detection incidence, prognostic significance and relation
to therapies.
Arch. Intern. Med. 1942, 69, 191-212.
18.-
BUSSARD A.
Description d'une technique combinant simultanément l'électrophorèse et
la précipitation immunologique dans un gel : l'électrosynérèse.
Biochem. Biophys. Acta 1959, 34, 258-263.
- 123 -
19.-
CADOZ M., DENIS F., CHIRON J.P., SOW A., DIOP MAR I.
Pronostic et traitement des ménin~ites à Pneumocoque en Afrique.
402 observations.
Nouv. Presse Med. 1979, 8, 573-576.
20.-
CALDER M.A., Mc HARDY V.U., SCHONELL M.E.
Importance of pneumococcal typing of pneumonia.
Lancet. 1970, i, 5-7.
21.-
CHIRON J.P., DENIS F., M'BOUP 5., CADOZ M., DIOP MAR I.
Méningites purulentes. Intérêt de la recherche d'une antigènémie.
Etude de 134 cas par électroimmunodiffusion.
Nouv. Presse ~ed. 1978,7,3366-3367.
22.-
CHIRON J.P., DENIS F., SAMB A., SOW A., DIOP MAR I.
Etude bactériologique des méningites endémosporadiques au CHU de Fann
à Dakar (1974-1976).
Bull, Soc. Med. Afr. Noire Lgue.~ Frse. 1977,22,221-230.
23.-
CHIRON J.P., LAURENS A., DENIS F., DIAKHATE L., SOW A., CADOZ·M., DIOP MAR I
Méningites purulentes et drépanocytose.
Med. Afr. Noire. 1979, sous presse.
24.-
COLDING H., LINO I.
Counteri!TlTlunoelectroohoresis in the diagnosis of bacterial meningitis.
J. Clin. Microbiol. 1977,5,405-409.
25.-
COMBRIDGE B.S., SHAW C.
Immunoelectroosmophoresis using discontinuous buffer system to detect
Australia antigen in pooled human plasma.
Lancet. 1971, ii, 1184-1185,
26.-
COONROO J.O.
Physical and immunologic properties of pneumococcal capsular
polysaccharide produced during human infection.
J. Immunol. 1976, 112, 2193-2201.
27.-
COONROO J.O., BAUER R.
Latex agglutination in the diaqnosis of pneumococcal infection.
J. Clin. Microbiol. 1976, 4, 168-174.
28.-
COONROO J.D., RYTEL M.W.
Oetermination of aetioloQY of bacterial meningitis by counterimmunoelec-
trophoresis.
Lancet. 1972, i, 1154-1157.
4
124 -
29.-
COONROD J.O., RYTEL M.W.
Detection of type-specifie pneumococcal antigens by counterelectrophoresis.
I. Methodology and immunologie properties of pneumococcal antigens.
J, Lab. Clin. Med. 1973, 81, 770-777.
30.-
COONROD J.O., RYTEL M.W.
Detection of type specifie pneumococcal antigens by counterimmunoelectro-
ohoresis.
II - Etiologie diagnosis of pneumococcal pneumoniae.
J. Lab. Clin. Med. 1973, 81, 778-786.
31.-
COURTIEU A.L., MOINARD D., ANDRE M.
Sêrotypie des Pneumocoques dans la rêgion de Nantes.
in Prévalence de l'infection pneumococcique et sa prophylaxie vaccinale.
Colloque Villeneuve Saint-Georges, 1979.
32.-
CRUICKSHANK R.
The urinary excretion of pneumococcus polysaccharide in lobar pneumonia.
J. Lab. Bact. 1938,46,67 ...
33.-
DANG-VAN A., TIRABY G., ACAR J.F., SHOW W.V., BOUAN CHAUD D.H.
Chloramphenicol resistance in Streptococcus pneumoniae. Enzymatic
acetylation and possible plasmide linkage.
Antimicrob.Agents. Chemother. 1978, 13, 577-583.
34.-
DEGARA P.F., BULLOWA J.G.M., BUKANTZ S.C.
Pneumococcal capsular polysaccharide and ant'ibody in pleural exudates.
A~er. J. Med. Sei. 1942,203,376-383.
35.-
DENIS F.
Apport de la contreimmunoêlectrophorèse pour le diagnostic des mêningites
purulentes a Pneumocoque.
in Prêvalence de l'Infection pneumococcique et sa prophylaxie vaccinale.
Colloque
Villeneuve Saint-Georges 1979.
36.-
DENIS F.A., CHIRON J.P., M'BOUP S., CADOZ M.A.
Pneumococcal meningitis serotypes in West Africa.
Trop. Med. Hyg. (soumis).
37.-
DENIS F., CHIRON J.P., M'BOUP S., CADOZ M., DIOP MAR I.
l'électroimmunodiffusion appliquêe au diagnostic et au typage capsulaire
de 220 mêningites a Pneumocoaue.
Rev. Inst. Pasteur Lyon. 1979. (sous presse).
- 125 -
38.-
DENIS F., CHIRON J.P., M'BOUP S., CADOZ M., DIOP MAR J.
Diagnostic étiologique des méningites purulentes par l'électroimmunodif-
fusion et la bactériologie classique.
Résultats comparatifs sur une série continue de 700 méningites purulentes.
Méd. Mal. Inf. (sous presse).
39.-
DENIS F~,CHIRON J.P., SAMB A., DIOP MAR I.
Diagnostic étiologique rapide des méningites purulentes par mise en évidence
dans le LCR de certains constituants bactériens. Nouvelles perspectives
ouvertes par l'électroimmunodiffusion, le test à la limule et l'aggluti-
nation passive.
Méd. Afr. Noire, 1978, 25, 225-238.
40.-
DENIS F., CHIRON J.P., SAMB A., DIOP MAR 1.
L'électroimmunodiffusion et les autres moyens de diagnostic rapide dans
les méningites purulentes.
Med. Afr. Noire, 1979 (sous presse)
41.-
DENIS F.~ SAMB A., CHIRON J.P.
Bacterial meningitis diagnosis by counterimmunoelectrophoresis.
JAMA, 1977, 238, 1248-1249.
42.-
DENIS F., SAMB A., CHIRON J.P., SOW A., DIOP MAR 1.
Détection rapide et identification spécifique des antigènes bactériens
par électroimmunodiffusion dans 80 méningites purulentes.
Nouv. Presse Med. 1977,6,3391-3396.
t3.-
DENIS F., SAMB A., CHIRON J.P., SOW A., DIOP MAR 1.
Titre et évolution des antigènes polysaccharidiques dans le liquide
céphalorachidien et le sérum au cours des méningites purulentes (Etude
de 65 cas par électroimmunodiffusion).
Bull. Soc. Med. Afr. Noire Lgue. Frse. 1977,22, 240-247.
44.-
DEVITT L., DOUGLAS R.M.
Pneumonia in New Guinea. II. Pneumococcal serotypes and the possible
utility of polyvalent vaccines of capsular polysaccharides.
Med. J. Aust. 1973, 1, 49-52.
45.-
DEVITT L., RILEY 1., HANSMAN D.
Human infection caused by penicillin insensitive pneumococci.
Med. J. Aust. 1977, 1, 586-588.
Ah.-
DIOP MAR 1., DENIS F., CADOZ M.
Epidémiologie des méningites purulentes à Pneumocoque en Afrique.
Aspects cliniques et sérotypiques.
in Prévalence de l'Infection pneumococcique et sa prophylaxie vaccinale.
Colloque Villeneuve Saint-Georges 1979.
- 126 -
47.-
DIRKS S.I.S., ZANEN H.
Latex agglutination, counterimmunoelectrophoresis, and protein A coagglu-
tination in diagnosis of bacterial meningitis.
J. Clin. Path. 1978, 31, '1167-1171.
48.-
DOCHEZ A.R., AVERY O.T.
The elaboration of specific soluble substance by pneumococcus during growth.
J. Exper. Med. 1917,26,477-493.
49.-
DODIN A., BRYGOO E.R.
Technique modifiée d'électrosynérèse : son application à l'identification
rapide des germes, des toxines, d'antigèneset d'anticorps.
C.R. Soc. ,Biol. 1969, 162, 1444-14447.
50.-
DOPTER C.
L'infection méningococcique.
Baillière et fils Ed. Paris".l921.
51.-
DORFF G.F., COONROD J.O., RYTEL M.W.
Detection by immunoelectrophoresis of antigen in sera of pâtients with
pneumococcal bacteriema.
Lancet. 1971, i, 578-579.
52.-
ECKFELDT J., EDERER G.M., OETJEN R.
Counterimmunoelectrophoresis and bacterial meningitis.
JAMA. 1978, 239, 615-616.
53.-
EDWARDS E.A.
Immunologic investigations of meningococcal disease.
l - group' spécific Neisseria meningitidis antigens present in the serum
of patients with fulminant meningococcemia.
J. Immunol. 1971,106,314-317.
54.-
EDWARDS E.A., MUEHL P.M., PECKINPAUGH R.O.
Diagnosis of bacterial meningitis by counterimmunoelectrophoresis.
J. Lab. Clin. Med. 1972, 80, 449-454.
55.-
EL REFAIE M., DULAKE C.
Counterimmunoelectrophoresis for diagnosis of pneumococcal chest infection.
J. Clin. Pathol. 1975, 28, 801-886.
56.-
ESPAZE E., DECHELOTTE P., COURTIEU A.L., GILLOT F., DE BERANGER P.
Pneumococcies néonatales.
Nouv. Presse Med. 1977, 32, 2892.
- 127 -
57.-
ESTELA L.A., HEINRICHS T.F.
Evaluation of counterilnmunoelectrophoresis procedure in a clinical
laboratory setting.
Amer. J. Clin. Pathol: 1978, 70, 239-243.
58.-
EVANS W., HANSMAN D.
Tétracycline résistant pneumococcus
Lancet 1963, i, 451.
59.-
FEIGIN R.D., WONG M., SHACKELFORD P.G., STECHENBERG B.W., DUNKEL L.M., KAPLAN S•.
Countercurrent immunoelectrophoresis of urine as well as of CSF and blood
for diagnosis of bacterial meningitis.
J. Ped~atr. 1976, 89, 773-775.
60.-
FELDMAN W.E.
Concentrations of bacteria in cerebrospinal fluid of patients with bacterial
meningitis.
.
J. Pediatr.
1976, 8, 549~552.
61.-
FELDMAN W.E.
Relation of concentration of bacteria and bacterial antigen in cerebrospinal,
fluid to prognosis in patients with bacterial meningitis.
New Engl. J. Med. 1977, 296, 43~-438.
62.-
FINLAND M., BARNES M.W.
Acute bacterial meningitis at Boston CHy Hospital dur'ing 12 selected
years, 1935-1972.
J. Infect. Dis. 1977, 136, 400-415.
63.-
FOSSIECK R., CRAIG R., PATERSON P.Y.
Counterimmunoelectrophoresis for rapide diagnosis of meningitis
due to Oiplococcus pneumoniae.
J. Infect. Dis. 1973, 127, 106-109
64.-
FRISCH A.W., TRIPP J.T., BARRET C.D., PIDGEON B.E.
The specifie polysaccharide content of pneumonia lungs.
J. Exp. Med. 1942, 76, 505-510.
65.-
GEIDELBERGER M., NIMMICH W.
Additionnal immunochemical relationship
of capsular polysaccharide
of Klebsiella and pneumococci.
J. Immunol. 1972,109,1337-1344.
- 128 -
66.-
GESLIN P., LEGRAND P., LEMOINE J.L., SQUINAZI F., BORDERON J.F.
Mise en évidence d'antigènes ~actériens par contreimmunoé1ectrophorèse
dans les infections à N.. meningitidis, H. inf1uenzae sérotype b, S. pneumoniae.
Intérêt diagnostic et aspect évolutif.
Path. aio1. 1977,25,711-721.
67.-
GESLIN P., LEGRAND P., SQUINAZI F., BRIOUD E., LERAILLEZ J., LEJEUNE J.A.
Intérêt diagnostique de la recherche des polysaccharides spécifiques par
contreim:nunoélectrophorèse dans les méningites de l'enfant (SO cas).
Nouv. Presse Med. 1976, S, 1431-1432.
68.-
GESLIN P., LEGRAND P., SQUINAZI F., HAUSDORF M.
Recherche par contreimmunoé1ectrophorèse d'antigènes bactériens solubles
dans divers produits pathologiques (151 cas).
Nouv. Presse Med. 1977,6, 1853-1856.
69.-
GESLIN P., MARCHADIER
J.M.; DUBLANCHET A., LEGRAND P., BORDERON J.C.,
DURIEUX R., WITCHITZ J.L., BURE A.
Sérotypie pneumococcique. Inventaire multicentrique en milieu hospitalier.
Annéee
1977-1978.
in Prévalence de l'infection pneumococcique et sa prophylaxie vaccinale.
Colloque Villeneuve Saint-Georges 1979.
70.-
GOCKE O.J., HOWE C.
Rapid detection of Austra1ia antigen by counterimmunoelectrophoresis.
J. Immunol. 1970, 104, 1031-1032.
71.-
GOLDSTEIN F.W., AZOULAY G.
Actualité du Pneumocoque.
Concours Med. 1977, 14, 5888-5896.
72.-
GOLDSTEIN F.W., DANG VAN A., BOUANCHAUD D.H., ACAR J.F.
Evolution de la résistance aux antibiotiques des pneumocoques et répartition
de leurs types capsulaires.
Path. Biol. 1977,25,173-180.
73.-
GODMAN J.S., KAUFMAN L., KOENIG M.G.
Jiagnos;s of the cryptococcal meningitis. Value of immunologic detection
of cryptococcal antigen.
New.Engi. J. Med. 1971,285,434-436.
7(.-
GOTSCHLICH E.C., LIU T.Y., ARTENSTEIN M.
!:uman immunity to the meningococcus III. Preparation and immunochemica1
p~operties of the group
A, group
B and group
C meningococcal polysaccharides.
J. Exp. Med. 1969, 129, 1349-1365.
- 129 -
75.-
GREENWOOD B.M., WHITTLE H.C.
Antigen negative meningitis due ta group A Neisseiria meningitidis.
J. Infect. Dis.,1974,-129, 201-204.
76.-
GREENWOOO B.M., WHITTLE H.C.
Nature of the antigen present in the cerebrospinal fluid
and serum of patients with group A meningococcal meningitis
Clin. Exp. Immunol. 1974, 16,413-417.
77.-
GREENWOOO B.M., WHITTLE H.C.
Diagnosis of pyogenic meningitis.
Lancet 1976, ii, 688.
78.-
GREENWOOO B.M., WHITTLE H.C., DOMINIC-RAJKOVIC o.
Countercurrent immunoelectrophoresis in the diagnostic of meningococcal
infections.
Lancet, 1971, ii, 519-521~
79.-
GUINET. R.
L'électrosynérèse et ses applications.
Rev. Inst. Pasteur Lyon. 1978, Il, 1-33.
80.-
HAMOUDI A.C., FLEER M.A.
Counterimmunoelectrophoresis and bacterial meningitis.
JAMA, 1978, 240, 1954.
81.-
HANSMAN D.
Serotypes of pneumococci in pneumonia, meningitis and other pneumococcal
infections.
Aust. N. Z. J. Med. 1977,7, 267-270.
82.-
HANSMAN o.
Choramphenicol resistant pneumococci in West Africa.
Lancet. 1978, i, 1102-1103.
83.-
HEIDELBERGER M., JANN K., JANN B., 0RSKOV F., 0RSKOV 1., WESTPHAL O.
Relation between structures of three K polysaccharidesof E. coli and cross
reactivity in antipneumococcal sera.
J. Bact. 1968, 95, 2415-2417.
84.-
HILLEMAN M.R., Mc LEAN A.A., VELLA P.P., WEIBEL R.E., WOODHOUR A.F.
Polyvalent pneumococcal polysaccharide vaccines.
Bull. Wld. Hlth. Org., 1978, 56, 371-375.
- 130 -
85.-
INGRAM D.L., ANDERSON P., SMITH D.H.
Counterirnmunoe1ectrophoresis in the diagnosis of systemic disease
caused by H. inf1uenzae b.
J. Pediatr. 1972, 81, 1156-1159.
86.-
KENNY G.E., WENTMORTH B.B., BEASLEY R.P., FOY H.M.
Correlation of circu1ating capsu1ar polysaccharide with bacteremia
in pneumococca1 pneumonia.
Infect. Immunity. 1972, 6, 431-437.
87.-
KEOGH E.V., NORTH E.A., WARBURTON M.F.
Adsorption of bacteria1 polysaccharide to erythrocyte.
Nature, 1~48, 161, 687.
88.-
KISLAK J.W.
Type 6 pneumococcus resistant to erythromycin and 1incomycin.
New. Eng1. J. Med. 1967, 276~ 852.
89.-
KRONVALL G.
A rapid slide ,gglutination method for typing pneumococci by means of
specific antibody absorbed to prote;n A containing staphy10cocci.
J. Med. Microbio1. 1972,6,187-190.
90.-
LAMPE R.M., CHOTTIPITAYASUNONDH T., SUNAKORN P.
Detection of bacteria1 antigen in pleural f1uid by counterimmunoe1ectrophoresis.
J. Pediatr., 1976,88,557-560.
91.-
LAXER R.M., MARKS M.I.
Pneumococca1 meningitis in children.
Am. J. Dis. Chi1d. 1977, 131,850-853.
92.-
LEGRAND P., LEMOINE J.L.
Apport de la mise en évidence d'éxoantigènes bactériens dans divers liquides
biologiques au diagnostic des méningites et des pneumopathies.
Thèse Médecine
Créteil 1977.
93.-
LEGRAND P., LEMOINE J.L., SQUINAZI F., GESLIN P.
Apport de la contreimmunoé1ectrophorèse au diagnostic des pneumococcies.
in Prévalence de l'infection pneumococcique et sa prophylaxie vaccinale
Colloque Villeneuve Saint-Georges 1979.
94.-
LIU T.Y., GOTSHLICH E.C., DUNNE F.T., JONNSEN E.K.
Studies on the pneumococca1 polysaccharides.
II - Composition and chemica1 properties of the group Band C po~ysaccharides.
J. Biol. Chem. 1971,246,4703-4712.
- 131 -
95.-
LIU T.Y., GOTSHLICH E.C., JONNSEN E.K., WYSOCKI J.R.
Studies on the pneumococcal pclysaccharides.
I - Composition and chemical properties of the group A polysccharidE
J. Biol. Chem. 1971, 246, 2849-2858.
96.-
LUND E.
Laboratory diagnosis of pneumococcus infections.
Vld. Hlth. Org. 1960, 23, 5-13.
97.-
LUND E.
Polyvalent diagnosis sera.
Acta. Path. Microb. Scand. 1963, 59, 533-536.
98. -
LUND E.
On the nomenclature of the pneumococcal types.
Internat. J. System.Bacterio1. 1970,20,321-323.
99. -
LUND E.
Types of pneumococci found in blood, spinal
fluid and pleural
exsudate during a period of 15 years (1954-1969).
Acta. Path. Microbiol. Scand. 1970, 78, 333-336.
100.-
LUND E., PULVERER G., JALJASZEWIEZ J.
Serological types of Piplococeus pneumoniae strains
isolated ;n germany.
Med. Microbiol. Immunol. 1974, 159, 171-178.
101.-
LUND E., RASMUSSEN P.
Omn;serum. A diagnosti(pneumococcus serum, reacting with the 82
know types of pneumococcus.
Acta. Pathol. Microbiol. Scand. 1966, 68, 458-460.
102.-
Mc CRACKEN G.H.
Rapid identification of specifie etiology in meningitis.
Pediatries. 1976, 88, 706-708.
103.-
Mc CRACKEN G.H., FEL OMAN W.E.
Editorial comment : streptocoeeus B.
Pediatrics.1976, 89, 203-204.
104.-
MAEGRAITH B.G.
The diagnosis of meningococcal meningitis from the spinal fluid.
Laneet, 1934, 17-19.
- 132 -
105.-
MERRILL C.W., GWALTNEY J.M., HENDLEY J.O., SANDE M.A.
Rapid identification of pneumococci Gram stainvs the quellung reaction.
New·Engl. J. Med. 1973,288,510-512.
106.-
MICHAELS R.M., POZIVIAK C.S.
Counterimmunoelectrophoresis for the diagnosis of pneumococcal pneumonia
in children.
J. Pediatr. 1976, 88, 72-74.
107.-
MOODY G.I.
Methodol\\ogy
and applications of countercurrentimmunoelectrophoresis
in microbiology.
Laboratory practice 1976, 575-580.
108.-
MOUSTARDIER G.
Bactériologie médicale 4e Ed.
Maloine Ed. Paris 1972.
109.-
MYEROWITZ R.L., GORDON R.E., ROBBINS J.B.
Polysaccharides of the Jg~nus &acillus cross reactive with the
capsular
polysaccharides D. pneumoniae III, H. influenzae, N. meningitidis A
Infect. Immun. 1973, 8, 896-900.
110.-
MYEROWITZ R.L., TURCK M., RaBBINS J.B., SCHENEERSON R.
Urinary tract E. coli with cross reaction antigens to
encapsulated pyogenic bacteria.
-
Lancet~ 1972, ii, 250-253.
111.-
MYHRE E.B.
Rapid diagnosis of bacterial meningitis. Demonstration of bacterial~antigen b
counterimmunoelectrophoresis.
Scand. J. Infect. Dis. 1976, 6, 237-239.
112.-
NEWMAN R.B., STEVENS R.W., GAAFAR H.A.
Latex agglutination test for the diagnostic of H. influenzae meningitis.
J. Lab. Clin. Med. 1970, 76, 107-113.
113.-
NEUFELD F.
Uber die agglutination der pneumokokken und über die theorien der
agglutination.
Z. Hyg. Infect. Kr. 1902, 40, 54-72.
114.-
OGUNBI O., ODUGBEMI T.O.
Counterimmunoelectrophoresis technique in laboratory
diagnosis of
bacterial meningitis.
Trop. GeOgr. Med. 1976, 28, 141-144.
- 133 -
115.-
OlCEN P., DANIELSSON D., KJELLANDER J.
Use of
protein A countaining staphy1ococci sensitized with antimeningococca1
antibodies for grouping'N. meningitidis and demonstration of meningococca1
antigen in cerebrospina1 f1uid.
Acta Path. Microbiol. Scand B, 1975,83,387-396.
116.-
O'TOOlE R.D., THORNTON G.F., MUKHERJEE M.K., NEOGY K.N.
Cerebrospinal f1uid immunog10bu1ins, A possible role for antibody.
Arch. Neuro1. 1971,25,218-224.
117.-
PAGE M.J., LUNN J.S.
Pneumococca1 serotypes associated with acute pneumonia.
J. Epidemiol. 1973,98,255-261.
118.-
PEPER O.S.
The urinary excretion of S. substance in lobar pneumonia.
Yale J. Biol. 7th Ed.
1934; 13-21.
119.-
POLLOCK M.
Clinical significance of capsular antigen in patients with Klebsiella
infections. Cité in Schiffer M.S.
120.-
PRINCE A.M., BURKE K.
Serum hepatitis antigen (SH) • Rapid detection by high voltage
immunoelectroosmophoresis.
Science. 1970, 169, 593-595.
121. -
RAKE G.
Studies of meningococus infection. I. The presence of meningococcus
precipitogens in the cerebrospinal fluid.
J. Exp
. Med. 1933, 58, 375-383.
122.-
REY M., TRIAU R.
La vaccination dans les méningites purulentes.
Med. Afr. Noire 1979 (sous presse).
123.-
ROBBINS J.B., ~lc CRACKEN G., GOTSCHLICH E.C., ~RSKOW F., ~RSKOW 1. HANSON L.A.
Escherichia coli KI capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis
New Eng1. J. Med. 1974,290, 1216-1220.
124.-
ROBINSON J.A., APICELLAM A.
1
Isolation and caracterization ofN. meningitidis group A, C, X and Y
polysaccharide antigens.
Infect. Immunity, 1970, 1, 8-14.
- 134 -
125.-
ROESGAARD C.R.
Pneumbcoccal carbohydrates in urine.
Thesis.Copenhagen
1945.
125 bis RUSSEL H., FACKlAM R.R., PADUlA J.F., COOKSEY R.
Capillary precipitin typing of Streptococcus pneumoniae.
J. Clin. Microbiol. 1978, 8, 355-359.
126.-
RYTEl M.W.
Counterimmunoelectrophoresis in diagnosis of infectious diseases.
Adr. Intern. Med. 1975, 20, 37-60.
127.-
SAMB A., DENIS F., CHIRON J.P., SOW A., DIOP MAR 1.
l'électroimmunodiffusion appliquée au diagnostic des méningites purulentes
(étude de 108 cas).
Bull. Soc. Med. Afr. Noire Lgue. Frse. 1977, 22, 231-239.
128.-
SCHIFFER M.S., OLIVEIRA E., GlODE M.P., Mc CRACKEN G.H.
A review : relation between invasiveness and the KI capsular polysaccharide
of E. coli.
Ped. Res. 1976, la, 82-87.
129.-
SCHIFFMAN G., AUSTRIA N.R.
A radioimmunoassay for the measurement of
pneumococcal
capsular antigens and of antibodies there to.
Fed. Proc. 1971, 30, 658.
130.-
SCRAGG J.N., APPElBAUM P.C., GORENDER D.A.
The spectrum of infection and sensivity of organisms isolated from
african and indian children in a Durban hospital.
Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1978, 72, 325-328.
131.-
SEDAIlLIAN A., MOINARD D., COURTIEU A.
Repartition des types capsulaires de Pneumocoques. Etude à partir de
95 souches isolées dans un laboratoire du CHR de Nantes.
Med. Mal. Tnf. 1971,12,525-530.
132.-
SEVERIN W.P.J.
latex agglutination in the diagnosis of meningococcal meningitis.
J. Clin. Path. 1972, 25, 1079-1082.
133.-
SHACKELFORD P.G., CAMPBEll J., FEIGIN R.D.
Counterimmunoelectrophoresis in the evaluation of childhood infections.
J. Pediatr. 1974, 85, 478-481.
- 135 -
•
134.-
SIBER G.R., SKAPRIWSKY P.
Counterimmunoelectrophoresis for detection of microbial antigens
in:reased sensitivity with dextran containing gels.
J. Clin. Microbiol. 1978,7,392-393.
135.-
SIEGEL J.O., POZIVIAK C.S., MICHAELS H.R.
Serotypically defined pneumococcal infections in children.
J. Pediatr. 1978, 93, 249-250.
136.-
SMIT P., OBERHOLZER D., HAYDEN-SMITH 5., KOORNHOF H.J., HILLEMAN M.A.
Protective efficacy of pneumococcal polysaccharide vaccines.
JAMA, 1977, 238, 2613-2616.
137.-
SMITH E.W.P., INGRAM D.L.
Counterimmunoelectrophoresis in H. influenzae type b epiglottis and pericarditis.
J. Pediatr. 1975, 86, 571-573.
138.-
SWENDSEN C.L., JOHNSON W.
Humoral immunity to Streptococcus pneumoniae induced by a pneumococcal
ribosomal fraction.
Infect. Immunity, 1976, 14, 345-354.
139.-
THIAM s~.
Méningites purulentes et Drépanocytose. A propos d'une étude des hémoglobines
dans 340 cas de méniggites purulentes dakaroises.
Thèse de "~édecine - Da~i!r 1979 ..
140.-
THITUMOORTHI M.C., DAJANI A.S.
Comparison of staphylococcal coagglutination, latex agglutination and
counterimmunoelectrophoresis for bacterial antigen detection.
J. Clin. Microbiol. 1979, 9, 28-32.
141.-
TOBIN S.M., JONES D.M.
Immunoelectrophoresis in the diagnosis of meningococcal infections.
J. Clin. Path. 1972, 25, 583-585.
142.-
TREVOUX C.
Etudes statistiques de 1052 cas de méningites purulentes observées à
Dakar (Sénégal).
Thèse de Médecine - Lyon 1972.
143.-
TRIAU R.
Les vaccins polysaccharidiques. Acquisitions récentes et perspectives.
Med. Mal. Inf. 1978, 8, 590-599.
- 136 -
144.-
TRIPP J.T., FRISCH A.W., BARRET C.D., PIDGEON B.E.
The specifie polysaccharide content of pneumoniae sputa.
J. Ex n • Med. 1942, 76, 497-504.
145.-
TUGWELL P., GREENWOOD S.M.
Pneumococca1 antigen in lobar pneumonia.
J. Clin. Path. 1975, 28, 118-123.
146.-
TUNEVALL G.
Studies of H. inf1uenzae.H. influenzae antigens studied
by the. gel precipitation method.
Acta Pha. Microbiol. Scand. 1953,32,193-197.
147.-
VINCENT M.H. BELLOT M.
Diagnostic de la méningit-e cérébrospina1e à méningocoques par la
préc19i toréaction.
tull. Acad. Med. 1901,61,326-332.
148.-
WALLIS C., MELNICK J.L.
Enhanced detection of Australia antigen in serum hepatitis patients
by discontinous counterimmunoe1ectrophoresis.
~ppl. Microbiol. 1971, 21, 867-869.
149.-
WEIBEL R.E., VELLA P.P., Mc LEAN A.A., WOODHOUR A.F., DAVIDSON W.L.,
lIILLH1AJJ M. R.
Studies in human subjects of polyvalent pneumococcal vaccines.
Pree. Soc. Exp. Biol. Med., 1977, 156, 144-150~
150.-
~HITTLE H.C., GREENWOOD S.M., DAVIDSON N. et al ...
Meningococcô l antigen in the diagnosis and treatment of men;ngbcoccal infections
Amer. J. Med. 1975, 58, 823-828.
151.-
WHI~TLE H.C., GREENWOOD B.M., GABRIELSE L., CROCKFORD J.
The bacte)~iologica1
diagnosis of pyogenic meningitis from cerebrospina1
fluid dried on fil ter paper.
Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1976, 70, 217-218.
152.-
llHITTLE H.C., TUGWELL P., EGLER L.J., GREENWOOD B.M.
Rapid b~cteriological diagnosis of pyogenic meningitis by latex agglutination.
Lancet, 1974, ii, 619-621.
153.-
W008 W.3., SMITH M.R.
J. Exp. Mpd. 1949,90,85. In Microbiology
DAVIS B.D., DULBECCO R., EISEN H.N.,
GINSBERG H.S., WOOD W.B., Me CARTHY M. Ed. Harper International Edition.
Natyland 1973.
154.-
TUGWELL P., GREENWOOD B.M., WARREL D.A.
r'n(~:!IT:ococcol meningitis : A clinical and laboratory study .
. Quart. J. r1ed. 1976,45, 533-601.
- 137 -
T A BLE
DES
MAT 1 E RES
- 138 -
Pages
1NTRODUCT1ON
.
1
CHAPITRE 1 : LE PNEUMOCOQUE
.
4
1.- Historique
.
5
2. - Ha bitat
.
5
3.- Caractères bactériologiques du Pneumocoque
.
6
3.1.
Pneumocoque en phase S
.
6
3.1.1.
Caractères morphologiques
.
7
3.1.2.
Caractères culturaux
.
8
3.1.3.
Caractères métaboliques
.
10
3.1.4.
Caractères antigèniques
.
13
3.1.5.
Communautés antigèniques-Réactions croisées
.
21
3.1.6.
Substances secrétrées pàr le PneUMOcoque
.
25
3.1.7.
Pouvoir pathogène expérimental
.
25
3.1.8.
Pouvoir pathogène naturel
.
26
3.2.
Pneumoco~ue en phase ~~I~~•••••••••••••••••••
29
3.2. 1.
Ca racteres morph \\Q~9 ues. ~ •.~
.
29
3.2.2.
Caract~res c~lt
>~,~ ..\\,
.
29
3.2.3.
Caracteres bl0
1êu.-rs
'
.
29
3.2.4.
Structure ant; e!l
AL ......•l
.
30
3.3.
Conditions de pa ~ e S +
et, R1 s
.
30
3.3.1.
Variation phéno
. ue ou
t~' on
.
30
3.3.2.
Transfonnation .. O'..I ••••••• t,'"'\\~ •••••••••••••••••
31
,cl)ement'::"Y
4.- Diaonostic bactériologique
.
31
4. 1 .
Pha se S ....................................•.....
31
4.1.1.
Examèn di rect
.
31
4.1.2.
Ensemencement
.
32
4 . 2.
Pha se R...•......................................
32
4.3.
Typage des Pneumocoques
.
32
4.3.1.
Gong1ement de la capsule ..................•....
32
4.3.2.
Précipitation en tubes cappil1aires
.
33
4.3.3.
Electroimmun(K(iffusion
,•....
33
5.- Sensibilité aux antibiotiques..........................
33
5.1.
Pénicilline et Céphalosporine.....
33
5.2.
Tétracycline.....
..•..............
34
5.3.
Macro1ides et apparentés......................
34
5.4.
Chloramphénicol..................................
34
5.5.
Aminosides
35
5.6.
Sulfamide et Triméthoprime.......................
35
5.7.
Les autres antibiotiques.........................
35
6.- Vaccination..................
.•...............
35
CHAPITRE II : L'ELECTROIMMUNODIFFUSION..........................
39
1.- Historique....
40
- 139 -
2.- Les exo-antigènes bactériens présents dans
les liquides biologiques
.
43
2. 1.
Défin i t ion. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..
43
2.2.
Dénomination
.
44
2.3.
Inventaire des bactéries recherchées
.
44
3.- L'Electroimnlunodiffusion (EID}
.
45
3. 1.
les pté 1èvements
.
45
3.1.1.
Nature des prélèvements
.
45
3.1.2.
Transport des prélèvements
.
45
3.1.3.
Conservation des prélèvements
.
46
3.1.4.
Concentration des prélèvements
.
46
4. - Immunsérums
.
47
4.1.
Statens Serum Institut
.
47
4 . 1 . 1.
Omn i sérum
.
47
4. 1.2.
Immunsérums poo1s
.
48
4.1.3.
Immunsérums monova 1ents ...........•............
48
4.2.
Difco
.
49
5.- Technique de l'ëlectroimmunodiffusion ................•.
49
5.1 .
Pri ne i pe •••..•••..••••.•••.•••••.••••••••••••.•.•
49
5.2.
Techni~ues habituellement utilisées
.
49
5.3.
Critique et aspects techniques particuners
.
53
5.3.1.
Support
.
53
5. 3 . 1.
Gel.. . . . . . . . . . . .
.
53
5.3.3.
Tampon
.
53
5.3.4.
Puits
.
55
5.3.5.
Différence de potentiel
.
55
5.3.6.
Temps de migration
.
55
5.3.7.
Cas des sérotypes 7 et 14
.
55
f
5. 4•
Sen s i bi lité .....................................•
56
5.5.
Autres applicationsde l'électroimmunodiffusion
.
57
6.- Autres techniques eoncurentes de l'EID
.
57
6.1.
Techniques d'agglutination
.
57
6.1.1.
Latex
.
57
6.1.2.
Staphylocoque porteur de la protéine A
.
58
6.2.
Inhibition de "hémagglutination (IHA)
.
58
7.- Intérêt de l'éleetr·oimmunodiffusion •.•...............•.
59
7.1.
Rapidité de la technique ...............•.........
59
7 . 2 .
Si mpl ici té
.
59
7 . 3 .
Sen s i bi lité
.
59
7.4.
Coat
~,!O
60
• • • • • • • • • • • • • • • •
CIr
.
7.5.
Spécificité du diagnostic
.
60
7.6.
Infections décapitées
.
62
7.7.
Intérêt pronos tique ..................•...........
62
CHAPITRE III: RESUlTATS
..
63
- 140 -
1.- Matériel et méthodes......
64
1.1.
Matériel.,
64
1.1.1.
Patients
64
1.1.2.
Bactériologie classique.........................
65
1.1.3.
EIO
65
1.1.4.
Electrophorèse d'hémoglobine....................
66
1.2.
Méthodes... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
66
1.2.1.
Prélèvements........................
67
1.2.2.
Examen macroscopique............................
67
1.2.3.
Examens chimiques...............................
67
1.2.4.
Examen cytologique..............................
67
1.2.5.
Examen bactériologique..........................
68
1.2.6.
Electroimmunodiffusion..........................
70
1.2.7.
Electrophorèse d'hémoglobine....................
74
1.3.
Critères de méningites............................
75
2. - Résul tats. . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . .
75
2.1.
Données d'ensemble...............
75
2.1.1.
Evolution dans le temps.........................
75
2.1. 2.
Protéinorachi e et cytol ogi e. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
79
2.2.
Bactériologie.....................................
84
2.3.
Electroimmunodïffusion............................
84
2.4.
Comparaison EID et bacteriologie .....'.............
86
2.5.
Sérotypie .....................................•...
90
2.5.1.
Répartition des sérotypes.. ... ...........•......
91
2.5.2.
Répartition des sérotypes en fonction de liage..
96
2.5.3.
Comparaison des Immunsérums Difco et ceuX du
Statens Serum Institut..................
98
2.6.
Titre et évolution des antigènes polysaccharides
dans le LCR et le sérum au cours des méningites
à Pneumocoque.....................................
100
2.6.1.
Titre des antigènes polysaccharidiques dans le
LCR. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
100
2.6.2.
Dilutions ultimes du LCR permettant la détection
de l'antigène...................................
100
2.6.3.
Recherche d'une corrélation entre le titre des
antigènes po1ysaccharidiques et la densité micro-
bi enne . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
100
2.6.4.
Recherche d'une antigènémie .......•.........•...
101
2.7.
Evolution des titres antigèniques au cours du trai-
tement de la méningite
102
2.8.
Action de la température sur les antigènes du Pneu-
mocoque sérotype 1.................................
104
2.9.
Méningites à Pneumocoque et mortalité •.............
104
2.9.1.
Létalité et sérotypes
105
2.9.2.
Létalité et antigènémie
107
2.10. Méningites à Pneumocoque et Drépanocytose
107
- 141 -
CHAPITRE IV : DISCUSSION
1.-
109
109
109
2.-
111
111
113
·3.- Couvertures vaccinales......... .......................•
113
CONCLUSION..... •. ••.......•••. .•••••.•. .•..• •.•..••.••.••. • ...••.•.••••. .
117
BIBLIOGRAPHIE •..••..•••.••••••. ,.:: . •• •. . •• . • . . •. • • . . . . • • • • . . . •• • • • . • • • •• • •
120
-~-----~--
Vu R.c. Voyen de. la FaC1.LUé de
Méde.c.-Ïne. et P~ac.-ie. d~ VakaJl.
Vu et peJlm-U. d' -<mpJ!)meJt
le. Rectewt de. l 'u.Mvvv~aé de. VakaJl.