Phaml. Méd. Trad. Afr. 2006, Vol. XlV, pp. 45-54
ETUDE DES PROPRIÉTÉS ANTIANÉMIQUES DE JUSTICIA SECUNDA
VAHL (ACANTHACEAE) CHEZ DES RATS DE SOUCHE WISTAR
Joachim D. GBENOU(1)*, Richard TOSSOU(2), Pierre DANSOU(2),
Michael FOSSOU(2), Mansourou MOUDACHIROU(l)
(a1 haboratoire de Pharmacognosie et des Huiles Essentielles, FSS-FASTIUAC,
01 BP: 188 Cotonou, lSBA Champ de Foire, Bénin.
(2) Centre de Recherche des Activités Physiques et Sportives et Motricité, 1NJEPSIUAC,
01 BP: 169, Porto-Novo, Bénin
Résumé
Justicia secunda Vahl est une plante de la famille des Acanthaceae. Elle est communément
appelée « hounsiman )) plante qui donne le sang en fongbé et est utilisée au Bénin pour lutter
contre l'anémie.
Notre étude a pour objectif de connaître les différentes composantes chimiques de la plante et
de tester les propriétés antianémiques de l'extrait hydroalcoolique sur des rats Wistar, après
induction de l'anémie par la phénylhydrazine chlorhydrate.
L'analyse phytochimiques, a révélé la présence des alcaloïdes, des tanins, des flavonoïdes, des
anthocyanes et des leucoanthocyanes.
L'administration de l'extrait hydroalcoolique par gavage aux rats anémiés aux doses de 1000
mg/kg/j et 2000 mg/kg/j a entraîné une augmentation du taux d'hémoglobine, du nombre de glo-
bules rouges et de l'hématocrite.
L'hémolyse des rats traités à l'extrait est inférieure à celle des rats non traités tandis que leur
résistance osmotique est élevée. Ce qui indique la présence de plus de jeunes cellules chez les rats
traités que chez les rats témoins.
Ces résultats confirment et valident l'indication thérapeutique de Justicia secunda Vahl dans
la lutte contre l'anémie en médecine traditionnelle.
Mots
clés
:
Justicia
secunda,
anémie,
extrait,
hémoglobine,
globules
rouges,
hématocrite, résistance osmotique
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INTRODUCTION
L'utilisation des plantes à des fins thérapeutiques est une pratique multiséculaire.
En cela Kassel (2003) affirmait: «Très tôt, au cours de l'évolution, les hommes, pour
se soigner, utilisèrent les ressources présentes dans leur environnement naturel».
Plusieurs travaux ont été réalisés sur les propriétés biologiques des extraits de cer-
taines plantes et ont permis la découverte de nombreux principes actifs utilisés en
médecine moderne.
Dans la riche et diversifiée flore du Bénin, Hibiscus sabdariffa, Tectona grandis,
Justicia secunda et bien d'autres plantes sont connues comme ayant des effets de
résorption sur l'anémie. L'anémie qui se traduit par une baisse du taux d'hémoglobine
en dessous de 12 gldl est fréquente en milieu tropical; 10 à 20 % de la population a
moins de 10 gldL hémoglobine (Gentilini M., 1993).
Ces plantes pourraient être utilisées en lieu et place des produits pharmaceutiques
devenant de plus en plus chers pour la population indigène (William A.O., 1985).
Dans ce travail, nous nous proposons d'étudier les propriétés antianémiques de
Justicia secunda Vahl (Acanthaceae) une plante qui contiendrait des substances
chimiques pouvant avoir un effet de résorption sur l'anémie.
MATÉRIEL ET MÉTHODE
Matériel
Matériel animal
Le matériel animal est constitué de rats albinos de souche Wistar de poids corporel
moyen 154,14 g, ayant libre accès à l'eau et la nourriture et acclimatés aux conditions
d'élevage de l'animalerie du Laboratoire d'Expérimentation Animale de l'Unité de
Biologie Humaine de la Faculté des Sciences de la Santé (FSS), sise à l'ISBA (Institut
des Sciences Biomédicales Appliquées) au champ de foire de Cotonou.
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MATÉRIEL VÉGÉTAL
Il est constitué d'extrait hydro alcoolique de Justicia secunda Vahl récoltées dans le
Mono à Honhoué dans la commune de Houéyogbé dans le courant de janvier, février
2005. La plante est identifiée et authentifiée à l'Herbier National de l'Université
d'Abomey Calavi.
MÉTHODE
Préparation de l'extrait
La phase préparatoire a consisté d'abord en la préparation de l'extrait hydro alcoo-
lique avec un rendement de 2,85 %, ensuite à l'analyse chimique de la plante, basée
sur des réactions différentielles de coloration et de précipitation, selon la méthode de
Peter J. Houghton et al. (1996).
Protocole expérimental
Quatre lots de 6 rats ont été constitués: les rats témoins blancs, les témoins néga-
tifs, les rats ayant reçu 1000 mg d'extrait par kg de masse corporelle (lot Dl) et rats
ayant reçu 2000 mg d'extrait par kg de masse corporelle par jour (lot D2).
Au cours de la phase d'expérimentation, nous avons dans un premier temps prélevé
le sang des rats par ponction des veines caudales, induit l'anémie par l'administration
par voie intra péritonéale de 40 mg/kg/j de la phénylhydrazine chlorhydrate
(Naughton B.A., 1995) pendant deux jours (Jo et 11). Nous avons aussi administré par
gavage aux rats des lots Dl et D2 respectivement 1000 mg/kg et 2000 mg/kg) de
l'extrait hydro alcoolique de Justicia secunda Vahl de J2 à 115. Les paramètres héma-
tologiques (Genetet B., 1989 ; Ganong W. E, 2001 et Descat E, 2002) ont été dosés
aux jours JO, 12, 17, 110 et 115 au niveau des trois lots de rats: lot Tn (rats anémiés),
lot Dl et lot D2 à l'aide d'un compteur automatique des cellules sanguines (Sysmex
KX 21) et les variations ont été calculées par rapport aux valeurs de 12. Enfin, nous
avons étudié la résistance osmotique des quatre lots de rats constitués: lot Tb, lot Tn,
lot Dl et lot D2, selon le protocole de Redondo (1995) au jour 17.
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Analyse statistique
Pour l'analyse des résultats obtenus, nous avons utilisé le logiciel Epi Info 6. Il a
été procédé au test ANOVA pour vérifier la nonnalité des variables. Les comparai-
sons des valeurs moyennes des différents paramètres ont été effectuées à l'aide du test
de Student. Le seuil de signification a été fixé à p < 0,05.
RÉSULTATS ET DISCUSSION
Résultats
Effets sur les paramètres hématologiques
L'administration de la phénylhydrazine a provoqué
au jour 12 une diminution
significative (p = 0,0088) du taux d'hémoglobine chez les rats des trois lots de
45,24 % ±1,54.
Après traitement une récupération progressive est obtenue les jours suivants
(Tableau 1). Les résultats montrent d'une part, que les rats ayant reçu l'extrait hydro
alcoolique de Justicia secunda Vahl ont presque totalement récupéré au jour 115
(p < 0,005 pour les deux doses) et, d'autre part, que la dose de 2000 mg/kg/j permet
une récupération plus rapide.
Globules rouges
Après injection de la phénylhydrazine, il y a eu une diminution de globules rouges
dans les trois lots (44,36 % ± 2,81) au jour J2.
Une augmentation du nombre de globules rouges est observée après traitement les
jours suivants.
Les résultats montrent que les rats du lot Dl ont presque totalement récupéré au
jour 115 (98,11 % de récupération) et que ceux du lot D2 ont totalement récupéré au
jour 115 (100,28 % de récupération) (Tableau 2).Par contre le taux de récupération
n'est que 70,37 % chez les rats témoins anémiés non traités. Les résultats montrent
également que l'extrait à dose de 2000 mg/kg/j pennet une meilleure récupération
comparée à celle de la dose de 1000 mg/kglj.
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Hématocrite
L'administration de la phénylhydrazine a aussi diminué l'hématocrite au jour J2.
Cette diminution est de 14,79 %, 13,14 % et 12,46 % respectivement chez les rats
témoins, les rats du lot Dl et du lot D2.
Après traitement l'augmentation de l'hématocrite au jour 17 est de 32,91 % chez les
rats témoins, 33,08 % chez les rats du lot Dl, et 33,39 % chez les rats du lot D2. Au
jour 115 il est de 37,32 % chez les rats témoins; 39,25 % chez les rats du lot Dl, puis
39,67 % chez les rats du lot D2 (Tableau 3).
Résistance osmotique
La détennination de la résistance osmotique a permis de constater que les concen-
trations de NaCI à 50% d'hémolyse sont de 0,470 % pour les rats (nonnaux) (Tb),
0,445 % pour les rats témoins anémiés (Tn), 0,405 % et 0,375 % pour respectivement
les rats du lot Dl et du lot D2 (Figure). Ainsi, au jour 17 (p = 0,025), les globules rou-
ges des rats traités résistent plus à l'hémolyse que ceux des rats non traités.
De cette observation nous déduisons qu'il y a présence de plus de globules rouges
jeunes chez les rats traités que chez les rats non traités.
DISCUSSION
L'administration de la phénylhydrazine a provoqué une baisse moyenne significa-
tive du taux d'hémoglobine, du nombre de globules rouges et de l'hématocrite. Nos
résultats sont proches de ceux de Ryu et Yook (2002) qui ont observé quant à eux une
diminution du nombre de globules et de l'hématocrite (respectivement de 50 % et de
55 %) avec une administration de phényhydrazine de 40 mg/kg/j pendant 4 jours chez
les rats Sprague Drawley.
En effet, dans notre étude, au jour 115, les rats ayant reçu l'extrait ont presque tota-
lement récupéré (p < 0,005) alors que ce n'est pas le cas chez les rats témoins. Criswell
et al. (2000), Ryu et Yook (2002) puis Redondo et al. (1995) ont aussi observé cette
réversibilité de l'anémie induite par la phénylhydrazine à l'arrêt de l'administration.
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Les résultats montrent que les rats du lot D2 ont totalement récupéré en ce qui
concerne le nombre de globules rouges au jour J15.
L'hémolyse des globules rouges au jour 17 des rats ayant reçu en IP la phénylhy-
drazine chlorhydrate est inférieure à celle des rats normaux. En revanche leur
résistance osmotique est supérieure. Nos résultats sont comparables à ceux de
Redondo et al. (1995).
Les hémolyses à 50 % (H50) des rats normaux et des rats anémiés non traités étant
supérieurs à celles des rats anémiés traités à l'extrait de Justicia secunda Vahl, nous
pouvons dire qu'il y a plus de cellules résistant à l'hémolyse chez les rats traités que
chez les rats non traités. Cette augmentation de la résistance osmotique des globules
rouges des rats est due à la présence de cellules jeunes dans le sang. L'administration
de l'extrait de Justicia secunda Vahl a donc augmenté la production de jeunes globules
rouges.
L'analyse phytohimique a révélé la présence des grands groupes chimiques que
sont: les alcaloïdes, tanins, flavonoïdes, anthocyanes et leucoanthocyanes. Ils ont un
pouvoir antioxydant, favorisent la régénération des tissus, diminuent la pennéabilité
des capillaires sanguins et renforcent leur résistance à l'hémolyse (J. Bruneton, 1999).
La présence de ces grands groupes chimiques de par leurs propriétés, justifie la résis-
tance des globules rouges des rats traités à l'extrait.
Les anémies sont fréquentes en milieu tropical; 10 à 20% de la population a moins
de 10 g/dL d'hémoglobine. Les femmes enceintes et les enfants constituent les groupes à
haut risque. Le paludisme, les parasitoses, les carences en acide folique en sont les
principales causes. Justicia secunda Vahl pourrait être conseillée pour lutter contre
l'anémie.
CONCLUSION
L'injection de la phénylhydrazine chlorhydrate a provoqué une anémie hémolytique
caractérisée par la diminution des paramètres hématologiques. L'administration de
l'extrait de Justicia secunda Vahl par gavage à des doses de 1000 mg/kg/j et 2000
mg/kg/j a augmenté de façon significative le taux d'hémoglobine et le nombre de
globules rouges au jour 17. La dose de 2000 mg/kg/j a permis une récupération complète
(100,28 %) du nombre de globules rouges des rats au jour 115.
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L'extrait, du fait des propriétés des grands groupes chimiques qui y sont présents,
a pennis, à cause de la régénérescence de jeunes cellules une meilleure résistance des
globules à l'hémolyse.
Nos résultats confirment et valident l'indication thérapeutique traditionnelle des
feuilles de Justicia secunda Vahl dans la résorption de l'anémie. Cette plante pourrait
donc être conseillée pour lutter contre l'anémie.
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Tableau n° 1: Effet de l'extrait hydro éthanolique de Justica secunda Vahl sur le taux d'hémaglobine
Taux d'hémoglobine (g/dl)
Tests
JO
.J2
.P
JlO
.US
Témoin
13,5 ± 2,57
7.6 ± 3,33
9,6 ± 1,33
11.1 ±0,17
12.88 ± 1,95
-43,70% .'
+26,31
h
fjc
+46.05'*; b'
+69,56'}é, h'
Dl (1000 mg!
12,9 ± 1,86
6.9 ± 4.14
9,9 ± 1,14
11,91 ± 0,87
3,63 ± 2,59
kg/jour)
-46,51 '/(, ;'ot-
+43,47% h
+72,6Yib ;"
+97,63'7c h'
Dl (2000 mg!
12.~~O ± l,56
6,5 ± 4,24
10.1 ±0,64
Il,R8 ± 1,[4
2,92 ± 2,18
kg/jour)
-45.520/" '*
+55,38% b
+82.89';(, 0'
+98,82% 1"
a : POllrCCJll,lgC;; de variation par rapporl au jour .Jf).
b : pourcentages de variation par r;'l'port nll jt.ur .12
* : Différence significative (p < 0,(5)
Thbleau n° 2 : Effet de l'extrait hydro éthanolique de Justicia secunda Valù sur le taux sur le nombre de globules rouges
Nombre de globules rouges (n li: lOO/pl)
Tests
_ _ _..
------'J'-"O'---_ _----'J"-=2=---
,"-'P'---_ _--'!.J..:..;10::.--_ _
.fiS
Témoin
6,lH ± 1,34
4,0:5 ± 1.54
4,49 ± 1,10
5.6 ± 0,01
6,')0 ± I.JI
-41,55% 0'
+10.860" b
+38.27% b
+70,37% ."
Dl 0000 mg!
5.93 ± 0.76
3,18 ± 2,00
4,87 ± 0,30
S.60 ± 0,42
6.30 ± J, 12
kg/jour)
-46.169(, .'
+53,17% h
+76.10';1(, li'
+98.11% l,'
02 (2000 mg/
6,31 ± 0,62
3,46:!: 2.23
5,47 ± 0.22
6.3 ± 0.61
6,93 ± 1,24
kg/jour)
-45,52(~; "ot-
+58,17'7
+1\\4,68'.;(,
+
0 b
1,1'
100.28';1(, l,'
" : ]wurcentages de variation par rapport au jour JO.
h: pourc"nwg<'s de \\'ariation par rappt>rt au jour J2
,. : Diflùcncr significative (p < 0,05 )
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Tableau n° 3 : Effet de l'extrait hydro éthanolique de Justica secunda Vahl sur l'hématocrite
Hématocrite (%\\
Tests
JO
J2
.17
HO
J15
T~moitl
35.0±3.13
20,21 ± 11,66
32,91 :!: 1,04
33,93 ±2,O6
}7 .32 :.1: 5.45
,
-42.23'16 ~l.'·
+62,34S';' '
H)7,90%
+84.66';{ v
]) 1 (1000 mg!
32,99±1,11
19.85 ± 12.03
33.08 ± 1,2
34,26 ± 2.33
39,25 ± 7,37
DO'
\\,<
kg/jour)
-39.80%
\\;
+66.679"
+72,61 ';j,
+97,77% h<
D2 (2000 mg!
33,4 ± 1,27
19.94 ± 12.19
33,39 :!: 1.26
34,68 ± 2,55
39,67 ± 7,54
b.fl
C"t.
kg/jour)
-45,52 .'
+67.49(f" b
+73.95';;
+98.98%
- - - - - - - - - _ . _ - - - - - - - - - - - - - - - - - -.._-_ _
_._--
a: pourcentages de \\'ariation par f;lpp'>1( au jour JO.
b : pourcentagcs de variation par rapport au jGur J2
• : Dlfférenœ ~igniricat.i,c(p < O,OS)
110
CIl
100
~ .....
III
>.
90
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E
80
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70
\\\\
~
60
Cl
50
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;
40
~ 30
o
0.
20
10
0+ ..·······.,..· ..........·]'....········
..... 'or
o
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
Concentrations de NaCI (%)
r..- =-=·:~·:~~:~::::~;)·_···_·····_·····:.O<:::...·~:~:~Oa:::~:~)
Figure: Courbes de la résistance osmotique des
globules rouges au jour J7
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Phaml. Méd. Trad. Afr. 2006, Vol. XIV, pp. 45-54
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
l - Criswell K. A, Sulhanen A. P., Hochbaum A. F and Bleavins M. R., Effect of
phenylhydrazine or phlebotomy on peripheral blood, bone marrow and erythro-
poietin in Wistar rats. J. App/. Toxic. 20: 25-34 (2000).
2 - Descat F, Hématologie du rat: hémogramme et myélogramme. Thèse Doct.
Vétérinaire. Toulouse 3-4011 (2002).
3 - Ganong William F, Physiologie Médicale. 1ge éd. de l'Université Breck. 828
pages (2001).
4 - Genetet B., Hématologie., Tech et doc. LAVOISIER, éd, Paris. 3-82. (1989).
5 - Gentilini M., Médecine tropicale. Flammarion, 5e éd, Paris, 510-537 (1993).
6 - Jean Bruneton, Pharmacognosie- Phytochimie Plantes médicinales, 3 éd Tech et
documentation éditions médicales (1999).
7 - Naughton B. A, Moore E., Bush M. E., Lapin D. M. and Domfest B.S.,
Hemostatic alterations associated with phenylhydrazine - induced haemolytic
anaemia. Eur J Clin Invest. 25: 722-727(1995).
8 - Peter J. Houghton and Amala Rama, Laboratory Handbook for the Fractionation
of Natural Extracts (1996).
9 - Redondo P. A, Alvarez A.L, Diez c., Femandez-Rogo F. and Prieto J. G.,
Physiologieal response to experimentally induced anaemia in rats: a comparative
study. Lab anim. Sei. 45 :578-583 (1995).
10 - Ryu 1. H., and Yook. C. S., The effects of Sa-Mul-Tang (Si-Wu-tang), a traditional
Chinese medicine, on phénylhydrazine-induced anaemic rats. J. of Applied
Pharmac. 9. 1-6 (2002).
Il - William A O. et Johnson C. A, Avant propos de la première pharmacopée africaine.
In: pharmacopée africaine, CSTRlOUA.1 ere éd. (1985).
54