Pharm. Méd. Trad. Afr. 1998, Vol.JO, pp.55-62.
r
EVALUATION DE LA TOXICITE GENERALE AlGUE
DE "FACA" ANTIDREPANOCYTAIRE
Par
M. LOMPO (1) ; S. OUEDRAOGO (1) ; I.P. GUISSOU (1..1) ; Y. POTCHOO (3)
1- Institut de Recherche en Sciences de la Santé (lRSS)
Département Médecine-Pharmacopée TraditionnellelPharmacie
03 BP 7192 Ouagadougou 03.
2- Faculté des Sciences de la Santé - Université de Ouagadougou
03 BP 7021 Ouagadougou 03.
3- Laboratoire de Pharmacologie - Faculté Mixte de Médecine et de Pharmacie
Université du Bénin - Lomérrogo.
RESUME
FACA est une association de poudres de plantes (Fagara sp. et Calotropis sp.)
couramment utilisées en tradithérapeutique au Burkina Faso dans le traitement de
différentes pathologies dont la drépanocytose. Des études antérieures (GUISSOU et
coll. 1995) ont mis en évidence l'activité in vivo de FACA sur la rémission des crises
drépanocytaires comparativement à l'HYDERGINE produit de référence.
Le présent travail qui a pour but de fixer un garde-fou dans l'utilisation de
FACA, fait une étude de sa toxicité générale aiguë par l'évaluation de la DL50. Cette
DL50, selon la méthode de LITCHIFIELD et WILCOXON (1949) vaut 600 mg/kg
chez la souris mâle en administration intra-péritonéale avec un intervalle de confiance
compris entre 365.47 mg/kg et 985.02 mg/kg. La valeur de la DL50 pennet ainsi de
classer FACA selon l'échelle de toxicité des substances citée par ALAN K. DONE
(1980) panni les produits faiblement toxiques.
MOTS CLES : Fagara sp. - Calotropis sp. - antidrépanocytaire - FACA - DLSO -
Toxicité générale - Plantes médicinales.
1.
INTRODUCTION
Tout produit actif biologiquement est susceptible d'entraîner à forte dose des
effets toxiques. Cette toxicité commune à la plupart des médicaments présente des
risques lors de l'utilisation. C'est pourquoi, elle doit dès le début être détenninée avec
précision afin d'évaluer les doses limites d'utilisation.
- 55 -
La méthode commune de détermination de la toxicité générale aiguë est la
mesure de la dose lethale 50 qui permet de situer le produit sur l'échelle de toxicité
des substances chimiques citée par ALAN K. DONE (1980).
Elle consiste à rechercher les doses qui provoquent la mort de l'animal. Ce
type de toxicité est la conséquence en général d'une manifestation exagérée des effets
pharmacologiques qui aboutit à la mort de l'animal. La méthode la plus courante
consiste à rechercher la dose qui, après administration unique, entraîne la mort chez
50% des animaux (dose lethale 50% ou DL50) dans un délai de 24 à 72 heures.
La présente évaluation de la toxicité générale aiguë entre dans le cadre d'une série
d'études Sur FACA devant lui conférer à terme une autorisation 'de mise sur le
marché.
II.
MATERIEL ET METHODE
1.
Matériel
des souris mâles de souche NMRI pesant entre 21 et 34g
poudre de FACA en solution aux concentrations de 10,30,50, 75 et 150 mg/ml
eau distillée
seringues de 1 CC graduées au centième
chronomètre
2.
Méthode
a)
Préparation des solutions de travail
solution à 10 mg/ml
Peser 100 mg de poudre de FACA dans une fiole jaugée de 10 ml et compléter à 10
avec de l'eau distillée. Cette solution à 10 mg/ml est utilisée pour traiter le lot 1 à la
dose de 100 mg/kg.
solution à 30 mg/ml
Peser 300 mg de poudre de FACA dans une fiole jaugée de 10 ml et compléter à 10
avec de l'eau distillée. Laisser macérer pendant deux heures en agitant de temps en
temps.
Laisser reposer et filtrer le surnageant sur du coton. Cette solution à 30 mg/ml est
utilisée pour traiter le lot II à la dose de 300 mg/kg.
- 56 -
solution à 50 mg/ml
Peser 500 mg de FACA dans une fiole jaugée de 10 ml et traiter cette solution comme
précédemment. Cette solution à 50 mg/ml est utilisée pour traiter le lot III à la dose
de 500 mg/kg.
solution à 75 mg/ml
Peser 750 mg de FACA daIlS une fiole jaugée de 10 ml et, traiter cette solution comme
précédemment. Cette solution à 75 mg/ml est utilisée 'pour traiter le lot IV à la dose
de 750 mg/kg.
solution à 150 mg/ml
Peser 3000 mg de FACA dans une fiole jaugée de 20 ml et traiter .cettesolution
comme précédemment. Cette solution à 1500 mg/ml est utilisée pour traiter le lot V
à la dose de 1500 mg/kg.
b)
Traitement des animaux
Les souris sont mises àjeun pendant 12 heures avant le test. Cinq lots de 5 souris sont
constitués de la façon le plus homogène possible (poids moyen du lot compris entre
25 et 28g) et reçoivent en.' intrapéritonéale respectivement les doses de loomg/kg ; 300
mg/kg; 500 mg/kg; 750 mg/kg et 1500 mg/kg. Le volume de soluté à injecter ne'
dépasse pas 0.4 ml. Ces souris sont suivies pendant 72 heures et les modifications de
comportement au cours du test sont notées.
c)
Evaluation de la dose lethale 50 CDL50)
Après avoir. ,tracé la droite de régression dose-mortalité selon la méthode de Miller et
TAINTER (1944) cités par WEPIERRE (1977), l'évaluation de la DL50 et de son
intervalle de confiance se fait par calcul suivant le procédé de Litchefield et Wilcoxon
(1949) ..
Lorsque la DL50 et son intervalle de confiance sont déterminés, la valeur de la DL5Ü
est compar-ée avec celles de classification de la toxicité des substances. Ainsi sont
classés comme :
substances extrêmement toxiques, celles dont la DL50 chez le rat ou la souris
1
est inférieure à 1 mg/kg ;
substances très toxiques, celles dont la DL50 est comp~i~e
1
1 .
entre 1 et 50 mg/kg ;
1
1 .
substances faiblement toxiques, celles dont la DL50 est comprise entre
500 et 5000 mg/kg ;
- 57-
substances pratiquement non toxiques, celles dont la DL50 est comprise
entre 5 et 15 g/kg ;
substances relativement sans danger, celles dont la DL50 est supérieure à
15g/kg.
III.
RESULTATS
Les résultats sont consfgnés dans les tableaux suivants :
Tableau 1: résultats de mortalité au bout de 72 h à la dose de 100 mg/kg
Souris
n°
Poids
Volume
Nombre d'animaux morts
administré (ml)
après
24 H
48 H
72H
1
30
0.30
2
24
0.24
3
34
0.34
4
21.50
0.22
0/5
115
Ils
5
22
0.22
Moyennes
26.3
0.26
+ 5.47
+ 0.05
Tableau II : résultats de mortalité au bout de 72 h à la dose de 300 mg/kg
Souris n°
Poids
Volume.
Nombre d'animaux morts
administré (ml)
après
24 H
48 H
72H
1
27.0
0.27
2
23.0
0.23
3
27.5
0.28
4
29.5
0.30
115
115
115
5
29.5
0.30
Moyennes
27.3
0.28
+ 2.66
+ 0.03
- 58 -
:
1"
Tableau DI : résultats de mortalité au bout de 72 h à la dose de 500 mg": ~ ..!
Souris
na
Poids
Volume
Nombre d'animaux. morts
administré (ml)
après
24 H
48 H
72H
1
28.0
0.28
2
24.5
0.25
3
26
0.26
4
27
0.27
2/5
2/5
3/5
5
31
0.31
Moyennes
27.30
0.27
+ 2.44
+ 0.02
Tableau IV : résultats de mortalité au bout de 72 h à la dose de 750 mg/kg
Souris na
Poids
Volume
Nombre d'animaux morts
administré (ml)
après
24 H
48 H
72H
1
25.0
0.25
2
23.5
0.24
3
25
0.25
4
31
0.31
3/5
4/5
4/5
5
27
0.27
Moyennes
26.3
0.26
+ 2.91
+ 0.03
.
1
1
1
1
1 •
- 59 -
Tableau V : résultats de mortalité au bout de 72 h à la dose de 1500 mg/kg
Souris nO
Poids
Volume
Nombre d'animaux morts
administré (ml)
après
,.
24H
48 H
72H
1
24
0.24
2
26.5
0.27
3
27.5
0.28
4
29
0.29
5/5
5/5
5/5
5
28.5
0.29
Moyennes
27.1
0.27
+ 1.98
+ 0.02 - .
Les taux de mortalité observée en 24 b ainsi que les valeurs critiques sont consignés
dans le tableau 6.
Tableau VI : Taux de mortalité et doses lethales critiques au. bout
de 24 h d'observation
Dose
% Mortalité
Valeurs DL
Rapports DL
100 mg/kg
0%
D15 = 190 mg/kg
D15/D150 = 0,32
300 mg/kg
20 %
D150 = 600 mg/kg
D150/DL95 = 0,32
500 mg/kg
40 %
DL95 = 1900mg/kg
DL5/DL95 = 0,10
750 mg/kg
60%
1500 mg/kg
100 %
La DL50 est de 6oomg/kg.
La droite de régression dose-mortalité permet de lire d'autres valeurs:
,DL84 =
1200 mg/kg
.DL16 =
300 mg/kg
. DLI
= 116 mg/kg
L'intervalle de confiance sur la DL50 est:
365.47 mg/kg pour la limite inférieure
985.02 mg/kg pour la limite inférieure
Les DL5 et DL95 lues sur le graphe sont respectivement 150 et 2500 mg/kg.
- 60-
Les rapports: OL5 /OL50 = 190/600 = 0.32
- OL5 / OL50 = 600 / 1900 = 0.32
- OL5 /OL95 = 190/ 1900 = 0.10
A partir de réactions classiques, nous avons également déteiminé les familles
chimiques présentes dans les différents extraits. Les résultats sont consignés dans le
tableau 7. On observe des différences significatives en fonction du solvant utilisé
pour l'extraction.
Tableau VU : Mise en évidence des composés chimiques dans les
les extraits
FAMILLES
EXTRAITS CHLO-
EXTRAITS
EXTRAITS AQUEUX
CHIMIQUES
ROFORMIQUES
ETHANOLIQUES
NON HYDROLISES
Fagara
Calotr.
Fagara
Calotr.
Fagara
Calotr.
Sterols et
++
+++
++
+++
+/-
+++
triterpenes
Carotenoïdes
+/-
++
-
-
-
-
Acides gras
++
+++
+/-
+/-
-
-
Alcaloïdes
+++
+++
+/-
+/-
-
-
bases
Aglycones
-
-
-
+/-
-
-
Flavoniques
Emodols
+/-
-
+++
-
++
-
Coumarines
+++
++
+++
++
+++
++
Tanins
-
-
+/-
-
++
-
Composés
-
-
+++
+++
+++
+++
réducteurs
Alcaloïdes sels
-
-
+++
+++
+++
+++
+
=
Réaction positive faible
++
=
Réaction positive forte
+++
=
Réaction positive très forte
+/-
=
Traces
=
Négatif
1
l.
- 61 -
IV.
DISCUSSION ET CONCLUSION
A l'issue de ce test d'évaluation de la toxicité générale aiguë, la DL50 est chiffrée à
600 mg/kg chez la souris en administration intra-péritonéale. Cette DI..50 selon le
tableau de classification de la toxicité des substances en fonction de leur DI..50
classe FACA parmi les substances faiblement toxiques.
Les rapports DLS / DL95 ; DLS / DL50 ; DL5D / DL95 le confirment par leur
valeurs en dessous de 0.5.
Par ailleurs si l'on considère les posologies requises: 2 à 3 gélules de 175 mg par
jour; chez un homme adulte la quantité de substance à administrer par jour serait
de 525 mg. Si cet homme adulte pèse 60 kg, la dose administrée est de 8.75 mg/kg
soit environ 1,46 % de la DLSO ou 7.5 % de la DL1 (116 mg/kg), dose considérée
comme surement non mortelle. L'évaluation ainsi faite de la DL50 constitue un
préréquis nécessaire à l'utilisation de FAC4 dans toute la sécurité requise en la
matière.
BmLIOGRAPHIE
1·
ALAN K. DONE (1980: Etude de toxicité: quelques données
fondamentales. Tempo Medical Afrique, 7, 39-40.
2·
GUISSOU I.P.; SAWADOGO M.; SAWADOGO A.;
OUATI'ARA A. (1995) : Etude de l'efficacité antidrépanocytaire de
gélules FACA chez les enfants en milieu hospitalier de Ouagadougou
(CHN-YO). CAMES.
Pharm. Méd. Trad. Afr. Presses de l'UB. Lomé. 29-38.
3·
LITCHFIELD J.T. ; WILCOXON F. (1949) : A. Simplified Method of
Evaluating Dose - Effet Experiments ; J. Pharmacol. Exp.
Ther., 96, 99-113
4.·
MILLER L.C. ; TAINTER M.L. (1944) : Estimation of ED50 and its
Error by means Qf Logarithmic probit paper, Proc. Soc. Exp. Biol. Méd. 57,
261-264.
5 •
WEPIERRE J. (1977) : Agrégé de Pharmacodynamie générale
Ed. MASSON, Paris; 158-162.
- 62-