Pharm. Méd. Trad. Afr. 1998. voua, pp.3-15.
ACTIVITE ANTI-CONTRACTURANTE DE
L'EXTRAIT DE KHAYA SENEGALENSIS
SUR L'ILEON DE COBAYE
Par
SABLASSOU, K.; AKLIKOKOU, A. K.; GBEASSOR, M.
Centre de Recherche et de Formation
sur les Plantes Médicinales (CERFOPLAM)
Département de Physiologie Animale,
Faculté des Sciences - Université du Bénin.
B.P. 1515, (Lomé-TOGO).
Résumé:
L'extrait éthanolique des feuilles sèches de Khaya senegalensis exerce sur
l'iléon de cobaye in vitro une action anti-spasmodique et spasmolytique.
A 1mg/ml, l'extrait fait chuter de 100% le plateau de la contracture induite
par le spasmogène, Acétylcholine à 0,1p.g/ ml. Celle-ci ne reprend pas même si le
milieu est enrichi en calcium. Ces mêmes effets sont obtenus lorsque l'extrait est
remplacé par un bloqueur de canal calcique, Vérapamil à 0,5 mg/ ml. En présence
d'un chélateur du calcium extracellulaire, EDTA à 0,5 mg/ml, le plateau est toujours
réduit mais la contracture est récupérée jusqu'à 90 % après addition progressive du
calcium dans le milieu.
Nos résultats laissent suggérer que l'extrait éthanolique des feuilles de K.
senegalensis
relaxe
le muscle lisse iléal de cobaye en bloquant tout comme
Vérapamil le canal calcique.
Mots clés : Khaya senegalensis, canal calcique, spasmogène, contracture, iléon de
cobaye.
Introduction
Les organes de K. senegalensis ( Desr.) A Juss.(Meliaceae) encore appelé
caïlcédrat sont couramment utilisés en médecine traditionnelle pour traiter diverses
affections (1).
D'après les données pharmacologiques, l'écorce de tronc a révélé des effets~
hypothermisant (9), anti-ulcéreux (2), anti-inflammatoire (14) et les feuilles ont montr?
des propriétés anti-diarrhéïques (13).
- 3 -
Les travaux phytochimiques (11) ont révélé la présence de limonoïdes dans les
feuilles de cette plante.
.
, .
Dans un précédent travail (13), nous avons rapporté que le -décocté de feuilles
de la plante relaxe l'iléon de cobaye:
Le présent travail a pour objectif d'élucider le mécanisme par lequel l'extrait
de K. senegalensis agit sur le muscle lisse iléal de cobaye; il s'agit plus précisément
d'apprécier l'action de l'extrait sur le mouvement du calcium-' au niveau de l'iléon
car dans le muscle lisse intestinal tout COmIne les autres types de muscles, le calcium
joue un rôle important dans le mécanisme de la contraction.
Matériel et Méthodes
1- Préparation de l'extrait:
Les feuilles de K. senegalensis sont récoltées dans le jardin botanique de la
Faculté des Sciences , identifiées par le Département de Botanique de la Faculté où
un specimen est déposé dans l'herbier. Les feuilles sont séchées à l'ombre au
Département de Physiologie Animale puis réduites en poudre. Celle-ci est laissée en
macération dans l'éthanol pendant 48 heures en agitation continue puis filtrée sur du
coton hydrophile. Le filtrat est évaporé à 45°C dans un évaporateur rotatif. Le produit
obtenu, extrait éthanolique de consistance pâteuse est soluble dansl'alcool.
2- Enregistrement de'l'activité biologique:
Le cobaye sans distinction de sexe pesant 300 à 450 g est mis à jeun pendant
24 heures avec accès libre à l'eau. Quelques heures avant l'opération il est privé
, d'eau. Il est saigné après dislocation cervicale. Après laparotomie, l'iléon est prélevé
et placé dans une solution de Mac Ewen. Un morceau de 2 cm environ est découpé
et monté dans la cuve à organe isolé rempli de Mac Ewen oxygéné et relié à
l'enregistreur GOULD 8000S par le capteur
mécanique.
La tension de base est
maintenue à 0,5 g et la température du bain à 37 oC .
3- Protocole expérimental: Deux types de protocoles ont été expérimentés:
- Le test préventif: Ce test pennet de mettre en évidence la propriété anti-
spasmodique de l'extrait (10). On fait agir sur le tonus de base l'extrait suivi Imn plus
·~cll.tddu spasmogène, Acétylcholine (Sigma) à 0,2 JLg/ml. La contracture obtenue est
.' comparée à celle produite par le spasmogène seui.
- Le test curatif : Il est utilisé pour apprécier le potentiel spasmolytique de
l'extrait (3). L'iléon est précontracté par le spasmogène . Une fois le plateau obtenu
on fait agir l'extrait.
- 4 -
Pour reconstituer le milieu en calcium, lors des expériences réalisées en milieu
sans calcium, 4 injections de 1,2mg chacune de chlorure de calcium ont été effectuées,
soit 4,8 mg c'est-à-dire 0,24 mg/ml (concentration de chlorure de calcium dans le Mac
Ewen normal) à la quatrième injection.
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4- Les solutions : La solution de référence utilisée est le Mac Ewen.
L'extrait est solubilisé dans l'éthanol à 1%, dose qui n'a aucun effet sur le
paramètre physidlogique.
Vérapamil (Sigma) et EDTA, Ethylène Diamine Tétracétique (Sigma) sont
préparés de manière à avoir les concentrations finales de 0,5 mg/ ml.
Remarque: Pour chaque protocole expérimental, 4 essais au moins ont été effectués.
Résultats
1- Effets de l'extrait éthanolique sur l'iléon:
1
L'Acétylcholine (ACH) à 0,2 /lg /ml induit sur le muscle iléal une contracture
r
d'environ 3,5 g d'intensité. L'effet se maintient à 2g pendant plusieurs minutes
(Fig.1). Le tonus de base est retrouvé après lavage.
Lorsque le spasmogène est précédé de l'extrait 10-4 g/ml, l'intensité de la
contracture est réduite. L'effet se stabilise au bout de 4 mn avec un taux de réduction
de 80%. A 10-3 g/ml, le taux de diminution est estimé à 87,5 % à l'état stable (
Fig.2 : a, b ).
L'extrait à 10-3 g/ml appliqué au niveau du plateau de la contracture provoquée
par le spasmogène relaxe le muscle lisse jusqu'au tonus de base au bout de 3mn
environ (100 % de réduction). Cet effet est suivi d'une hypotonie (Fig. 3).
2 - Activité anti-calcique de l'extrait:
En milieu sans calcium, l'effet de l'ACH est supprimé. Cet effet est restauré
progressivement après addition de doses croissantes de chlorure de calcium (Fig. 4).
Le milieu sans calcium provoque une hypotonie du muscle; le tonus de base
est récupéré par l'addition au milieu du chlorure de calcium (Fig.5). Lorsque l'extrait
est ajouté au milieu sans calcium, le tonus de base n'est pas restauré par l'apport des
ions Ca2+ (Fig. 6)
K. senegalensis à 10-3 g/ml relaxe le muscle précontracté en présence de ACH.
L'apport supplémentaire de calcium ne présente aucun effet (Fig. 7a). Lorsque l'extrait
est remplacé par EDTA à 0,5 mg/ml, la contracture est récupérée à environ 90 % en
- 5 -
présence de calcium (Fig.7b). Par contre l'addition de calcium n'inverse pas l'effet de
relaxation induite par Vérapamil à 0,5 mg /ml sur l'iléon précontracté (Fig.7c).
Discussion et conclusions
L'extrait éthanolique de feuilles de K. senegalensis tout comme le décocté
réduit le tonus de base, inhibe l'action de l'ACH et relaxe le muscle précontracté par
le spasmogène. II a une action anti-spasmogène et présente des propriétes
spasmolytiques.
D'après nos résultats, le calcium est indispensable pour la manifestation de
l'effet contracturant de l'ACH puisque l'effet du spasmogène qui est supprimé en
milieu sans calcium est restauré après addition du calcium dans le milieu. En effet la
contraction du muscle lisse est sous-tendue par le calcium (12,15), surtout
l'augmentation du calcium intracellulaire. Celle-ci peut provenir de la libération du
calcium des sites intracellulaires , de l'influx calcique par le canal voltage-dépendant
ou récepteur-dépendant (8) ou de l'efflux actif du calcium. L'ACH
en favorisant
l'ouverture des canaux calciques du muscle iléal facilite l'influx calcique, accroît la
concentration calcique intracellulaire et provoque la contracture (7, 4, 12).
L'EDTA et le Vérapamil sont des anti-calciques. L'EDTA est un chélateur de
calcium et rend par conséquent inefficace le calcium extracellulaire (5). II relaxe le
muscle précontracté par l' ACH mais l'augmentation du calcium extracellulaire permet
d'inverser à 90 % l'effet. Le Vérapamil par contre relaxe l'iléon de façon irréversible
même après augmentation du calcium dans le bain. Il empêche l'entrée du calcium
dans la cellule par blocage du canal calcique (6).
L'effet de l'extrait étant comparable à celui de Vépamil, ce qui suggère que
l'extrait de K. senegalensis relaxe l'iléon de cobaye en bloquant le canal calcique ou
en empêchant l'entrée du calcium dans le cytosol.
Remerciements:
Les auteurs remercient l'AUPELF-UREF qui a apporté son
soutien financier à ce travail dans le cadre du Programme
JER 3006.
- 6 -
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- 8 -
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Fig.1: Effet contracturant de l'acétylcholine (ACH) à 2.10" slml sur l'iléon
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de Khaya senegalensis (Ks) sur l'iléon de.cobaye in vitro:
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Fig. 3: Effet spasmolytique (curatif) de l'extrait éthanolique des feuilles sèches
de Khaya senegalensis (Ks)à 10-3 glmJ sur l'iJéon de cobaye in vitro
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Fig. 6: Effet du Ca sur le tonus de base de l"iléon de cobaye in vitro en présence
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'10·) &,mJ
b: 1'6thyl~De dillllÙne t6tnl-1C~tique (EDTA) iO,$lII8f'ml
c: Vk1IpllJlil (Vp)' O,sD1lVmI
- 15 -