Pharm. Méd. trad. afro 1995 pp 43-54 ..
ETUDE PHARMACO-CHIMIQUE DE NAUCLEA LATIFOLIA
Sm. (RUBIACEAE) :
Relation "Principes chimiques et Activité antimicrobienne"
KABORE, Z.I.* ; GUlSSOV, LP.* ; SOVRABIE. S.**
* Institut de Recherche sur les Substances Naturalles
(I.R.S.N.) 03 B.P. 7192 OUAGADOUGOU 03 - BURKINA FASO
f
t
** Service de Santé des Forces Armées Burkinabé
t
4è région Militaire - BOBO-DIOULASSO - BURKINA FASO.
~
f
r
t
RESUME
1
~
Nauclea latifolia Sm. est une plante de la Pharmacopée burkinabé couramment
J
utilisée dans le traitement des affections digestives sévères, notamment dans le
i
traitement
des troubles digestifs que l'on peut
assimiler
aux gastro-entérites
couramment identifiés en milieu hospitalier burkinabè.
1
~
Notre étude se situe dans le cadre de:
1
f
* l'évaluation de l'activité antimicrobienne des extraits, par la mesure des
Concentrations Minimales Inhibitrices et Bactéricides (CMI et CMB) ;
1
1
* la comparaison de l'activité antimicrobienne entre extraits de plante et les
~•
antibiotiques usuels utilisés en milieu hospitalier;
f
*
1
l'appréciation de l'activité antirnicrobienne en rapport avec les principes
1
chimiques présents dans les extraits de plante;
1
"
f1
* la détermination de la Dose Léthale 50% (DL 50) dans le but de fixer une
t
marge de sécurité d'emploi de la drogue.
f
~
t,
1
1
1
,
MOTSCLES
1
Nauclea latifolia Sm. (Rubiaceae). Pharmacopées Africaines -Gastro-entérites.
1
Activité antirnicrobienne. Alcaloïdes -Tanins polyphénols - Saponosides.
!it
1
- 44-
INTRODUCTION
Suite à un environnement socio-économique caractérisé de plus en plus par
une conjoncture difficile, les spécialités pharmaceutiques, voire les médicaments
essentiels génériques, sont hors de portée de nos populations africaines les plus
démunies.
Ce constat laisse entrevoir des solutions à court terme. Une des solutions, c'est
l'étude qui porte sur nos plantes médicinales. En effet, l'utilisation rationnelle des
données de la Pharmacopée et de la Médecine Traditionnelles de notre sous-région,
peut apporter des satisfactions dans la résolution des problèmes de couverture sanitaire
de nos populations.
Dans ce contexte général, le Burkina Faso a choisi comme axe prioritaire de
recherche appliquée en santé publique, la valorisation de la pharmacopée africaine.
Les activités de recherche de l'Institut de Recherche sur les Substances
Naturelles (I.R.N.S.) de Ouagadougou se situent dans ce contexte; les priorités sont
hiérarchisées en fonction des pathologies, lesquelles sont définies par le Ministère
chargé de la Santé.
Dans cette approche, le choix de Nauclea latifolia Sm. s'est justifié pour les
raisons essentielles suivantes:
le) La plante n'est pas inconnue de la littérature.
2e) Il s'agit en outre d'une plante réputée dans le traitement de pathologies jugées
préoccupantes au Burkina Faso ; parmi celles-ci on peut retenir les diarrhées
dysentériformes, les gastro-entérites diverses, les affections hépato-biliaires, uro-
génitales et broncho-pulmonaires, les maladies métaboliques.
Les principaux usages de la drogue, relevés dans la littérature, justifient ce
choix. En outre, l'approche physico-chimique, en relation avec l'étude microbiologique
et toxicologique, peut être d'un support appréciable quant à l'utilisation efficiente de
cette drogue.
L'étude comparative de l'activité des extraits de feuilles et des écorces de
racines a été entreprise dans le but de démontrer que les feuilles pourraient valablement
remplacer les racines.
-45 -
1 - MATERIEL ET METHODE
1. Matériel de l'Etude
1.1. Le matériel végétal
Il est constitué de feuilles et d'écorces de Nauclea latifolia Sm., récoltées après
la saison des pluies en Octobre 1990 dans la localité de Boromo (Zone Ouest du
Burkina), à 180 Km de Ouagadougou.
Les échantillons sont lavés abondamment à l'eau courante du robinet, puis
séchés sur des claies sous ventilation à l'abri de la lumière, à la température ambiante
comprise entre 20 et 25-C.
1
Après séchage, les échantillons sont finement broyés, conservés dans des
t
flacons stériles hermétiquement fermés avant d'être transformés en extraits hydro-
r
alcoolique et alcaloïdique.
!
1
i
!
1.2. Les microorganismes
1
Ce matériel est constitué de trois (3) entérobactéries à Gram (-) et d'une cocci à
Gram (+), prélévées de selles pathologiques d'enfants hospitalisés au Centre Hospitalier
1
National Yalgado Ouedraogo de Ouagadougou.
i
ce sont : - Escherichia coli - SaLmonella typhi - Shigella flexneri - StaphyLoccocus
aureus
1
1
Ce matériel a été complèté par Escherichia coli sérotype 0127, prélévé des
selles d'un enfant hospitalisé chez les Saints Camilliens de Ouagadougou.
f
1.3. Les animaux de laboratoire
1
Ils sont constitués de souris femelles de souches NMRI, élévées dans les
conditions de stabulation suivantes: température maintenue entre 20 et 25-C ; humidité
75% ; éclairage naturel du jour de 06 h à 18 h et obscurité de 18H à06 H,
1
Quatre (4) lots homogènes d'animaux de 6 souris ont été constitués avec un lot
témoin. Les poids des animaux sont compris entre 30 et 35 g.
1
t1
!
1
1
1
- 46-
2. Méthode
2.1. Obtention des extraits végétaux
Les extraits bruts alcaloïdiques sont obtenus par extraction continue au soxhlet
après alcalinisation de la drogue par l'ammoniaque à 10%. Après évaporation du
solvant (CHC13)' le résidu brut est pesé à poids constant.
Les extraits hydroalcooliques sont obtenus par macération de la drogue dans le
solvant d'extraction composé d'éthanol et d'eau dans le rapport 7: 3, VN. Une partie, la
phase aqueuse résiduelle est éliminée par cryodessication. Le résidu est pesé à poids
constant.
2.2. Essais antimicrobiens
La méthode utilisée est celle de dilution liquide couplée à l'étalement sur milieu
solide gélosé telle que pratiquée couramment en bactériologie médicale (CHABERT,
1985).
Les tubes et les boîtes de pétri ont été incubés dans les mêmes conditions
(37·C, pendant 24 H). La croissance des germes a été appréciée par un dénombrement
des colonies sur milieux gélosés.
2.3. Réalisation d'un antibiogramme et essais comparatifs
avec les extraits végétaux
L'antibiogramme a été effectué selon le protocole classique pratiqué en
bactériologie médicale. Il consiste à rechercher l'inhibition du développement microbien
sur un milieu gélosé.
Les extraits végétaux de concentration connue sont déposés à raison de 10 ml
sur les disques de papier Wattmann de 09 mm de diamètre ; ces disques imprégnés
d'extraits sont déposés à la surface de la gélose ensémencée par le germe de l'étude.
L'incubation est effectuée en étuve à 3rC pendant 24 h. Les essais sont repétés
cinq (5) fois afin:
1·) de comparer les effets des antibiotiques avec ceux des extraits;
2·) de comparer les effets des extraits entre eux.
-47 -
2.4. Etude chimique qualitative et quantitative des principaux
constituants de la drogue
La poudre de drogue est épuisée successivement par extraction continue dans
un soxhlet par des solvants de polarité croissante (CHCI3 ; CH3-CH2-0H ; H20).
Les réactifs de caractérisation classique sont utilisés pour la mise en évidence
des principaux principes chimiques. La chromatographie analytique sur plaque de silice
est utilisée pour l'isolement des alcaloïdes.
La teneur de l'échantillon en flavonoïdes totaux est estimée globalement par la
formation d'un complexe flavonoïdes -zirconium (HORHAMMER, 1951 ; PARIS,
1977 : cités par BAILLEUL, 1980). Le complexe coloré, stable en milieu tamponné,
permet d'évaluer par spectrophotométrie la teneur en flavonoïdes de l'échantillon par
rapport à une solution témoin de rutoside.
Le dosage global des composés phénoliques est effectué par oxydation en
utilisant soit le réactif de Folin-Denis, soit le permanganate de potassium (Ribereau -
Gayon, 1968).
La teneur de l'échantillon en strictosamide (gluco-alcaloïde obtenu pur par
C.C.M) est estimée par spectrophoto-densitométrie.
L'indice hémolytique des saponosides est déterminé selon la technique décrite
par PARIS (PARIS, 1965).
III - RESULTATS
1. Teneurs en principes chimiques des échantillons
* Extraits hydroalcooliques (résidus brut) :
- Feuilles 11,9% ; Racines 10,17%
* Totum alcaloïdique : Feuilles 0,53% ; Racines 0,40%
2. Teneurs en tlavonoïdes totaux des racines
(à partir d'une gamme étalon de rutosides).
Cone.
0,204
0,102
0,068
0,051
0,040
0,034
Extrai
(mg.ml)
t
f
D.O.à
0,717
0,371
0,254
0,192
0,155
0,125
0,326
!
400nm.
r = 0,9996 : Coefficient de corrélation
1
1
-48 -
A 400 nm, on a une 0.0. = 0,326 pour l'extrait; ce qui correspond sur la courbe à
0,3628 mg/ml en équivalent de rutoside.
3. Teneur globale en composés phénoliques
* Oxydation par KM n04
Volumes de KM n04 1O-2N versés de la burette:
nI = 3,2 ml (tube témoin)
n2 = 3,76 ml (tube d'essai)
IKMn04 =5 (n2 - nj ) =2,8.
* Oxydation par le réactif de Folin-Denis
(gamme étalon d'acide tannique)
TUBES
Blanc
1
2
3
4
5
Prise d'essai
Cone. (mcg/ml)
° 5,5
11
16,5
22
27,7
15,6
D.O.à286
° 0,154 0,374 0,512 0,650 0,767
0,463
r = 0,98 : coefficient de corrélation
A 286 nm, l'extrait donne une 0.0. = 0,463 ; ce qui correspond sur la courbe à
1,56 mcg/ml en équivalent d'acide tannique.
4. Dosage du strictosamide
- Par spectrophotométrie U. V.
(gamme étalon de strictosamide)
Conc.(mg./ml)
Prise d'essai
D.O.à288nm
0,174
r = 0,9995 : Coefficient de Corrélation
La 0.0. de 0,174 correspond sur la courbe étalon à 3 men/ml de rutoside.
5. Indice Hemolytiques des saponosides
Ih = S . .i!. avec S = 30.000 ; a = 0,100 g ; b = 0,200 g.
b
d'où S . .i!. =30.000 0,100 =15.000
b
0,200
6. CMI et CMB extraits vis à vis des germes testés
Ces valeurs sont indiquées dans les tableaux II et III de synthèse.
7. Antibiogramme par la méthode des disques
Les valeurs des diamètres moyens d'inhibition de croissance des
germes testés sont consignées dans le tableau IV de synthèse.
8. Détermination de la DL 50
(chaque lot est constitué de 6 souris)
N- des lots
Poids moyens
Dose administrée
% de morts
par lots (g ± s)
(mg/kglPc en IP)
<24H
>24H
1
33 ± 3,01
1000
0
0
2
29 ± 1,97
1500
23
46
3
27 ±2,52
2000
93
93
4
31 ± 1,18
2500
100
100
La DL calculée sur la courbe log-Probit est égale à 1600 mglkgIPC
Tableau 1: Principes chimiques mis en évidence par l'analyse qualitative
des extraits des racines de Nauclea Latifilia.
EXTRAITS
GROUPES DES PRINCIPES CHIMIQUES RESULTATS
MATIERES GRASSES:
- Stérols-Triterpènes
XXX
- Caroténoïdes
- Acides gras
X
ALCALOIDES BASES :
CHLOROFORMIQUE
- Draggendorf
réactifs de
XXX
- Mayer
caractérisation
XXX
AGLYCONES FLAVONIQUES
EMODOLS
COUMARINES (Fluorescence à 375 nm)
X
ETHANOLIQUE
TANNINS (Polyphénols)
XXX
COMPOSES REDUCTEURS
XXX
Non hydrolysé
ALCALOIDES SELS
- Draggendorf
réactifs de
XXX
- Mayer
caractérisation
STEROLS-TRlTERPENES
XX
Hydrolysé
CAROTENOIDES
EMODOLS
AQUEUX
GLUCIDES
XX
SAPONOSIDES
X
TANNINS (Polyphénols)
XXX
Tableau II : Histogramme 1 : Action antibactérienne de l'extrait hydroalcoolique
des écorces de racines de Nauclea lati/olia sm. des germes testés.
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E .C.II
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S, ', ....'1
•• A."••
GEIIMES TESTES
Histogramme 2: Dilution maximale inhibitrice (DMI)
Histogramme 3: Concentration minimale inhibitrice (CMI)
des différents extraits des écorces de Nauclea latifolia.
des différents extraits des écorces de Nauclea latifolia.
DILUTION MAXIMA~E INHIBITRICE
sm.
lNH.IBITRICE 1 Mg /ml \\
O,2S
a,
[ . Calt
E. Cali
S. T"',ptll
S.flu".rl
S. br.u.
&EliMES TESTE S
o E,'ral1 hydtOQleOol
•
El.trait
ttrdr6olcool
DAIcaloïd••
locaux
- 51-
Tableau III: Determination des concentrations minimales inhibitrices, Bactéricides
(CMI et CMB) des extraits vis à vis d' E COLI 0127 (essais avec Nauclea Latifolia)
Extraits
Solutions hydro-
Organes
alcooliques de macération
Ecorces de racines
CMI =CMB =9mg/ml
CMI
= CMB = 3,mg/ml
de N. latirolia
Inoculum = 9.10 8 germes /ml
Inoculum = 1,67.108 germes /ml
Feuilles de N. latlïofla
CMI =3,8mg/ml
CMI =CMB =4,5mg/ml
CMB =7,8mg/ml
Inoculum =1,45.10 8 germes/ml
Inoculum = 9,6.108 germes /ml
Tableau
IV:
Diametres moyens d'inhibition de développement d'E. coli 027 sur
disques d'antibiotiques et sur disques impregnes d'extraits d'ecorces de racines de
Nauclea Latifolia Sm.
1. DISQUES D'ANTIBIOTIQUES STANDARD
Néomycline (Néomycine)
18,00
Kanamycine (Kanamycine)
15,00
Acide pipémidiques (Pipram)
12,00
Acide nalidixique (Négram)
10,00
Streptomycine (Streptomycine)
Il,00
Colistine (Colimycine)
16,00
Polymyxine (Polymyxine B)
9,50
2. DISQUES DE PAPIER WATHMAN IMBIBES
13,50
D'EXTRAIT HYDROALCOOLIQUE
3. DISQUES DE PAPIER WATHMAN
IMBmES D'EXTRAIT ALCALOÏ DlQUE
15,50
Les chiffres dans la colonne de droite représentent les diamètres moyens d'inhibition en mm.
IV - DJSCUSSIONS ET CONCLUSION
Les extraits hydroalcooliques, de même que les extraits d'alcaloïdes totaux,
testés in-vitro, témoignent d'une action inhibitrice de croissance vis-à-vis des germes
de l'étude. ces germes présentent une sensiblité inégale aux effets des extraits; celle-ci
se présente comme suit : staphylococcus aureus > E. coli > Shigella flexneri =
Salmonella typhi.
- 52-
Les antibiogrammes réalisés ont montré la possibilité d'une étude simple au
laboratoire : la recherche de l'inhibition du développement microbien sur un milieu
gélosé. Il est apparu au cours de cette étude que le pouvoir antibiotique induit par
l'extrait alcaloïdique est plus fort que celui obtenu avec l'extrait hydro-alcoolique.
L'évaluation de la toxicité générale aigüe par la mesure de la DL 50 a-permis de
situer la marge de sécurité d'emploi de la drogue.
Les profils bactériostatique et bactéricide des extraits militent en favaur de
l'utilisation des feuilles comme succédané des racines, ce qui constitue une contribution
à la sauvegarde de Nauclea latifola sauvagement exploitée. Les méthodes d'analyse
chimique utilisées ont permis d'avoir une idée de la relation entre constituants et activité
antimicrobienne des extraits. Ces méthodes peuvent participer à la standardisation
chimique des produits de plantes médicinales pour la formulation médicamenteuse
moderne.
BIBLIOGRAPHIE
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