Sciences et Médecine
Effets du venin d'un serpent (Bitis arietans) et d'une plante
antivenimeuse de la pharmacopée traditionnelle africaine
(Annona senegalensis) au niveau de la jonction nerf sciatique-
muscle gastrocnémien de crapaud (Buffo regularis)
Dr GREMA MOUSTAPHAI et Pr KONE PENAHOURE PASCAO
L Département de Biologie, Faculté des Sciences, Université Abdou Moumouni. BP 110662. Niamey Niger, gremam@yaboo
2. Laboratoire de Physiologie animale. UFR Biosciences. Université de Cocody-Abidjan, 22 BP 582 Abidjan 22, Côte d'Ivoire
1. Introduction
les espèces, peu onéreux et conservables à la
température ordinaire.
Les morsures des serpents venimeux Des études ethnobotaniques et floristiques
constituent un problème médical, social et
effectuées au Niger par ADJANAHOUN et Coll.
économique pour les populations rurales
(1981) ; au Nigeria par BURKILL (1985) ; au Bénin
africaines, à faibles revenus et éloignées des
par ADJANAHOUN et Coll. (1989) et au Ghana par
centres médicaux (BON, 1994).
ABBIW (1990) ont rapporté des activités
antivenimeuses de Annona senegalensis.
Le coût relativement élevé de la sérothérapie
antivenimeuse (SAV) occidentale rend le recours à
À notre connaissance, aucune étude sur les effets
ce !raitement, aujourd'hui plus encore, inaccessible
antivenimeux de Annona senega/ensis n'a été
à la majeur partie, sinon à la quasi totalité de la
effectuée. Toutefois, il est prouvé chez Annona
population africaine. Selon CHIPPAUX (1989),
senega/ensis, des activités larvicides par MACKIE
dans une étude menée au Bénin, 80% des
et MISRA (1956) ; hypotensives par SCHNEIDER
personnes mordues par des serpents affirment
et Coll. (1973) ; antibactériennes par YEI-FEN-L1N
qu'elles utilisent plutôt le traitement traditionnel que
et Coll. (1979); antiparasitaires par JACOBSON in
celui de la médecine moderne occidentale. Ceci
OLIVER-BEVER (1986) et anti-Ieucémique par
s'explique d'une part par le fait que la flore
HUI et Coll. (1990).
africaine est riche en plantes médicinales réputées
pour leur efficacité contre les morsures de
Aussi, le but de ce travail a-t-il été d'établir,
serpents et d'autre part,
parce que ces
scientifiquement, par une expérience sur l'animal,
médicaments antivenimeux africains auraient
les propriétés antivenimeuses de Annona
l'avantage sur les sérums et les vaccins, d'être
sénéga/ensis.
facilement accessibles, compatibles pour toutes
Il. Matériel et méthode
lyophilisé et conservé à 4°C (à cause de sa
thermolabilité). Dans le but de rester le plus proche
possible des conditions naturelles de morsures, les
1. Préparation des extraits
solutions sont préparées en diluant le venin total
lyophilisé
dans
de
l'eau
bidistillée
aux
Le venin de Bitis arietans (Ba) est prélevé
concentrations allant de 10-2 g/ml (100 mg de
manuellement sur des spécimens vivants du
venin + 10 ml d'eau bidistillée) à 10-5 glml (1 ml de
Serpentarium de l'Institut Pasteur d'Adiopodoumé
venin à 10-4 g/ml + 9 ml d'eau bidistillée).
(Côte d'Ivoire). Le venin est ensuite congelé puis
Rev. CAMES - Série A, vol. 02, 2003
79
Sciences et Médecine
Pour la préparation de l'antivenin, les échantillons
effets du venin et de l'antivenin, on suit pour
d'écorce de tige de Annona senegalensis (As) ont
chacune des deux substances, son effet seul dans
été achetés en janvier 1994 sur le marché d'Abobo
le temps alors que pour l'antagonisme, nous
à Abidjan (RCI) et authentifiés par le Dr VANGAH-
plaçons le coton imbibé de l'une des substances et
Madeleine et le Prof. AKE ASSI Laurent du Centre
15 minutes après, on remplace la première
National de Floristique (CNF) de l'Université de
substance par la deuxième et on suit l'effet dans le
Cocody-Abidjan. Ces échantillons sont séchés à
temps. Là aussi, chaque condition expérimentale
l'air ambiant du laboratoire puis pulvérisés au
est répétée 3 fois (n=3).
broyeur. 10 9 de ce broyat d'écorce de tige sont
rr,is en macération avec agitation magnétique
3. Analyse statistique des résultats
constante dans 100 ml d'eau bidistillée durant 24
heures. La solution obtenue est filtrée plusieurs
Pour une expérience sur un échantillon de n
fois sur du coton hydrophile puis du papier filtre. Le
observations, la moyenne X oqtenue sur cet
filtrat obtenu (solution mère) à la concentration de
échantillon de n observations suit une loi normale.
10- 1 g/ml (10 g de poudre + 100 ml d'eau
Dans le cas des petits échantillons (n<30), la
bidistillée) et qui constitue la solution aqueuse
moyenne est exprimée sous la forme X ± ESM
d'antivenin, est utilisé directement, après plusieurs
(Erreur Standard sur la Moyenne).
dilutions, pour les expérimentations, ceci afin de
rester le plus près possible des conditions
t.S
d'uti:isation des plantes par les tradithérapeutes
qui les diluent dans de l'eau.
E S M= Jll avec:
t = valeur lue sur la table de Student au degré de
2. Protocole expérimental
liberté, d d 1= n-1 à 5% de risque
Ces substances pouvant être toxiques, nous avons
s = écart type estimé sur l'échantillon
d'abord procédé à un test toxicologique pour
déterminer leur toxicité. Pour cela, nous utilisons
des lots de 10 souris blanches de souche SWISS,
III. Résultats
variété Albinos, âgées de 4 à 6 semaines et de
poids moyen 30 g. Nous injectons par voie
1. Etude toxicologique
intrapéritonéale, des concentrations différentes de
venin ou d'antivenin à raison d'une concentration
L'étude toxicologique a montré que l'injection des
pour chaque lot et nous relevons le taux de
solutions de venin de Bitis arietans et de l'extrait
mortalité durant 6 heures de temps pour chaque
aqueux de Annona senegalensis à différentes
lot. Chaque condition expérimentale est répétée 3
concentrations provoque des modifications de
fois (n=3). La DL50 est déterminée en utilisant la
comportement
caractérisées
par
des
méthode graphique de MILLER et TAINTER et la
déplacements fréquents dans les cages, suivis des
méthocie par calcul de DRAGSTEDT et LANG.
difficultés de déplacement, des convulsions et la
mort des souris pour la concentration 6.10-4 g/ml
Un dispositif comportant un stimulateur de type
KAT JI, une cuve à nerf et un oscilloscope
de venin.
cathodique ont permis de montrer l'effet des
Nous avons enregistré des mortalités avec le venin
substances sur l'activité électrique de la
de Bitis arietans alors que nous n'avons pas noté
préparation nerf sciatique-muscle gastrocnémien
de mort avec les concentrations testées de l'extrait
de crapaud (Buffo regularis). Les phénomènes
aqueux de Annona senegalensis malgré la
électriques nerveux et musculaires apparaissant
présence des signes décrits plus-haut.
sur l'écran de l'oscilloscope sont filmés à l'aide
d'une caméra Polaroïd (C-5 OSCILLOSCOPE
Nous avons obtenu, pour le venin de Bitis arietans,
CAMERA).
une DL50 de 2,28mg/kg de poids corporel par la
méthode graphique (figure 1) et une DL50 de
Pour étudier l'action des substances sur la
2,13mg/kg de poids corporel par la méthode de
préparation nerf-muscle, on dépose au niveau de
calcul.
la jonction neuromusculaire un petit coton imbibé
de la solution à tester. Pour l'étude comparée des
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Sciences et Médecine
Pourœntall" de mortalité
j
o
y = U,643 + 70,742*WG(x)
RA 2 =0,916
90
8
70
c
6
50
4
30
Il
2
la
0
,1
10
Doso de Ba en mwkll de p, Co
Figure 1 : Courbe de l'évolution du taux de mortalité en fonction de doses de venin
2. Activité électrique de la prépa-
potentiel d'action nerveux puis un potentiel d'action
ration nerf sciatique-muscle
du muscle innervé sur l'écran de l'oscilloscope.
Lorsqu'on applique le coton imbibé de Ba ou As,
gastrocnémien
l'amplitude du potentiel d'action musculaire (PAM)
diminue avec le temps jusqu'à s'annuler
Le venin de Bitis arietans à 10-2 g/ml et l'extrait
complètement à 37 minutes pour Ba (Tableau 1) et
aqueux de Annona senegalensis à 10-1 g/ml ont
40 min pour As (Tableau Il). Les durées du PAM en
été testés au niveau de la jonction nerf-muscle. En
l'absence de Ba et As sont respectivement de
conditions
normales
d'expérience,
après
2, 13±0,12 ms et 1,87±0,24 ms.
stimulation du nerf sciatique, nous obtenons un
Tableau 1 : Evolution en fonction du temps de l'effet de Ba sur l'amplitudè du PAM
de la préparation nerf sciatique-muscle gastrocnémien de crapàud
Temps en min
0
2
10
30
37
Amplitude du PAM en mV
15±2,05
1l±2,52
lO±1,03
5±O
O±O
% de diminution
0
26,66
33,33
66,66
100
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ScrencesetMédecme
Tableau 1/ : Evolution en fonction du temps de l'effet de As sur l'amplitude du PAM de la
préparation nerf sciatique-muscle gastrocnémien de crapaud
Temps en min
0
2
10
30
411
Amplitude du PAM en mV
29±5,44
19±2,05
16±0
5±1,3
O±O
% de diminution
°
34,48
44,82
82,75
100
3. Antagonisme entre le venin et
est mis après le venin, l'amplitude du PAM diminue
l'antivenin
de 75,75 % après 45 min (Tableau III) alors que
cette amplitude ne diminue que de 21,73 %
lorsque l'antivenin est mis avant l'antivenin après
Les observations de l'interaction venin-antivenin
toujours 45 min (Tableau IV). La présence de
montrent là aussi une diminution de l'amplitude du
l'antivenin empêcherait à l'effet du venin de se
PAM sans toute fois la disparition complète de
manifester.
celle-ci. Nous remarquons que lorsque l'antivenin
Tableau III : Evolution en fonction du temps de l'effet de l'antagonisme Ba-As sur l'amplitude du PAM de la
préparation nerf sciatique-muscle gastrocnémien de crapaud
Temps en min
0
15
30
45
Amplitude du PAM en mV
6,6±0,06
5,6±0,06
2,6±0,2
1,6=1:0,2
% de diminution
°
15,15
60,60
75,75
Tableau IV : Evolution en fonction du temps de l'effet de l'antagonisme As-Ba sur l'amplitude du PAM de la
préparation nerf sciatique-muscle gastrocnémien de crapaud
Temps en min
0
15
30
45
Amplitude du PAM en mV
Il,5±1,03
10±1,78
9,5±1,03
9~=0
% de diminution
0
13,04
17,39
21,73
IV. Discussions
Pour Ba, les valeurs de la DL50 obtenues par la
méthode graphique (2,28 mg/kg de poids corporel)
et par la méthode de calcul (2,13 mg/kg de poids
L'administration par injection Intrapéritonéale (1. P.)
corporel) sont très voisines. Cela nous permet de
de l'extrait aqueux de Annona senegalensis a
nous assurer de la validité
des valeurs
permis
d'observer
des
modifications
de
déterminées. D'après DIEZI (1989) qui a utilisé la
comportement des souris, ce qui suggère que As,
V. O., des valeurs de DL50 inférieures à 5 mg/kg
sans être toxique, a des effets pharmacologiques
de poids corporel correspondent à des substances
notables. Malgré la toxicité non établie de As par
hautement toxiques et des valeurs supérieures à
I.P., son utilisation doit se faire avec prudence
5000 mg/kg de poids corporel caractérisent les
parce que la détermination de la DL50 peut
substances faiblement toxiques. La valeur de 2,28
dépendre du mode d'administration de la
mg/kg de poids corporel que nous avons obtenue
substance entre autres.
classe le venin de Bitls arietans parmi les
Rev. CAMES - Série A, vol. 02, 2003
82
Sciences et Médecine
substances hautement toxiques. Les enflures et
une diminution du taux d'acétylcholine dans
nécroses qui caractérisent le syndrome vipérin
l'espace synaptique.
consécutif à une morsure de vipère sont une
preuve de la toxicité du venin de Bitis arietans qui
V. Conclusion
est un Vipéridé. D'après FITZSIMONS (1911), une
seule morsure de serpent peut produire
Au niveau de l'activité électrique de la préparation
suffisamment de venin pour tuer 10 à 15 hommes
nerf-muscle de crapaud, Ba et As ont une action
robustes.
:5curare-like:5, provoquant un blocage du passage
Les divers symptômes observés à la suite de
de l'influx nerveux au niveau de la jonction
l'injection de As et Ba supposeraient que ces
neuromusculaire. L'antivenin (As) serait plutôt
substances agissent au niveau de plusieurs
efficace lorsqu'il est utilisé pour le traitement
organes de l'animal. Les difficultés de déplacement
préventif que curatif. C'est ce qui explique le fait
de la souris qui traîne péniblement le train arrière
que les chasseurs, les travailleurs aux champs
justifie le choix du protocole expérimental.
mangent des boulettes de ces plantes avant d'aller
à leurs occupations.
La diminution progressive puis la disparition sur
l'écran de l'oscilloscope, du potentiel d'action
VI. Bibliographie
musculaire en présence de Ba et As suggère le
blocage du passage de l'influx nerveux au niveau
- ABBIW, D. K. (1990). Useful plants of Ghana
de la jonction nerf-muscle. L'influx nerveux ne
Royal Botanic Garden Kew Ed.
parvient plus au muscle. Les effets des deux
substances sont comparables à ceux du curare
- ADJANOHOUN, E. J.; AHYI, A.M.R. ; AKE-
d'où leurs effets curare-like. Ces résultats sont
ASSI, L.; DAN DICKO, L. ; DAOUDA, H. ;
semblables à ceux de KONE (1980) qui ont montré
DELMAS, M. ; de SOUZA, S. ; GARBA, M. ;
que le venin de Naja nigricollis et l'antivenin
GUINKO, S.; KAYONGA, A. ; NGOLO, D. ;
(Securidaca 10ngepedoncuiataJ ont des effets
RAYNAL, J. L. et SAADOU, M. (1981).
bloquants sur la transmission de l'influx nerveux et
Contribution aux études ethnobotaniques et
que ces substances agiraient en bloquant les
floristiques au Niger. Ed. ACCT, Paris, 250p,
récepteurs cholinergiques de la membrane post-
ISBN 92-9028-009-3
synaptique. Selon BON (1994), les venins de
serpents contiennent des b-neurotoxines qui
- ADJANOHOUN, E. J.; ADJAKIDJE, V. ; AHYI,
bloquent la transmission neuromusculaire en
A.M.R. ; AKE-ASSI, L.; AKOEGNINOU, A. ;
empêchant la libération de l'acétylcholine par les
d'ALMEIDA, J. ; APOVO, F. ; BOUKEF, K. ;
terminaisons nerveuses· et des a-neurotoxines qui
CHADARE, M. ; CUSSET, G. ; DRAMANE, K. ;
bloquent la transmission neuromusculaire en se
EYME, J. ; GASSITA, J-N. ; GBAGUIDI, N. ;
liant, comme le.curare, sur le récepteur
GOUDOTE, E. ; GUINKO, S.; HOUNGNON,
cholinergique présent sur les fibres musculaires
P. ; ISSA, LO ; KEITA, A. ; KINIFFO, H. V. ;
squelettiques. Le mécanisme d'action de Ba el As
KONE-BAMBA, D. ; MUSAMPA, NSEYYA, A. ;
passerait par la mise en jeu de principes actifs de
SAADOU, M ; SODOGANDJI , Th. ; de
type neurotoxines,
SOUZA, S. ; TCHABI, A. ; ZINSOU DOSSA, C.
et ZOHOUN, Th. (1989). Contribution aux
L'interaction venin-antivenin montre que lorsque
études ethnobotaniques et floristiques en
Ba est placé avant As, As présente un effet
République du BENIN. Ed. ACCT, Paris, 895p,
agoniste, potentialisant l'effet de Ba et quand c'est
ISBN 92-9028-152-9
As qui est placé avant Ba, Ba induit un effet
antagoniste. Le prétraitement de la jonction
- BON, C. (1994). Venins de serpents et
neuromusculaire par l'extrait antivenimeux le
pharmacopées ln Les serpents Ed. Bordas, pp.
préserve de l'effet du venin. Ces résultats sont
194-203.
similaires à ceux obtenus par DATTE en 1996
avec l'extrait aqueux de Caesalpinia bonduc
- BURKILL, H. M. (1985). The useful plants of
(EACB) ct le venin de Bitis arietans. Selon cet
West Tropical Africa Vol. 1, royal Botanic
auteur, EACB pourrait induire des effets
Gardens Ed. Kent, England.
antagonistes vis à vis du venin, attribués à une
inhibition de la libération de l'acétylcholine ou à
Rev. CAMES - Série A, vol. 02, 2003
83
ScœncesetMédecme
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bonduc (Caesalpiniacée). Thèse Doctorat 3ème
venin de Naja nigricollis (Elapidé de Côte
cycle, Centre Univ. Cocody (Abidjan): n021 0/94,
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Rev. CAMES - Série A, vol. 02, 2003
84
Sciences et Médecine
Les effets du venin d'un serpent (Bitis
~ The effects of snake venom (Bitis arietans)
arietans) et d'une plante antivenimeuse de
ra
and
antivenimous
plant
of
African
la
Pharmacopée
Africaine
(Annona
E Pharmacopoeia (Annona senegalensis)
senegalensis) ont été testés au niveau de la
E have been tested on frog neuromuscular
jonction
nerf
sciatique
muscle
:::::1
junction. We have used an experimental
gastrocnémien de crapaud (Buffo regularis),
tJ)
design containing a stimulator (KAT,II), a
Pour cela, nous avons utilisé un dispositif
nerve cuve and cathodic oscilloscope. The
comportant un stimulateur de type KATJI,
nervous and muscular electric phenomena,
une cuve à nerf et un oscilloscope
appearing on the oscilloscope's screen are
cathodique. Les phénomènes électriques
filmed with camera. The toxicological studies
nerveux et musculaires apparaissant sur
show that the venom with a LD50 of 2,28
l'écran de l'oscilloscope sont filmés à l'aide
mg/kg of corporeal weight is highly toxic
d'une caméra. L'étude toxicologique montre
when the antivenin is not at ail toxic, ln
que le venin qui a une DL50 de 2,28 mg/kg
normal experimental conditions, after
de poids corporel est hautement toxique
stimulation of nerve, we obtain a nerve
alors que l'antivenin ne l'est pas du tout. En
action potential followed by a muscle action
conditions normales d'expérience, après
potential. The application of venom or
stimulation du nerf sciatique, nous obtenons
antivenin decreases the muscle action
un potentiel d'action nerveux suivi d'un
potential, which can disappear with time.
potentiel d'action du muscle innervé.
These substances have curare-Iike action,
L'application du venin ou de l'antivenin
provoking a blockage of passage of nervous
diminue l'amplitude du potentiel d'action
influx at the neuromuscular junction. The
musculaire qui peut même disparaître avec
interaction between venom and antivenin
le temps. Ces substances ont une action
shows that the antivenin will be'efficacious
"curare-like", provoquant un blocage du
when it is used like preventive treatment
passage de l'influx nerveux au niveau de la
than curative.
jonction neuromusculaire. L'interaction
venin-antivenin montre que l'antivenin serait
Key Words: African Pharmacopoeia;
efficace lorsqu'il est utilisé en traitement
Annona senegalensis; antiven in; Bitis
préventif que curatif.
arietans ; curare-like; frog ; neuromuscular
junction ; preventive treatment ; Venom.
Mots-clés :
Annona
senegalensis ;
antivenin ; Bitis arietans ; crapaud ; curare-
like ; jonction n e u rom use u 1 air e
Pharmacopée
Africaine ;
traitement
préventif; venin,
Rev. CAMES - Série A, vol. 02, 2003
.85